李濤，趙云，陳增潔

（1.揭陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院，廣東揭陽 522051；2.濰坊職業(yè)學(xué)院，山東濰坊 261041）

龍眼（Dimocarpus longan Lour.）為無患子科龍眼屬常綠果樹，喬木。果實俗名桂圓，為我國著名的亞熱帶水果。原產(chǎn)于我國南部和越南北部的南亞熱帶區(qū)域，在我國已有2 000多年栽培歷史，栽培面積和產(chǎn)量均居世界首位，福建、廣東、廣西及臺灣等省是主產(chǎn)區(qū)[1]。龍眼核的重量占龍眼果實鮮重的17%。研究表明，龍眼核中含有較為豐富的黃酮，對a-葡萄糖苷酶具有良好的抑制作用[2]。多年來，由于沒有很好的綜合利用，每年廢棄的龍眼核重量達幾十萬t，這既浪費資源，又污染環(huán)境[3]。

本文采用乙醇為溶劑，用微波的方法對龍眼核中的黃酮進行了提取，研究了各種因素對提取效果的影響，同時通過正交法對龍眼核中黃酮的微波提取工藝進行了分析，確定了龍眼核總黃酮微波提取的最佳工藝，以便為龍眼核的開發(fā)利用提供一定的參考。

1 儀器與試劑

1.1 主要設(shè)備儀器

722光柵分光光度計：上海精密科學(xué)儀器有限公司；WD700G格蘭仕微波爐：廣東格蘭仕集團有限公司；SHB-ⅢA循環(huán)水式多用真空泵：鄭州長城科工貿(mào)有限公司；JA2003電子天平：上海精科；FZ-102微型植物粉碎機：東西儀科技有限公司。

1.2 試劑

蘆丁標準品：中國藥品生物制品檢定所；氫氧化鈉、亞硝酸鈉、硝酸鋁、乙醇均為分析純。新鮮龍眼核采自廣東省揭陽市。

2 方法

2.1 標準曲線的繪制[4]

分別移取 0、0.5、1.0、1.5、2.0、3.0 mL 蘆丁標準溶液（0.100 0 mg/mL）于6個25 mL容量瓶中，各加入5%NaNO2溶液0.75 mL，搖勻后靜置6 min，再往各容量瓶中加入5%Al（NO3）3溶液0.75 mL，搖勻后靜置6 min，最后加入1 mol/L NaOH溶液10 mL，用30%乙醇溶液定容，搖勻后靜置10 min，以不含蘆丁標準溶液作為參比于波長為510 nm處測定吸光度。根據(jù)所測吸光度，以吸光度為縱坐標，蘆丁溶液濃度為橫坐標，得吸光度A與蘆丁含量C的回歸方程：A=11.132C+0.032 8，R2=0.999 9。

2.2 龍眼核黃酮提取及得率計算

準確稱取1.000 g經(jīng)干燥的龍眼核粉置于燒瓶中，按照要求加入一定濃度的乙醇，微波加熱一定時間，過濾，濾液用30%乙醇定容至100 mL，作為待測液，取1.5 mL待測液于50 mL容量瓶中，按照測定蘆丁標準液吸光度的步驟測定吸光度A。龍眼核黃酮得率可按下列公式計算：

式中：C為根據(jù)回歸方程計算得到的總黃酮濃度，（mg/mL）；100和 50為稀釋倍數(shù)；1.5 為取 1.5 mL待測液；m為龍眼核質(zhì)量，g。

3 結(jié)果與分析

3.1 單因素試驗

3.1.1 乙醇濃度對黃酮得率的影響

在微波時間90 s，功率為280 W，料液比1∶30條件下，分別選取乙醇濃度為15%、30%、45%、60%、75%、90%進行微波提取實驗，提取后按2.2測其吸光度，計算得率，結(jié)果見圖1。

圖1 乙醇濃度對黃酮得率的影響Fig.1 Effects of different concentration of ethanol on the yield of flavonoids

微波浸提要求溶劑必須具有一定的極性以便能吸收微波進行內(nèi)部加熱，并且對浸提目標具有較好的溶解能力[5]。由圖1可以看出，隨著乙醇體積分數(shù)的增大，總黃酮的得率升高，當乙醇體積分數(shù)為45%時，總黃酮得率達到最大值，但乙醇的體積分數(shù)再增大時，總黃酮得率反而降低，所以選擇乙醇濃度為45%進行下一步實驗。

3.1.2 料液比對黃酮得率的影響

在微波時間90 s，功率為280 W，乙醇濃度為45%條件下，分別選取料液比 1∶10、1∶20、1∶30、1∶40、1∶50進行微波提取實驗，提取后按2.2測其吸光度，計算得率，結(jié)果見圖2。

圖2 料液比對黃酮得率的影響Fig.2 Effects of the ratio of material and liquid on the yield of flavonoids

由圖2可知，得率隨料液比的增加呈逐漸升高的趨勢，但當料液比達到1∶20后得率上升不明顯，基于成本考慮，選擇料液比為1∶20。

3.1.3 微波時間對黃酮得率的影響

功率為280 W，乙醇濃度為45%條件下，料液比1 ∶20 條件下，分別選取時間為 30、60、90、120、150、180 s進行微波提取實驗，提取后按2.2測其吸光度，計算得率，結(jié)果見圖3。

圖3 微波時間對黃酮得率的影響Fig.3 Effects of microwave extraction time on the yield of flavonoids

由圖3可以看出，黃酮得率隨時間延長逐漸升高，在150 s以后升高不明顯?？赡苁且驗樗S酮類物質(zhì)已基本溶出，所以增加提取時間不能使得率升高明顯，所以選擇提取時間為150 s。

3.1.4 微波功率對黃酮得率的影響

在微波時間150 s，料液比1∶20，乙醇濃度為45%條件下，分別選取功率料液比140、280、420、560 W進行微波提取實驗，提取后按2.2測其吸光度，計算得率，結(jié)果見圖4。

圖4 微波功率對黃酮得率的影響Fig.4 Effects of microwave power on the yield of flavonoids

由圖4可以看出，隨著功率的增大，黃酮得率先升高達到最大值后逐漸降低的趨勢。說明隨著微波功率的增加，細胞的破壞程度增大，分子運動加劇，浸出的總黃酮就越多，但過高的微波功率可能使細胞過于破碎，容易吸附黃酮類化合物而降低了提取率。另外過高的微波功率在短時間內(nèi)就易引起液體沸騰，促使乙醇揮發(fā)的更多，影響提取率。因此，選擇微波功率為420 W。

3.2 正交試驗確定提取的最佳條件

在單因素試驗的基礎(chǔ)上，選擇乙醇濃度、料液比、微波加熱時間和微波功率作為考察因素，進行L9（34）正交試驗，實驗因素和水平見表1，結(jié)果與分析見表2。

表1 因素水平表Table 1 The table of factors and level

表2 正交試驗結(jié)果Table 2 Result of orthogonal experiments

由表2可知，影響龍眼核總黃酮得率的因素主次順序為：乙醇濃度（A）＞功率（D）＞料液比（B）＞時間（C），龍眼核總黃酮微波提取的最佳工藝條件為：A2B1C3D3，即乙醇濃度為45%，料液比為1∶20，微波時間為150 s，微波功率為560 W。按此最優(yōu)組合平行試驗3次，平均總黃酮提取率為3.78%。

4 結(jié)論與討論

通過單因素試驗和正交試驗確定微波法提取龍眼核總黃酮的最佳條件如下：乙醇濃度45%，料液比1∶20，微波加熱時間150 s，微波功率560 W。按此最優(yōu)組合平行試驗3次，平均總黃酮提取率為3.78%。采用微波技術(shù)對黃酮活性物質(zhì)的提取具有效率高、節(jié)省時間、節(jié)能及污染小等優(yōu)點，該法對龍眼核中黃酮的提取具有明顯優(yōu)勢，為龍眼的進一步研究和合理利用提供了一定參考。

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[1]黃鎖義,劉?；?黎海妮,等.超聲波提取龍眼殼總黃酮及鑒別[J].時珍國醫(yī)國藥,2007,18(2):461

[2]黃儒強,劉學(xué)銘,曾孝慶.龍眼核提取物對a－葡萄糖苷酶抑制作用的研究[J].現(xiàn)代食品科技,2005,21(2):62－63

[3]肖更生,黃儒強,曾孝慶,等.龍眼核的營養(yǎng)成分[J].食品科技,2004(1):93－94

[4]劉義慶.板栗殼中黃酮類生物活性成分的提取與微乳薄層分離分析[J].江漢大學(xué)學(xué)報,2008,36(4):33－35

[5]羅楊合,陳振林,謝復(fù)青,等.馬蹄皮棕色素的微波提取工藝研究[J].中國調(diào)味品,2009,34(1):92－95