來(lái)永廣 王玉霞

血清乙型肝炎病毒載量的研究

來(lái)永廣 王玉霞

目的 研究血清病毒載量與乙型肝炎病毒基因型的關(guān)系。方法 選擇在2010年3月至2012年是本院收治的100例乙型肝炎感染患者作為研究對(duì)象, 分別對(duì)乙型肝炎感染患者病毒基因型和血清病毒載量進(jìn)行有效的檢測(cè)和記錄, 并對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行有效的分析。結(jié)果 通過(guò)對(duì)100例乙型肝炎感染患者基因型進(jìn)行檢測(cè), 其中B型有36例, C型有56例, BC型有8例。C型病毒基因患者HBV-DNA為(7.01±1.16)log值, HBeAg為66.7%, 均比B型病毒基因患者高, 而C型病毒基因患者 HBeAb陽(yáng)性率為33.3% , 比B型病毒基因患者低。結(jié)論 乙型肝炎患者病毒基因型多為C型, 乙型肝炎病毒C型基因患者血清病毒載量明顯高于乙型肝炎病毒B型基因患者, 臨床上依據(jù)血清病毒載量, 明確乙型肝炎病毒基因型。

血清；乙型肝炎病毒；載量

臨床研究表明, 乙型肝炎病毒可分為A至H8個(gè)不同基因型。不同基因型具有不同的在血清病毒載量, 對(duì)預(yù)后效果也有所不同。因此, 醫(yī)務(wù)人員在對(duì)乙型肝炎病毒感染患者進(jìn)行檢診療時(shí), 可通過(guò)血清病毒載量, 明確病毒基因型, 為乙型肝炎臨床治療提供重要依據(jù)。本文就山東省莒縣人民醫(yī)院肝病科于收治的100例乙型肝炎感染患者作為研究對(duì)象, 對(duì)患者基因型和血清病毒載量進(jìn)行有效的檢測(cè)和分析, 具體情況如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇在2010年3月至2012年本院收治的100例乙型肝炎感染患者作為研究對(duì)象, 其中男54例, 女47例, 患者年齡在16~68歲之間, 平均32. 7歲；其中慢性乙型肝炎有45例,原發(fā)性肝癌有18例, 乙型肝炎并發(fā)肝硬化有37例。對(duì)所有患者進(jìn)行組織活檢、病理檢查和臨床診斷后, 均確診為乙型肝炎感染患者, 并將重疊感染患者排除, 且所有患者在檢測(cè)前, 未采取任何抗病毒預(yù)防和治療措施。

1.2 方法

1.2.1 檢測(cè)試劑 在乙型肝炎病毒基因型和血清病毒載量實(shí)驗(yàn)中, 所需的檢測(cè)試劑主要包括乙型肝炎病毒熒光試劑盒、乙肝三系試劑、乙型肝炎病毒基因芯片、引物及探針等。

1.2.2 檢測(cè)方法 ①乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物的檢測(cè)。血清病毒載量主要通過(guò)熒光定量PCR進(jìn)行檢測(cè), 而乙肝三系則主要通過(guò)具有化學(xué)發(fā)光作用的為微粒子型免疫儀進(jìn)行檢測(cè)。②乙型肝炎病毒基因型的檢測(cè)。提取乙肝病毒基因與PCR檢測(cè)條件設(shè)置。檢測(cè)人員必須按照具體的操作要求, 將乙肝病毒基因有效的提出。PCR檢測(cè)條件：使乙型肝炎病毒模板及其PCR 檢測(cè)液在PCR檢測(cè)擴(kuò)增儀中進(jìn)行有序循環(huán), 具體如下, 在溫度為94 ℃條件進(jìn)行5min預(yù)變性后, 按照溫度94 ℃條件預(yù)變性30s——溫度50℃條件預(yù)變性30s——溫度72 ℃ 條件預(yù)變性30s的順序進(jìn)行循環(huán), 共需循環(huán)35次, 最后再將其放入溫度為72℃條件下進(jìn)行延伸, 時(shí)間為5min?；蛐酒s交及顯色。當(dāng)把PCR反應(yīng)檢測(cè)形成產(chǎn)物放置到溫度為98 ℃進(jìn)行5min變性后, 快速將其放置到冰浴中, 時(shí)間為5min, 然后取出2L變性物, 把適量雜交液加入變性物后混勻, 并取適量滴至基因芯片中的雜交艙內(nèi), 然后將基因芯片快速放置到溫度為39 ℃的保溫箱中, 時(shí)間為30min, 即可完成基因芯片雜交試驗(yàn)［1］。將基因芯片取出, 然后對(duì)其進(jìn)行有效的清洗后, 將剩余液體清除, 然后再向芯片雜交艙添加適量的現(xiàn)實(shí)液體, 放置到溫度為39 ℃的保溫箱中, 時(shí)間為40min,最后將芯片雜交艙清除, 同時(shí)用蒸餾水對(duì)芯片顯色區(qū)域進(jìn)行有效的清洗, 放置到溫度為39 ℃ 條件下進(jìn)行烘干, 最后利用芯片檢測(cè)以及相關(guān)軟件, 讀取芯片檢測(cè)數(shù)據(jù)。乙型肝炎病毒脫氧核糖核酸序列對(duì) PCR擴(kuò)增后的產(chǎn)物和p GEM-T載體之間的連接；與大腸埃希菌間的轉(zhuǎn)化；與菌落間的篩選等進(jìn)行有效的鑒定, 并對(duì)陽(yáng)性克隆進(jìn)行有效檢查和分析, 最后對(duì)乙型肝炎病毒基因型和基因型芯片測(cè)試結(jié)果進(jìn)行有效的對(duì)比。

2 結(jié)果

2.1 乙型肝炎病毒基因型

通過(guò)對(duì)100例乙型肝炎感染患者基因型進(jìn)行檢測(cè), 其中B型有35例, C型有57例, BC型有8例。乙型肝炎病毒基因型檢測(cè)結(jié)果與其基因芯片測(cè)試結(jié)果相符合。

2.2 乙型肝炎病毒基因型與血清病毒載量關(guān)系

由表1可知, C型病毒基因患者HBV-DNA為(7.01±1.16) log值, HBeAg為66.7%, 均比B型病毒基因患者高, 而C型病毒基因患者 HBeAb陽(yáng)性率為33.3% , 比B型病毒基因患者低。

表1 乙型肝炎病毒基因型與血清病毒載量關(guān)系分析

3 討論

乙型肝炎病毒基因型能夠?qū)σ倚透窝撞《靖腥咀儺愡M(jìn)行有效的反應(yīng), 是乙型肝炎病毒感染患者預(yù)防和質(zhì)量的重要影響因素, 并形成一定的區(qū)域性特點(diǎn)。通過(guò)對(duì)乙型肝炎病毒基因型進(jìn)行研究后, 發(fā)現(xiàn)大多數(shù)乙型肝炎病毒感染患者基因型主要以C 型及B 型較多。本文通過(guò)對(duì)本院收治的100例乙型肝炎病毒感染患者基因型進(jìn)行檢測(cè), 發(fā)現(xiàn)B型有35例, C型有57例, BC型有8例。充分說(shuō)明了乙型肝炎病毒基因型檢測(cè)結(jié)果與其基因芯片測(cè)試結(jié)果相符合［2］。

不同乙型肝炎病毒基因序列存在的差異性, 導(dǎo)致血清病毒蛋白表達(dá)受到一定的影響, 同時(shí)不同的乙型肝炎病毒基因, 其病毒復(fù)制情況、血清病毒載量及發(fā)病機(jī)制也將有所不同, 從而導(dǎo)致乙型肝炎病毒感染患者病癥表現(xiàn)、預(yù)后效果均有所不同。現(xiàn)階段很多醫(yī)學(xué)研究者認(rèn)為, 乙型肝炎病毒C基因型容易對(duì)患者肝臟造成嚴(yán)重?fù)p害, 預(yù)后效果較差。有關(guān)研究表明, 乙型肝炎病毒B基因型抗原體系中的血清更換幾率較高, 發(fā)生時(shí)間較早, 病毒復(fù)制時(shí)間相對(duì)較短, 而C基因型則相反, 因此容易對(duì)患者肝臟造成嚴(yán)重?fù)p害［3］。本研究結(jié)果顯示, C型病毒基因患者HBV脫氧核糖核酸為(7.01±1.16)log值, 乙型肝炎E抗原陽(yáng)性率為66.7%, 均比B型病毒基因患者高, 而C型病毒基因患者HBVE抗體陽(yáng)性率為33.3% , 比B型病毒基因患者低。證明了乙型肝炎病毒C基因型患者存在較高的血清病毒載量, 并對(duì)病毒預(yù)后結(jié)果造成嚴(yán)重影響, 必須引起醫(yī)務(wù)人員的高度重視。

總之, 大多數(shù)的乙型肝炎患者病毒基因型均為C型, 且乙型肝炎病毒C型基因患者血清病毒載量明顯高于乙型肝炎病毒B型基因患者, 并對(duì)病毒預(yù)后效果具有一定的影響, 臨床上依據(jù)乙型肝炎病毒血清病毒載量, 明確其基因型, 做好相關(guān)預(yù)后, 以保證病毒預(yù)后效果。

［1］ 陳成進(jìn).乙型肝炎病毒檢測(cè)技術(shù)的研究進(jìn)展.職業(yè)與健康, 2011, 9(8):89-90.

［2］ 汪文明,簡(jiǎn)芳,楊夕,等.乙型肝炎患者3種血清標(biāo)志物模式HBV DNA含量比較.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床, 2010,12(19):76-77.

［3］ 韓立兵,龐曉鷹,于立新等.乙型肝炎病毒前S1抗原與病毒復(fù)制水平的相關(guān)性.實(shí)用臨床醫(yī)藥雜志, 2010,3(23):54-55.

276500 山東省莒縣人民醫(yī)院肝病科(來(lái)永廣) ；山東省莒縣浮來(lái)山衛(wèi)生院（王玉霞）