毛久浪，王 玨，毛晨蕾，吳慧明

(浙江農(nóng)林大學(xué)農(nóng)業(yè)與食品科學(xué)學(xué)院，浙江臨安 311300)

苯醚甲環(huán)唑 (difenoconazole)，化學(xué)名為順，反-3-氯-4-［4-甲 基-2-(1H-1，2，4-三 唑-1-基 甲基)-1，3-二啞戊烷-2-基］苯基4-氯苯基醚，結(jié)構(gòu)如圖1所示［1－2］。屬于三唑類內(nèi)吸性殺菌劑，主要抑制麥角甾醇的生物合成，破壞細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)與功能［3］。多用于防治豆類、小麥、馬鈴薯、瓜果類、果樹等作物的真菌病害。

圖1 苯醚甲環(huán)唑結(jié)構(gòu)式

近年來，因出口毛豆中苯醚甲環(huán)唑殘留超標(biāo)引發(fā)的外貿(mào)退賠問題時有發(fā)生，而商品毛豆中苯醚甲環(huán)唑殘留的檢測方法和相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)未見報道。已報道的苯醚甲環(huán)唑殘留檢測方法多數(shù)是關(guān)于土壤和水體的［4－6］，或農(nóng)產(chǎn)品中殘留的快速檢測［7］。

QuEChERS是近年使用的1種農(nóng)藥殘留快速檢測方法，適用于各種分子結(jié)構(gòu)和極性農(nóng)藥殘留的提取凈化，具有提高分析速度、減少試劑用量、適于自動化分析，且靈敏、簡便、快速、高效等的獨(dú)特優(yōu)勢［8］。運(yùn)用QueCHERS法檢測苯醚甲環(huán)唑也有相關(guān)報道，但與氣相色譜-質(zhì)譜的聯(lián)用［9－10］，使成本升高和普及性下降。因此，結(jié)合QuEChERS前處理的方法，優(yōu)化儀器檢測條件，旨在通過建立普通GC-ECD法，快速準(zhǔn)確檢測毛豆樣品中苯醚甲環(huán)唑的殘留量。

1 材料與方法

1.1 材料

采自杭州、臨安、寧波、諸暨4個產(chǎn)地的68批次毛豆產(chǎn)品。

1.2 儀器與試劑

島津GC2010氣相色譜儀 (ECD檢測器)帶自動進(jìn)樣器，色譜柱 HP-1(30 m×0.32 mm×0.25 μm)，食品加工機(jī) (4184，博朗電器)，高速勻漿機(jī) (T25D，IKA)，TDL-5-A離心機(jī) (上海飛鴿公司)，高速冷凍離心機(jī) (R21，熱點(diǎn))。

丙酮、乙酸乙酯、乙腈、氯化鈉和硫酸鎂均為市售化學(xué)純試劑;N-丙基乙二胺 (PSA，上海月旭)，苯醚甲環(huán)唑標(biāo)準(zhǔn)品 (≥98%，上海振翔)

1.3 樣品處理

1.3.1 樣品預(yù)處理

將待檢測的毛豆或帶莢毛豆樣品與純水按質(zhì)量比1∶1混勻后，在食品加工機(jī)中勻漿混勻，取200 g混合物，待測。

1.3.2 樣品前處理

稱取勻漿后的樣品10 g，置于50 mL離心管內(nèi)，加入10 mL乙腈，劇烈振蕩1 min，加入1 g氯化鈉和4 g硫酸鎂，劇烈振蕩1 min。3 000 r·min－1離心3 min，取1.5 mL上清液于裝有50 mg PSA和250 mg硫酸鎂的2 mL離心管中，劇烈振蕩1 min，4 ℃10 000 r·min－1離心1 min，取1 mL 上清液至試管，N2吹干后用1 mL乙酸乙酯溶解殘留物，待測。

1.4 儀器條件

色譜柱:Agilent HP-1石英毛細(xì)管柱 (30 m×0.32 mm×0.25 μm);載氣:高純N2(≥99.999%);進(jìn)樣口280℃，檢測器290℃，柱箱初始溫度160℃，以20℃·min－1升到255℃，保持6 min，再以50℃·min－1升到270℃保持6 min;每分鐘柱流量5 mL，尾吹30 mL，不分流進(jìn)樣1 μL。在上述儀器條件下，苯醚甲環(huán)唑的保留時間為9.8 min。

1.5 添加回收方法

稱取空白對照樣品10 g，分別添加適量的苯醚甲環(huán)唑標(biāo)準(zhǔn)溶液，將樣品中濃度設(shè)為0.001，0.010和0.100 mg·kg－1，每濃度重復(fù)5次，按1.3.2節(jié)方法測定苯醚甲環(huán)唑殘留量，并計算添加回收率。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性相關(guān)性

準(zhǔn)確稱取10 mg苯醚甲環(huán)唑標(biāo)準(zhǔn)品于10 mL容量瓶中，用丙酮溶解并定容至刻度。用乙酸乙酯分別稀釋為0.001，0.005，0.010，0.050 和 0.100 mg·kg－1的標(biāo)準(zhǔn)溶液，并在上述儀器條件下進(jìn)樣檢測，以進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)，ECD響應(yīng)值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 (圖2)。苯醚甲環(huán)唑的回歸方程為y=3 229x－0.366 2，相關(guān)系數(shù)r=0.999。

圖2 苯醚甲環(huán)唑標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.2 方法的精確度與精密度

在上述樣品處理方法和儀器條件下，苯醚甲環(huán)唑的最低檢測濃度為0.001 mg·kg－1。當(dāng)添加濃度為0.001，0.010和0.100 mg·kg－1時，按上述方法和步驟進(jìn)行檢測。毛豆仁和帶莢毛豆的平均添加回收率80.8%～95.6%和90.7%～101.9%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為1.7%～4.9%和9.3%～14.8%(表1)。苯醚甲環(huán)唑的精確度和準(zhǔn)確度，變異系數(shù)都在《農(nóng)藥殘留試驗準(zhǔn)則》允許范圍內(nèi)，說明方法符合農(nóng)藥殘留分析與檢測技術(shù)要求。

表1 苯醚甲環(huán)唑的添加回收

2.3 毛豆樣品中苯醚甲環(huán)唑殘留量的檢測

我國暫未規(guī)定毛豆中苯醚甲環(huán)唑的最大殘留限量標(biāo)準(zhǔn) (MRL)，CAC則規(guī)定了干大豆中為0.020 mg·kg－1。將檢測結(jié)果從低到高列于表2中。結(jié)果顯示，在檢測的68批次樣品中 (20個毛豆仁樣品，48個帶莢毛豆)，毛豆仁中苯醚甲環(huán)唑的殘留量均低于 0.020 mg·kg－1，最高為0.011 mg·kg－1(寧波4);4個毛豆仁樣品中苯醚甲環(huán)唑殘留量低于0.001 mg·kg－1，占20%。13個帶莢毛豆樣品的苯醚甲環(huán)唑殘留量大于0.020 mg·kg－1，最高達(dá)到0.126 mg·kg－1，超標(biāo)率達(dá)27.1%。

試驗結(jié)果顯示，杭州、臨安、寧波、諸暨4產(chǎn)地毛豆仁中苯醚甲環(huán)唑的殘留量都較小，只有寧波的1個樣品超出0.010 mg·kg－1，但低于MRL值。毛豆仁中平均殘留量以寧波略高，達(dá)0.005 mg·kg－1，杭州最小，為0.003 mg·kg－1。帶莢毛豆中苯醚甲環(huán)唑的殘留量明顯高于毛豆仁，杭州、臨安、寧波、諸暨4地的超標(biāo)率分別為25%，25%，33%，25%，未檢出率分別為16.7%，25.0%，8.3%和16.7%;寧波和諸暨平均殘留量分別為0.023 和0.022 mg·kg－1，高于 MRL。

3 小結(jié)與討論

試驗結(jié)果表明，用QueCHERS和GC-ECD法可快速檢測毛豆樣品中苯醚甲環(huán)唑的殘留量。對68個不同產(chǎn)地的毛豆仁和帶莢毛豆檢測結(jié)果顯示，不同地區(qū)因耕作制度、用藥習(xí)慣、氣候條件等的差異，苯醚甲環(huán)唑在毛豆上的殘留量有一定差異。在諸暨和寧波，帶莢毛豆中的殘留量較高，12批次樣品的均值大于0.020 mg·kg－1;同時，帶莢毛豆殘留的苯醚甲環(huán)唑明顯高于毛豆仁。前者各地均值0.013～0.023 mg·kg－1，毛豆仁則為 0.003 ～0.005 mg·kg－1，僅為帶莢時的18% ～31%。由此表明，去莢可有效去除殘留于豆莢上殘留的苯醚甲環(huán)唑，降低食用毛豆時暴露于苯醚甲環(huán)唑的風(fēng)險。

表2 毛豆和帶莢毛豆中苯醚甲環(huán)唑的殘留量

［1］Yu Y J，Shi D，Dai D J，et al．Pesticide was put into totally［M］．Beijing:Agicultural Press of China，2008:239－240．

［2］李海華，廖福廣，王鵬，等．殺菌劑苯醚甲環(huán)唑的制備［J］．北京理工大學(xué)學(xué)報，2006，26(4):365－368．

［3］Khan M F R，Smith L J．Evaluating fungicides for controlling Cerosporaleaf spoton sugar beet［J］．Crop Prot，2005，24:79－86．

［4］安晶晶，劉新剛，董豐收，等．苯醚甲環(huán)唑在番茄和土壤中的殘留動態(tài)研究［J］．環(huán)境科學(xué)研究，2009，22(7):688－692．

［5］張志勇，王冬蘭，張存政，等．苯醚甲環(huán)唑在水稻和稻田中的殘留［J］．中國水稻科學(xué)，2011，25(3)339－342．

［6］馮雪玲，紀(jì)然，曹維良，等．氣相色譜法測定水和土壤中苯醚甲環(huán)唑的殘留量［J］．化工環(huán)保，2007，27(1):93－96．

［7］王雯，梁穎，錢建亞，等．液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測番茄中苯醚甲環(huán)唑殘留 ［J］．江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報，2011，27(3):668－671．

［8］邵華，金芬，楊錨，等．QuEChERS方法在我國農(nóng)藥殘留分析中的應(yīng)用與前景 ［J］．農(nóng)藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，2007:120－122．

［9］薛曉航，戴守輝，張璐珊，等．QuEChERS/GC-MS快速分析土壤中的苯醚甲環(huán)唑殘留 ［J］．農(nóng)藥學(xué)學(xué)報，2010，12(3):309－312．

［10］胡西洲，程運(yùn)斌，胡定金．QuEchERS法測定蔬菜中有機(jī)磷類農(nóng)藥多殘留分析 ［J］．中國測試技術(shù)，2006，32(3):132－133．