楊衛(wèi)軍，楊 霞，吳正陽(yáng)，李春來(lái)，董浩林

(1.貴州省貴陽(yáng)市第一人民醫(yī)院 普外科，貴陽(yáng) 貴州 550002；2.第三軍醫(yī)大學(xué) 免疫學(xué)教研室，重慶 400030；3.中國(guó)人民解放軍第210醫(yī)院，遼寧 大連 116001)

Carbonic Anhydrase IX在胃癌中的表達(dá)及對(duì)胃癌術(shù)后復(fù)發(fā)的影響

楊衛(wèi)軍1，楊 霞2，吳正陽(yáng)1，李春來(lái)1，董浩林3

(1.貴州省貴陽(yáng)市第一人民醫(yī)院 普外科，貴陽(yáng) 貴州 550002；2.第三軍醫(yī)大學(xué) 免疫學(xué)教研室，重慶 400030；3.中國(guó)人民解放軍第210醫(yī)院，遼寧 大連 116001)

目的探討CAIX(Carbonic Anhydrase IX)在胃癌組織中的表達(dá)以及對(duì)胃癌術(shù)后復(fù)發(fā)的影響。方法采用免疫組化染色法檢測(cè)CAIX在56例術(shù)后胃癌病人組織中的表達(dá)，比較不同分期的胃癌組織中CAIX表達(dá)的差異以及對(duì)術(shù)后胃癌病人術(shù)后復(fù)發(fā)率的影響。結(jié)果56例胃癌組織切片中CAIX 陽(yáng)性率為85.7%；在Ⅰ～Ⅳ期的陽(yáng)性率分別為40.0%、66.7%、96.8%、100%，不同分期胃癌組織中CAIX陽(yáng)性表達(dá)比較有顯著差異(P<0.05)；CAIX陽(yáng)性者手術(shù)后1～3年的累計(jì)腫瘤復(fù)發(fā)率分別為35.4%、54.2%、66.7%，CAIX陰性者手術(shù)后1～3年的累計(jì)腫瘤復(fù)發(fā)率分別為0%、12.5%、25%，兩組手術(shù)后1～3年的累計(jì)腫瘤復(fù)發(fā)率比較有顯著差異(P<0.05)。結(jié)論CAIX在胃癌組織中的表達(dá)隨著胃癌分期增加而增加，CAIX陽(yáng)性者預(yù)后差且更容易出現(xiàn)術(shù)后的復(fù)發(fā)。

CAIX；胃癌；復(fù)發(fā)

實(shí)體腫瘤隨著腫瘤的進(jìn)展以及腫瘤血管的異質(zhì)性，腫瘤內(nèi)部逐漸出現(xiàn)缺氧或壞死區(qū)域。碳酸酐酶IX(CAIX)通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞膜內(nèi)外離子和氣體轉(zhuǎn)運(yùn)，維持細(xì)胞在缺氧環(huán)境下細(xì)胞的分裂增殖，從而維持腫瘤細(xì)胞的增殖，進(jìn)一步促進(jìn)腫瘤的進(jìn)展[1]。胃癌是常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤之一，但CAIX在胃癌組織中的表達(dá)的研究鮮有報(bào)道。本研究采用免疫組化法檢測(cè)56例胃癌中CAIX的表達(dá)，比較不同分期的胃癌組織中CAIX的表達(dá)以及CAIX陽(yáng)性表達(dá)對(duì)胃癌術(shù)后復(fù)發(fā)的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 胃癌組織標(biāo)本取材于重慶腫瘤醫(yī)院 2009～2010年56例胃癌手術(shù)病人，年齡28～76歲，男性39例，女性17例。術(shù)前均未行放化療以及其他抗腫瘤治療。所有病人均行D2胃癌根治術(shù)，術(shù)后記錄病理類型、臨床分期、組織學(xué)分級(jí)。胃癌病人的TNM分期依照美國(guó)癌癥聯(lián)合委員會(huì)(AJCC)制定的胃癌TNM分期第七版標(biāo)準(zhǔn)判定。腫瘤浸潤(rùn)的深度分組中，浸潤(rùn)至黏膜或黏膜下層(T1)2例，浸潤(rùn)至固有肌層(T2)7例，浸潤(rùn)至漿膜下疏松組織(T3)40例，侵及漿膜或鄰近結(jié)構(gòu)(T4)7例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的分組中，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(N0)13例，有1～2個(gè)區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(N1)26例，有3～6個(gè)區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(N2)16例，有超過(guò)7個(gè)區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(N3)1例；TNM分期組中，Ⅰ期5例，Ⅱ期12例，Ⅲ期31例，Ⅳ期8例；組織學(xué)分級(jí)組中，高分化腺癌7例，中分化腺癌13例，低分化腺癌36例。所有病人術(shù)后均行XELOX方案化療6個(gè)周期。術(shù)后通過(guò)住院、門(mén)診復(fù)診以及電話聯(lián)系方式對(duì)病人隨訪3年。

1.1.2 CAIX 抗體SP免疫組化試劑盒購(gòu)自abcam公司。

1.2 方法 取術(shù)后胃癌組織經(jīng)10%甲醛固定，石蠟包埋切片。常規(guī)脫蠟至水，嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，3%過(guò)氧化氫避光孵育 10 min消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶；PBS 沖洗，微波抗原修復(fù)10 min，滴加血清工作液，室溫孵育 15 min封閉非特異性抗原；滴加一抗后置入冰盒4 ℃過(guò)夜。用 PBS 代替一抗作陰性對(duì)照。 PBS 洗 3 次，滴加二抗，室溫孵育30 min，PBS洗滌，滴加辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液，室溫孵育15 min，PBS洗滌，DAB 顯色，蒸餾水

終止，蘇木素復(fù)染，酒精梯度脫水、二甲苯透明，樹(shù)膠封片。

1.3 結(jié)果判定 CAIX表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)，呈棕黃色或黃褐色。CAIX陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)[2]:陰性(-)為腫瘤組織完全不著色或陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≤10%；陽(yáng)性(+)為腫瘤組織陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)>10%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 13.0 統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料比較采用2檢驗(yàn)及Fisher精確概率法，P<0. 05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CAIX在胃癌組織中的表達(dá)情況 本組56例胃癌組織中，CAIX陽(yáng)性48例，陽(yáng)性率為85.7%。T1-T4的陽(yáng)性率分別為0.0%、85.7%、85.7%、100.0%，T4期的陽(yáng)性率明顯高于T0-T3期(P<0.05)；N0-N3的陽(yáng)性率分別為46.2%、96.2%、100.0%、100.0%，N2期及N3期的陽(yáng)性率明顯大于N0及N1期(P<0.05)；Ⅰ～Ⅳ期的陽(yáng)性率分別為40.0%、66.7%、96.8%、100.0%，Ⅲ、Ⅳ期的陽(yáng)性率明顯高于Ⅰ、Ⅱ期(P<0.05)。CAIX在高分化胃癌、中分化以及低分化胃癌組織中的陽(yáng)性率為85.7%、84.6%、86.1%，CAIX陽(yáng)性表達(dá)無(wú)明顯差別(P>0.05，見(jiàn)圖1、表1)。

注：A：CAIX在胃癌組織中呈陰性表達(dá)；B：CAIX在胃癌組織中呈陽(yáng)性表達(dá)。 圖1 CAIX在胃癌組織中的表達(dá)(×400)

2. 2 CAIX 對(duì)胃癌術(shù)后復(fù)發(fā)的影響 本組56例胃癌病人中，術(shù)后1年腫瘤復(fù)發(fā)17例，復(fù)發(fā)率為30.4%；術(shù)后2年累計(jì)腫瘤復(fù)發(fā)27例，累計(jì)復(fù)發(fā)率為48.2%；術(shù)后3年累計(jì)腫瘤復(fù)發(fā)34例，累計(jì)復(fù)發(fā)率為60.7%；CAIX陽(yáng)性48例，CAIX陰性8例，CAIX陽(yáng)性病人術(shù)后1年、2年、3年的累計(jì)復(fù)發(fā)率明顯高于CAIX陰性病人(P<0.05，見(jiàn)表2)。

表1 CAIX在56例胃癌組織中的表達(dá)

比較變量CAIX-+腫瘤浸潤(rùn)的深度T120T216T3535T407P<0.05淋巴結(jié)侵襲轉(zhuǎn)移N076N1125N2016N301P<0.05TNM分期I32II48III130IV08P<0.05組織學(xué)分級(jí)高分化16中分化211低分化531P>0.05

表2胃癌組織中CAIX表達(dá)對(duì)術(shù)后累計(jì)復(fù)發(fā)率的影響

組別術(shù)后1年內(nèi)復(fù)發(fā)(例)術(shù)后2年內(nèi)復(fù)發(fā)(例)術(shù)后3年內(nèi)復(fù)發(fā)(例)CAIX陽(yáng)性17/48(35.4%)26/48(54.2%)32/48(66.7%)CAIX陰性0/8(0.0%)1/8(12.5%)2/8(25.0%)

注：P<0.05。

3 討論

本研究發(fā)現(xiàn)，胃癌浸及胃壁的黏膜固有層及黏膜下層時(shí)，免疫組化檢測(cè)CAIX呈陰性表達(dá)，隨著腫瘤浸潤(rùn)的深度增加，CAIX出現(xiàn)陽(yáng)性表達(dá)遞增，當(dāng)腫瘤浸及胃漿膜層，CAIX呈100%陽(yáng)性表達(dá)。提示胃癌組織中CAIX表達(dá)與腫瘤浸潤(rùn)的深度相關(guān)(P<0.05)。56例胃癌病人中，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者與有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者的CAIX表達(dá)有明顯區(qū)別(P<0.05)，當(dāng)轉(zhuǎn)移的淋巴結(jié)超過(guò)7枚時(shí)，胃癌組織中CAIX呈100%陽(yáng)性表達(dá)。在研究不同分期的胃癌組織中CAIX表達(dá)發(fā)現(xiàn)，隨著腫瘤分期的增加，CAIX陽(yáng)性表達(dá)隨之而增加，且各個(gè)不同分期的CAIX陽(yáng)性率比較有顯著差異(P<0.05)。上述結(jié)果提示CAIX在胃癌組織中的表達(dá)與腫瘤浸潤(rùn)的深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及腫瘤分期相關(guān)。但是CAIX的表達(dá)與胃癌組織的組織學(xué)分級(jí)的相關(guān)性尚不明確。

研究表明CAIX的表達(dá)與腫瘤的乏氧代謝密切相關(guān)，CAIX主要在實(shí)體癌的缺氧區(qū)表達(dá)[6]。本次研究結(jié)果提示CAIX在胃癌中的表達(dá)與腫瘤浸潤(rùn)的深度、區(qū)域淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移以及腫瘤的臨床分期成正比，表明隨著胃癌的進(jìn)展，胃癌組織缺氧程度隨之增加。CAIX能反映胃癌組織的缺氧程度，因此，CAIX在胃癌組織中的表達(dá)是胃癌病人預(yù)后不良的標(biāo)志，這與國(guó)外研究結(jié)果相吻合[7-10]。在比較胃癌組織中CAIX陽(yáng)性組與陰性組的手術(shù)后1～3年的腫瘤累計(jì)復(fù)發(fā)率的研究發(fā)現(xiàn)，CAIX陰性組的術(shù)后1～3年胃癌累計(jì)復(fù)發(fā)率明顯低于CAIX陽(yáng)性組。提示CAIX陽(yáng)性病人腫瘤分期較晚以及手術(shù)前已存在淋巴、血液轉(zhuǎn)移，這與本次研究發(fā)現(xiàn)CAIX在胃癌組織中的表達(dá)與腫瘤浸潤(rùn)的深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及腫瘤分期相關(guān)一致。

綜上所述，胃癌組織中CAIX的陽(yáng)性表達(dá)表明了胃癌的進(jìn)展，并能反應(yīng)胃癌組織的缺氧情況，是胃癌病人預(yù)后不良的指標(biāo)。對(duì)CAIX在胃癌組織中表達(dá)的研究為胃癌的靶向治療提供了新的思路[11]，但是胃癌的發(fā)生、發(fā)展是一個(gè)多階段、多基因參與的復(fù)雜過(guò)程，CAIX在胃癌組織中表達(dá)的具體影響尚需大量的臨床研究以及長(zhǎng)期的隨訪來(lái)進(jìn)一步證實(shí)。

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SignificanceofcarbonicanhydraseIX(CAIX)expressioningastriccarcinomaandtheinfluenceontherecurrenceofgastriccancerafteroperation

Yangweijun1,Yangxia2,Wuzhengyang1，Lichunlai1，Donghaolin3

(1. Department of Surgery, The First People’s Hospital of Guiyang,Guizhou Guiyang 550002,China；2. Department of Immunology, Third Military Medical University, Chongqing 400038, China；3. The 210th Hospital of Chinese people’s Liberation Army,Liaoning Dalian 116001,China)

ObjectiveTo explore the Carbonic Anhydrase IX (CAIX) expression in gastric cancer tissue and the effect on the gastric cancer recurrence after surgery.MethodsImmunohistochemical staining was used to detect CAIX in 56 cases of postoperative patients with gastric cancers, and comparison of CAIX expression in different stages of gastric cancer tissue was made and the postoperative recurrence of gastric cancer patients in relation with CAIX expression was onvestigated.ResultsIn 56 cases of gastric cancer tissue biopsies CAIX positive rate was 85.7%, in phase I, II, III, IV positive rate were 40.0%, 66.7%, 96.8% and 100% respectively. CAIX-positive expression in different stages of gastric cancer had significant difference (P<0.05). The patients of CAIX positive 1-year 2-year, 3-year after surgery with the cumulative recurrence rate was 35.4%, 54.2 %, 66.7%, respectivelyIn CAIX-negative patients 1 year 2-year, and 3 -year after surgery, the cumulative recurrence rates were 0 %, 12.5% , and 25%. The 1-3 years of cumulative recurrence rates in the two groups after surgery were significantly different (P< 0.05).ConclusionExpression of CAIX in gastric cancer tissue increased with the increase of the staging of gastric cancer, and CAIX positive was a poor prognostic factor and more prone to recurrence.

carbonic anhydrase IX；gastric cancer；recurrence

R735.7

A

1000-2715(2013)05-0456-04

[收稿2013-05-23;修回2013-09-17]

(編輯：譚秀榮)