石亮程，賀 駿，何 玲，王 偉 (湖南省長(zhǎng)沙市婦幼保健院，湖南 長(zhǎng)沙 410007)

子宮頸癌是常見(jiàn)的婦科生殖系統(tǒng)腫瘤之一，其病死率僅次于乳腺癌。而子宮頸癌是目前癌癥中唯一病因明確的癌癥，HPV確認(rèn)為引發(fā)子宮頸癌的根本性致病因子。筆者于2008年11月～2012年11月對(duì)13 542例婦女進(jìn)行HPV感染的檢測(cè)，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料:選擇2008年11月～2012年11月在我院門診或住院的女性患者共計(jì)13 542例，年齡最小15歲，最大85 歲，平均(32.5 ±9.25)歲。

1.2 儀器與試劑:儀器選擇博日PCR擴(kuò)增儀和德國(guó)Biometra PCR擴(kuò)增儀，HPV檢測(cè)系統(tǒng)(潮州凱普，含HPV－DNA提取試劑盒、HPV－DNA擴(kuò)增試劑盒、醫(yī)用快速雜交儀、HPV檢測(cè)試劑盒)

1.3 采集和處理:由臨床?？漆t(yī)師進(jìn)行采取:暴露宮頸，用棉拭子擦去宮頸口多余分泌物，用取樣刷置于宮頸口順時(shí)針?lè)较蛐D(zhuǎn)5～6周以獲取足量的宮頸脫落上皮細(xì)胞。將取樣后的宮頸刷放入含有細(xì)胞脫洗保存液專用采集管中，于3 d內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。DNA的提取:將宮頸細(xì)胞保存液充分震蕩混勻，取500 μl保存液于高溫滅菌處理1.5 ml離心管中以14 000 r/min離心5 min，棄上清液;加入Ⅰ液400 μl，充分混勻，100℃金屬浴15 min后，加入提取液Ⅱ400 μl，充分混勻，14 000 r/min 離心 5 min，去上清;再14 000 r/min離心2 min，完全除去殘余的上清液，打開蓋子5～10 min，以讓Ⅱ液充分揮發(fā)，加入 Ⅲ液60 μl充分混勻.加上清1 μl于已分裝擴(kuò)增試劑的擴(kuò)增管中(擴(kuò)增管內(nèi)為22.75 mix液加 0.75 Taqman)。

DNA的擴(kuò)增:95℃預(yù)變性9 min;95℃20 s→55℃30 s→72℃30 s共40個(gè)循環(huán)，72℃延伸5 min。

DNA的雜交:將雜交膜封好后調(diào)節(jié)雜交儀溫度到45℃，加入已45℃預(yù)溫雜交液 800 μl預(yù)雜交2 min，排盡，加入已45℃溫浴雜交液500 μl，將擴(kuò)增產(chǎn)物100℃金屬浴5 min后于冰水浴中2 min，將其全部加入對(duì)應(yīng)的雜交液中雜交10 min，排盡雜交液，調(diào)溫至25℃加入500 μl封阻液預(yù)封阻，排盡，加入 500 μl封阻液封阻 5 min，排盡，加入酶標(biāo) 500 μl 4 min，排盡，用A液洗滌膜4次，調(diào)溫至36℃，加入顯色液顯色5 min，加入B液洗滌膜條，判讀結(jié)果。

1.4 結(jié)果判斷:肉眼觀察檢測(cè)結(jié)果，當(dāng)兩個(gè)質(zhì)控點(diǎn)出現(xiàn)時(shí)若相應(yīng)位置出現(xiàn)斑點(diǎn)即為對(duì)應(yīng)的陽(yáng)性，多個(gè)斑點(diǎn)的出現(xiàn)則為多重感染。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:采用SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HPV分型:13 542例檢測(cè)者中共4 365例感染HPV，總感染率為32.23%，其中高危型感染率為24.20%，低危為8.03%，其中高危感染者中多重感染所占比例為22.31%，數(shù)據(jù)詳見(jiàn)表1。

表1 HPV感染

2.2 HPV亞型分布:各種基因型均有檢測(cè)，感染率最高的型別為52(16.3%)其他?；蛐头植?16(14.9%)，58(11.3%)，6(8.4%)，11(7.4%)，33(5.5%)，CP8304(6.00%)，68(5.2%)，53(5.1%)數(shù)據(jù)見(jiàn)表2。

表2 HPV亞型分布

2.3 HPV年齡分布:按檢測(cè)者的年齡不同，共分為4個(gè)組，年齡不明不列入統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)，HPV感染數(shù)據(jù)見(jiàn)表3。

表3 HPV感染年齡分布

2.4 HPV不同年份的感染分析:數(shù)據(jù)見(jiàn)表4。

表4 各年HPV感染數(shù)據(jù)

2.5 高危亞型多重感染情況:3 277例高危感染中單一感染為2 546例，占77.7%;多重感染731例，占22.3%，主要以雙重感染為主，以高危型和混合型多見(jiàn)，結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 HPV高危型單一感染與多重感染

3 討論

筆者利用導(dǎo)流雜交技術(shù)檢測(cè)13 542例患者中HPV感染4 365例，總感染率為32.23%，其中高危型感染率為24.20%，低危型感染率8.03%。總感染率低于浙江臺(tái)州的35.08%和北京的57.1%，但高于重慶北部地區(qū)的21.3%和呼和浩特地區(qū) 13.04%［1］。

各種基因型均有檢測(cè)，其中感染率最高的型為52，占陽(yáng)性標(biāo)本中的16.67%，這與多數(shù)亞洲國(guó)家研究結(jié)果基本一致。其他常見(jiàn)的高危型16、18、33、58。與其他地區(qū)如:成都農(nóng)村常見(jiàn)型為 52、16、58、33、53、18，68，53，而北京常見(jiàn)型則為 16、58、52、53、33，重慶北部則以 16、43、52、33 為常見(jiàn)型別。這表明HPV感染其基因型有明顯的人群及地域區(qū)別［2］。不同亞型HPV感染對(duì)宮頸細(xì)胞惡性病變的發(fā)生、發(fā)展有不同的影響，故對(duì)亞型的統(tǒng)計(jì)是必要的［1］。

在年齡分組數(shù)據(jù)中高危型感染率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，本數(shù)據(jù)與山西對(duì)子宮頸癌高發(fā)區(qū)30～50歲女性HPV感染調(diào)查結(jié)論一致。而＜30歲組低危型感染率明顯高于其他各組，這與年輕女性性生活活躍、性觀念開放有一定的關(guān)聯(lián)。

在年度分組中，后2年的感染率比前2年感染率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，但其檢測(cè)量有明顯的上升，這與科學(xué)技術(shù)發(fā)展、網(wǎng)絡(luò)應(yīng)用、科普知識(shí)的廣泛宣傳、人的保健意識(shí)覺(jué)醒、自我衛(wèi)生意識(shí)加強(qiáng)等存在密切關(guān)系。在因其他原因就診婦科時(shí)，往往主動(dòng)要求檢測(cè)HPV。

本研究發(fā)現(xiàn)，HPV感染以單一為主，占77.69%，多重感染率為22.34%，低于陶萍萍的44.35%［3］。多重感染中以二重感染為主，＜30歲組和＞50歲組主危陽(yáng)性中多重感染率與其他兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，數(shù)據(jù)見(jiàn)表3。這可能與30歲以下人群性觀念有關(guān)。而＞50歲組人群則是因?yàn)閷m頸病變就醫(yī)，其以陽(yáng)性人群為主，進(jìn)行HPV檢測(cè)。多重感染應(yīng)引起臨床醫(yī)師的重視，加強(qiáng)對(duì)其的治療和隨訪。

綜上所述，長(zhǎng)沙地區(qū) HPV高危感染基因52、16、18、33、58、68、53最為常見(jiàn)，而低危型則以6、11及CP8304為主，基本符合亞洲人群分布，但有其一定的地域性特點(diǎn)。這為長(zhǎng)沙地區(qū)宮頸癌的防治、HPV疫苗的使用提供了科學(xué)的參考依據(jù)。

［1］楊曉華，秦曉紅，夏鳳英，等.成都農(nóng)村地區(qū)女性宮頸HPV感染基因型別分布狀況［J］.中國(guó)醫(yī)療前沿，2012，7(3):82.

［2］烏蘭娜，吳瑞芳，周艷秋，等.人乳頭瘤病毒基因亞型與宮頸病變的關(guān)系［J］.中國(guó)婦產(chǎn)科臨床雜志，2005，6(5):346.

［3］陶萍萍，張國(guó)榮，卞美璐，等.婦科門診21種人乳頭瘤病毒感染狀況分析［J］.中日友好醫(yī)院學(xué)報(bào)，2008，22(2):208.