徐捷

延胡索為多年生草本植物，含有多種生物堿，具有活血化瘀、行氣止痛的功能。對于治療胸悶痹痛、跌打損傷、血瘀痛經(jīng)有奇效［1］。其生物堿主要有延胡索甲素(d-corydaline)、延胡索乙素(d1-Tetrahydropalmatine)、延胡索丙素(protopine)，大多以生物堿鹽結合態(tài)形式存在［2］。臨床上多用炮制后的延胡索，《中國藥典》2005版詳細介紹了延胡索凈制法、醋炙法和醋煮法三種方法［3］，結果證實，酒制延胡索能夠增強活血化瘀的活性，醋制延胡索可以提高行血止痛的療效［4］。本文以延胡索中主要有效成份延胡索乙素為研究對象，采用高效液相色譜法(HPLC)，探討不同炮制方法對延胡索乙素的影響，旨在為優(yōu)化炮制方法及制定飲片的質量標準提供參考數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料 延胡索來源于天津中新藥業(yè)藥材公司(批號：070912);參照品延胡索乙素(批號：20022007)從中國食品藥品生物制品檢驗所獲取;色譜醇選用甲醇;黃酒選用浙江紹興黃酒;陳醋選用北京陳醋廠生產(chǎn)的;實驗用水為自制雙蒸水;其它試劑均為分析醇。色譜系統(tǒng)為美國Water-717，包括高效色譜分析儀、紫外檢測器、色譜工作站;烘箱選用湖北黃石醫(yī)療器械廠(HDG78-1);電子天平選用美國梅特勒天平公司生產(chǎn)。

1.2 方法

1.2.1 樣品的制備：根據(jù)中藥炮制規(guī)范［5］，對延胡索進行醋煮、醋烘、醋炙、酒炙等炮制。①醋煮延胡索：取適量延胡索，用20%醋予以伴潤，醋液被完全吸收后，加入自制雙蒸水把藥面淹沒，先用武火煮沸，隨后用文火煎煮，直至醋溶液被吸盡為止，干燥留置備用;②醋烘延胡索：取適量延胡索，加入20%醋使其浸潤，待醋被延胡索吸盡后，取出置入烘箱內，溫度調到120℃，將浸潤后的延胡索烘烤45 min，然后取出晾干備用;③醋炙延胡索：取適量延胡索，加入20%醋使其浸潤，待延胡索充分吸盡醋液后，以文火炒干備用;④酒炙延胡索：取適量延胡索，加入20%紹興黃酒使其浸潤，延胡索完全吸盡黃酒后，用文火將其炒干備用。

1.2.2 對照品溶液的制備：精確稱量延胡索乙素對照品2.257 mg，置于10 ml量瓶中，加入甲醇至刻度線，配制延胡索對照溶液。

1.2.3 供試品溶液的制備：精確稱量醋煮、醋烘、醋炙、酒炙延胡索及生品延胡索各5 g，40目篩濾過，分別置于標準三角瓶中，加自制雙蒸水100 ml，超聲提取25 min，取上層清液;重復上述步驟1次，合并二次濾液;加入50 ml水到殘渣里，待溶解后加入10 ml濃氨水，用乙醚萃取3次，提取萃取液，水浴55℃蒸干，取0.2 g濃縮物，用2 ml甲醇溶解，置入冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.4 色譜條件：選擇美國安杰倫公司色譜柱AgilentTC-C18(250 mm×4.6 mm，5μm);流動相選擇甲醇-0.1%磷酸溶液(甲醇∶0.1%磷酸溶液 =28∶72)pH值范圍5.2～5.4，流速1.0 ml/min;色譜柱溫為35℃，波長為280 nm;同時要求根據(jù)延胡索乙素峰計算出的塔板數(shù)理論值不低于3 000。此時測得延胡索乙素對照品色譜、延胡索樣品色譜見圖1、2。

圖1 延胡索乙素對照品色譜

圖2 延胡索樣品色譜

2 結果

2.1 線性關系實驗 分別吸取延胡索乙素對照品溶液0.19、0.28、0.37、0.46、0.55、0.64、0.73 ml，置入甲醇定容置 2 ml瓶中，配制成不同濃度的延胡素溶液，取上述溶液各20μl，做HPLC分析。以延胡索含量(μg)對應色譜峰面積進行回歸分析，得回歸方程為：Y=2.412×105X-6.14×104，相關系數(shù)γ=0.995，線性范圍0.19～1.36μg呈現(xiàn)相關性。

2.2 精密度試驗 取同一供品溶液，每次20μl，重復進樣5次，在同樣的色譜條件進行延胡索乙素測定，將測定數(shù)值代入回歸方程，RSD=0.18%，說明本次試驗方法有良好的精密度。

2.3 穩(wěn)定性試驗 取同一供品溶液，采取0.2、4、6、8、10每隔2 h進樣的方式，每次進樣2 020μl，測定溶液中延胡索乙素含量，此時延胡索乙素峰面積RSD為1.875%，表明在10 h內供試品溶液穩(wěn)定性能良好。

2.4 重復性試驗 取同一批號樣品，制備成5份供試品溶液，在相同的色譜條件下測定延胡索乙素的含量，測定結果RSD為1.74%，表明本試驗方法重復性良好。

2.5 加樣回收率試驗 選取5份已知含量的樣品，把1 ml的延胡索乙素對照品溶液(0.19 mg/ml)加入到5份樣品中，按供試品溶液制備方法制備溶液，根據(jù)色譜含量測定方法測定其含量，并計算加樣回收率。見表1。

表1 延胡索乙素加樣回收率計算結果

2.6 樣品含量測定 分別取延胡索生品、延胡索醋烘品、延胡索醋煮品、延胡索醋炙品、延胡索酒炙品試品溶液，在色譜分離條件下測定其峰面積，計算延胡索乙素含量。見表2。

表2 5種供試品中延胡索乙素含量測定結果n=3，mg/g

3 討論

關于延胡索不同炮制方法對延胡索乙素影響的研究，文獻報道很多，曹柳等［6］曾用醋炙、醋煮、酒炙的方法炮制延胡索，發(fā)現(xiàn)醋炙、酒炙二種炮制方法都比延胡索生品中延胡索乙素含量高，而醋煮炮制方法延胡索乙素比生品含量偏低;本文研究也證實，醋烘延胡索、醋炙延胡索、酒炙延胡索所測定的延胡索乙素比延胡索生品中高，而醋煮延胡索比延胡索生品延胡索乙素低。這可能是由于延胡索中生物堿大多表現(xiàn)為游離態(tài)的形式，而游離態(tài)生物堿難深于水，經(jīng)過醋制或酒制后，形成生物堿鹽而增加溶解度。王光寧等［7］通過試驗也證實，經(jīng)過醋制的延胡索乙素煎出率比生品延胡索高出20%左右。

傳統(tǒng)的延胡索炮制方法有醋炒、醋蒸、醋煮、灑炙等，延胡索經(jīng)醋炙、酒炙后，通改變延胡索的組織結構，有利于其有效成分的浸潤、溶解、擴散與轉化，提高延胡索乙素的溶出率［8］。醋煮炮制方法使延胡索中乙素下降的原因可能是由于與煮的時間過長，破壞了其生物堿結構。

延胡索是臨床上常用的中藥材，大多以炮制品入藥，由于各地炮制方法存在差異，因此優(yōu)化炮制方法就顯得尤為重要，本文采用超聲的方法提取不同炮制品中的延胡索乙素，方法操作簡單，提取比較完全，穩(wěn)定性良好，精密度高，適用于延胡索炮制品的質量控制。

1 肖崇原主編.中藥化學.第1版.上海：上?？茖W技術出版社，1997.59.

2 沈志沖.元胡不同炮制方法對延胡索乙素含量的影響.現(xiàn)代預防醫(yī)學，2011，38：4454-4458.

3 國家藥典委員會編.中華人民工共和國藥典.第1版.北京：化學工業(yè)出版社，2005.94.

4 竇志英，孫巍，田麗莉，等.HPLC法比較延胡索生品與不同炮制品中3 種有效成份的含量.中藥材，2007，30：399-401.

5 浙江省食品藥品監(jiān)督管理局主編.浙江省中藥炮制規(guī)范.第1版.杭州：浙江科技出版社，2005.48-49.

6 曹柳，竇志英，王萍，等.不同炮制方法對延胡索中有效成分含量的影響.中國中醫(yī)藥信息雜志，2009，16：42-44.

7 王光寧，李勇.炮制延胡索對延胡索乙素和去氫紫堿含量的影響.食品與藥品，2007，9：1-2.

8 馮自立，周建軍，張濤，等.高效液相法測定陜西產(chǎn)延胡索中延胡索乙素、原阿片堿的含量.安徽農(nóng)業(yè)科學，2009，37：9832-9840.