于月新，李巨，陳佳，樊寶劍，顏宇博

附件扭轉(zhuǎn)(adnexal torsion，AT)是婦科常見(jiàn)的急腹癥之一，主要由缺血和保留卵巢術(shù)后的再灌注損傷引起。扭轉(zhuǎn)發(fā)生后，卵巢靜脈和動(dòng)脈血流依次受阻，導(dǎo)致卵巢組織發(fā)生充血、水腫及缺血性損傷，產(chǎn)生大量氧自由基，導(dǎo)致蛋白質(zhì)降解、核酸斷裂、線粒體變性、崩解，最終造成細(xì)胞死亡。本研究觀察附件扭轉(zhuǎn)后再灌注對(duì)家兔卵巢谷胱甘肽-過(guò)氧化物酶(GSH-Px)、過(guò)氧化氫酶(CAT)活性及丙二醛(MDA)含量的影響，以期為臨床治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 主要試劑及設(shè)備 GSH-Px、CAT、MDA生化檢測(cè)試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所。HERAEUS Pico 17離心機(jī)(德國(guó)Thermo公司)；UV-1700 Pharmaspec紫外分光光度計(jì)(美國(guó)Shimadzu公司)。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組 雌性成年日本大耳白兔40只，8～12月齡，體重2.5～3.0kg，由沈陽(yáng)軍區(qū)總醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供[合格證號(hào)：SCXK(軍)2007-001]。隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組(n=32)和對(duì)照組(n=8)。實(shí)驗(yàn)組附件扭轉(zhuǎn)24h后解除扭轉(zhuǎn)，再按隨機(jī)排列表法分成4組，每組8只，分別于再灌注24、48、72、96h后取雙側(cè)卵巢組織，以右側(cè)卵巢作為內(nèi)對(duì)照。動(dòng)物采用籠中獨(dú)立飼養(yǎng)方法，自由飲食，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.3 附件扭轉(zhuǎn)模型制作 實(shí)驗(yàn)兔稱重后以氯胺酮40mg/kg肌內(nèi)注射，待四肢松軟、睫毛反射消失后將其仰臥固定于手術(shù)臺(tái)。取下腹部正中長(zhǎng)約6cm切口，逐層切開(kāi)入腹腔，暴露雙側(cè)子宮和輸卵管、卵巢，觀察并記錄其大小及顏色。將實(shí)驗(yàn)組兔左側(cè)附件按順時(shí)針?lè)较蛐D(zhuǎn)3周，并固定于左側(cè)腹壁，卵巢1min后由灰白變成紅色表明扭轉(zhuǎn)成功。24h后解除扭轉(zhuǎn)，分別于再灌注24、48、72、96h后取雙側(cè)卵巢組織。對(duì)照組僅開(kāi)腹后提拉出左側(cè)附件至切口，再放回原處關(guān)腹，96h后取雙側(cè)卵巢組織。

1.4 MDA、GSH-Px與CAT測(cè)定 將取出的卵巢組織置于–80℃保存，收集標(biāo)本后按南京建成生物工程研究所提供的檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)分別測(cè)定卵巢組織中MDA、GSH-Px、CAT的活性或含量，其中GSH-Px活性檢測(cè)采用DTNB法，CAT活性檢測(cè)采用可見(jiàn)光法，MDA含量檢測(cè)采用硫代巴比妥酸法。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 計(jì)量資料以x±s表示，采用SPSS 11.5軟件進(jìn)行單因素方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 術(shù)后一般情況 40只兔均存活，實(shí)驗(yàn)組附件扭轉(zhuǎn)24h后可見(jiàn)腹腔內(nèi)程度不等粘連，子宮及右附件未見(jiàn)明顯異常，左側(cè)卵巢及輸卵管水腫、充血，呈紫色或紫黑色。對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組各組肛溫、心率、呼吸頻率比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

2.2 再灌注后各組兔卵巢及輸卵管肉眼所見(jiàn) 附件扭轉(zhuǎn)24h后解除扭轉(zhuǎn)，再灌注24h后卵巢及輸卵管顏色5只呈紫色，2只呈淺紅色，而48h后1只呈紫色，3只呈淺紅色，72h時(shí)4只呈淺紅色，2只顏色恢復(fù)正常，96h后8只顏色全部恢復(fù)正常。

2.3 GSH-Px活性檢測(cè) 附件扭轉(zhuǎn)解除后24h至72h，實(shí)驗(yàn)組左側(cè)卵巢GSH-Px活力與對(duì)照組比較明顯下降(P＜0.01)，96h后與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05，表1)。

2.4 MDA含量檢測(cè) 附件扭轉(zhuǎn)解除后24h及48h，與對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組右側(cè)卵巢比較，實(shí)驗(yàn)組左側(cè)卵巢MDA含量明顯上升(P＜0.01)，72h后開(kāi)始下降，96h后與對(duì)照組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05，表1)。

表1 兔卵巢GSH-Px、CAT活性及MDA含量比較(n=8)Tab.1 Comparison of GSH-Px, CAT activity and MDA level in ovaries of rabbits n=8)

表1 兔卵巢GSH-Px、CAT活性及MDA含量比較(n=8)Tab.1 Comparison of GSH-Px, CAT activity and MDA level in ovaries of rabbits n=8)

Item Control group Study group Left ovary Right ovary GSH-Px(U/ml)24h 197.73±9.85(1) 0.429±0.214 48h 163.71±11.07(1)0.531±0.381 72h 291.56±18.67(1)(2)0.324±0.257 96h 382.31±16.95 368.79±17.67(4)0.562±0.471 CAT(U/ml)24h 36.63±1.02(1)(5)75.34±1.87 48h 25.63±0.88(1)(3)(5)72.42±1.39 72h 71.69±1.82(2) 69.79±1.83 96h 78.69±1.82 96.55±1.89(1)(4)73.63±1.31(1)P＜0.01 compared with control group; (2)P＜0.05 compared with 48h; (3)P＜0.01 compared with 24h; (4)P＜0.05 compared with 72h; (5)P＜0.01 compared with right ovary

2.5 CAT活性檢測(cè) 附件扭轉(zhuǎn)解除后24h及48h，與對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組右側(cè)卵巢比較，實(shí)驗(yàn)組左側(cè)卵巢CAT活力明顯下降(P＜0.01)，而實(shí)驗(yàn)組右側(cè)卵巢與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。72h后，實(shí)驗(yàn)組左側(cè)卵巢CAT開(kāi)始升高，但與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，96h后與對(duì)照組比較明顯升高(P＜0.05，表1)。

3 討 論

AT是婦科急診手術(shù)的第五大常見(jiàn)病因，扭轉(zhuǎn)的發(fā)生常牽涉卵巢損傷和不育，對(duì)扭轉(zhuǎn)的卵巢進(jìn)行保守性處理非常棘手[1-2]。有研究表明，附件缺血-出血性的藍(lán)黑色外觀是靜脈、淋巴淤滯的結(jié)果，但不是壞疽[3]，附件扭轉(zhuǎn)后卵巢靜脈內(nèi)的血液回流首先受阻，卵巢血供減少或停止可能導(dǎo)致機(jī)體氧化應(yīng)激和抗氧化防御體系的失衡，因此卵巢扭轉(zhuǎn)-扭轉(zhuǎn)復(fù)位造成的損傷類似于其他器官的缺血再灌注損傷[4]。

內(nèi)源性抗氧化酶包括GSH-Px、CAT等，是組織抗氧化應(yīng)激的敏感指示劑，作為機(jī)體重要的抗氧化系統(tǒng)它決定了機(jī)體對(duì)抗氧化損傷的能力[5-6]。因此在缺血/再灌注過(guò)程中，通過(guò)檢測(cè)GSH-Px、CAT的活力可以反映機(jī)體缺血再灌注損傷的程度。MDA是脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物的一種，其含量可反映機(jī)體脂質(zhì)過(guò)氧化程度，進(jìn)而判斷細(xì)胞損傷的程度[7]。測(cè)定附件扭轉(zhuǎn)后卵巢組織中GSH-Px、CAT的活性以及MDA的含量可推測(cè)體內(nèi)自由基代謝的情況。

本研究發(fā)現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)組右側(cè)卵巢與對(duì)照組卵巢組織相比，GSH-Px、CAT、MDA活性無(wú)明顯變化，而實(shí)驗(yàn)組左側(cè)卵巢再灌注24h后MDA開(kāi)始升高，48h達(dá)高峰，72h開(kāi)始下降，96h接近正常。附件扭轉(zhuǎn)解除后24h至72h，實(shí)驗(yàn)組左側(cè)卵巢GSH-Px活力明顯下降，96h后恢復(fù)正常。實(shí)驗(yàn)組左側(cè)卵巢附件扭轉(zhuǎn)解除后24h及48h，CAT活力明顯下降，72h后開(kāi)始升高，96h后達(dá)高峰。表明附件扭轉(zhuǎn)后卵巢組織缺氧，解除扭轉(zhuǎn)后卵巢因再灌注損傷產(chǎn)生大量氧自由基，MDA含量顯著增多，從而破壞卵巢細(xì)胞。而GSH-Px、CAT含量于48h下降，顯示再灌注早期卵巢抗氧化應(yīng)激能力損傷。

本研究還發(fā)現(xiàn)，附件扭轉(zhuǎn)24h后解除扭轉(zhuǎn)，再灌注24h后卵巢及輸卵管顏色5只呈紫色，2只呈淺紅色，隨時(shí)間進(jìn)展，卵巢及輸卵管顏色逐漸變淺，96h后8只顏色全部恢復(fù)正常，而卵巢組織中的GSH-Px、CAT活性于再灌注24h后明顯降低，隨時(shí)間進(jìn)展，48h組下降達(dá)低谷，72h有所上升，96h后基本恢復(fù)正常。可見(jiàn)附件扭轉(zhuǎn)后解除扭轉(zhuǎn)對(duì)卵巢造成了明顯的再灌注損傷，以48h時(shí)最為顯著，隨時(shí)間延長(zhǎng)，損傷逐漸減輕，表明再灌注后早期卵巢產(chǎn)生了氧化應(yīng)激損傷，隨時(shí)間進(jìn)展，損傷逐漸減輕，卵巢經(jīng)歷了再灌注損傷的恢復(fù)過(guò)程，這可能與扭轉(zhuǎn)解除后血供逐漸恢復(fù)，由局部產(chǎn)生的GSH-Px、CAT逐漸恢復(fù)或升高、MDA逐漸清除有關(guān)。因此，附件蒂扭轉(zhuǎn)發(fā)生后如能及時(shí)手術(shù)，卵巢的缺血再灌注損傷是暫時(shí)的。

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