蔣 明，候家興，李春龍，陳丕績(jī)（.廣東省深圳市鹽田區(qū)人民醫(yī)院 5808；.廣東省深圳市鹽田區(qū)婦幼保健院 5808）

葡萄糖－6－磷酸脫氫酶（G6PD）缺乏癥是全球最常見(jiàn)的一種X連鎖不完全顯性遺傳性酶缺陷綜合征，我國(guó)南方是此病高發(fā)區(qū)，其發(fā)病率在各地區(qū)和民族中有差異［1］。G6PD缺陷極易導(dǎo)致新生兒核黃疸，查出致病基因攜帶者，是預(yù)防和控制此病的有效方法。獲得本地區(qū)G6PD基因突變類(lèi)型及頻率的人群分布情況，以此基因突變譜為依據(jù)，即可有效進(jìn)行G6PD缺乏癥的基因診斷。本研究對(duì)深圳市鹽田區(qū)400例隨機(jī)人群進(jìn)行G6PD缺乏癥表型篩查及基因檢測(cè)，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 隨機(jī)選擇2011年4～6月深圳市鹽田區(qū)人民醫(yī)院體檢人群400例，均為深圳市鹽田區(qū)戶籍，年齡18～45歲，男女各200例。乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝管采靜脈血2 mL，24h內(nèi)檢測(cè)G6PD酶活性；然后－20℃保存，1個(gè)月內(nèi)抽提基因組DNA檢測(cè)G6PD基因突變。

1.2 G6PD酶活性檢測(cè) 采用G6PD／6PGD定量比值法（中山天洋電子生物傳感器有限公司試劑，廣東中山），嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)操作，檢測(cè)G6PD酶活性。結(jié)果判斷：G6PD／6PGD≥1.1為G6PD酶活性正常；G6PD／6PGD在0.6～1.1為中度缺乏；G6PD／6PGD≤0.6為重度缺乏［2］。

1.3 基因組DNA抽提 EDTA抗凝全血標(biāo)本1.0mL，加入9.0mL紅細(xì)胞裂解，離心去上清液，將管底白細(xì)胞沉淀用STE緩沖液、10%十二烷基苯磺酸鈉（SDS）和蛋白酶K混勻，56℃消化過(guò)夜，應(yīng)用傳統(tǒng)酚／氯仿法抽提基因組DNA，加60μL滅菌雙蒸水溶解，－20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 G6PD基因突變檢測(cè) 根據(jù)G6PD酶活性檢測(cè)結(jié)果，將G6PD酶缺乏的男性個(gè)體，及所有女性個(gè)體，進(jìn)行G6PD基因突變檢測(cè)。檢測(cè)方法與流程：先采用南方醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)教研室報(bào)道的反向點(diǎn)雜交技術(shù)［3］，檢測(cè)中國(guó)人群c.1388G＞A、c.1376G＞T、c.95A＞G、c.1024C＞T、c.871G＞A、c.1004C＞T等6種主要G6PD基因突變；然后，對(duì)未檢測(cè)到基因突變的G6PD酶缺乏男性個(gè)體、未檢測(cè)到基因突變的G6PD酶中度缺乏女性個(gè)體、G6PD酶重度缺乏但基因檢測(cè)結(jié)果為雜合突變的女性個(gè)體，采用PCR結(jié)合DNA測(cè)序方法補(bǔ)充檢測(cè)c.392G＞T和c.442G＞A基因突變類(lèi)型。這8種基因突變類(lèi)型占中國(guó)人群G6PD基因已知突變頻率的98%以上［4］。

2 結(jié) 果

400例中，經(jīng)G6PD酶活性檢測(cè)，共篩出G6PD酶活性缺乏個(gè)體19例（4.75%），DNA檢測(cè)共檢出G6PD基因突變18例（4.50%）。見(jiàn)表1、2。

表1 400例隨機(jī)人群G6PD酶活性和基因檢測(cè)結(jié)果匯總表［n（%）］

表2 G6PD基因突變檢測(cè)結(jié)果表［n（%）］

3 討 論

G6PD缺乏癥是X連鎖不完全顯性遺傳病，G6PD基因定位于X染色體上，男性為半合子，基因突變攜帶者即為患者，表現(xiàn)為G6PD酶重度缺乏，通過(guò)酶活性檢測(cè)可很容易查出。本研究200例男性人群的檢測(cè)結(jié)果顯示，4例重度缺乏個(gè)體經(jīng)基因檢測(cè)予以證實(shí)；其他個(gè)體均為酶活性正常，可排除G6PD基因突變而無(wú)須進(jìn)行基因檢測(cè)。由此進(jìn)一步說(shuō)明，針對(duì)男性人群，將表型篩查G6PD酶活性缺乏個(gè)體進(jìn)行基因檢測(cè)確診的流程切實(shí)可行。

G6PD基因突變攜帶者女性多為雜合子，存在明顯的臨床表現(xiàn)異質(zhì)性，多表現(xiàn)為中度缺乏，但少數(shù)表現(xiàn)為酶活性正常，因此目前常用的基于G6PD酶活性檢測(cè)的表型篩查方法有一定的漏檢率。有報(bào)道指出，用于檢測(cè)G6PD缺陷的各種檢驗(yàn)方法的雜合子檢出率小于70%，即使是目前國(guó)內(nèi)較先進(jìn)的G6PD／6PGD比值法，也只能檢出76.9%［5］。本研究的200例女性人群的檢測(cè)結(jié)果顯示，有2例為G6PD酶活性正常但為G6PD基因突變攜帶者；14例G6PD酶中度缺乏的個(gè)體中，11例經(jīng)基因檢測(cè)予以證實(shí)，其余3例，可能為其他罕見(jiàn)G6PD基因突變、基因表達(dá)調(diào)控或其他疾病因素等所導(dǎo)致，具體原因還有待以后的研究進(jìn)一步探索。此結(jié)果說(shuō)明，針對(duì)女性人群，基于G6PD酶活性的表型篩查有明顯的漏檢率，基因檢測(cè)可大大提高診斷準(zhǔn)確性與可靠性。

本研究的結(jié)果初步顯示本地區(qū)G6PD基因突變類(lèi)型以c.1388G＞A、c.1376G＞T和c.95A＞G三種類(lèi)型為主，與相關(guān)報(bào)道相符?？偟膩?lái)看，本地區(qū)G6PD基因突變?nèi)巳簲y帶率為4.5%，低于廣東省G6PD缺乏癥發(fā)生率5%～6%［6］；且檢出了其他少見(jiàn)突變類(lèi)型，可能是由于深圳是一個(gè)移民城市，居民來(lái)自全國(guó)不同地方，降低了人群攜帶率，但也導(dǎo)致基因突變譜相對(duì)復(fù)雜。

總之，雖然本研究的標(biāo)本量不大，尚不能完全說(shuō)明本地區(qū)G6PD缺乏癥的具體情況，但研究結(jié)果足以提示本地區(qū)G6PD基因突變譜的復(fù)雜性，也充分說(shuō)明基因檢測(cè)在G6PD缺乏癥診斷中的重要性與必要性。研發(fā)簡(jiǎn)單實(shí)用、結(jié)果準(zhǔn)確可靠的基因檢測(cè)方法，結(jié)合當(dāng)前常規(guī)使用的表型篩查方法，準(zhǔn)確診斷G6PD缺乏癥，以期實(shí)現(xiàn)預(yù)防患者發(fā)病、有效防止和處理新生兒黃疸的目的。

［1］Luzzatto L.G6PD deficiency and malaria selection［J］.Heredity（Edinb），2012，108（4）：456.

［2］姚英姿，方小武，楊孜，等.應(yīng)用熒光斑點(diǎn)法和 G6PD／6PGD比值法檢測(cè)新生兒G6PD［J］.中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志，2010，18（8）：78－79.

［3］Liang Li，Yu－Qiu Zhou，Qi－Zhi Xiao，et al.Development and evaluation of a reverse dot blot assay for the simultaneous detection of six common Chinese G6PD mutations and one polymorphism［J］.BCMD，2008，41（1）：17－21.

［4］Yan T，Cai R，Mo O，et al.Incidence and complete molecular characterization of glucose－6－phosphate dehydrogenase deficiency in the Guangxi Zhuang autonomous region of southern China：description of four novel mutations［J］.Haematologica，2006，91（10）：1321－1328.

［5］景尉，王方，羅旋，等.廣州東山區(qū)地中海貧血和G6PD缺乏癥的調(diào)查［J］.現(xiàn)代臨床醫(yī)學(xué)生物工程學(xué)雜志，2004，10（5）：421－422.

［6］杜傳書(shū).我國(guó)葡萄糖－6－磷酸脫氫酶缺乏癥研究40年的回顧和展望［J］.中華血液學(xué)雜志，2000，4（21）：4.