劉賢華，白曉東，劉元明，段萃娟，榮 冉，劉維維

丙型肝炎是一種由丙型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV)引起的肝臟急、慢性炎性反應(yīng)，目前世界上約有2 億人感染［1，2］。近些年來，臨床實驗室相繼建立了實時熒光定量室，采用PCR 體外擴增的方法，定量檢測人血清或血漿標本中的HCV-RNA［3，4］。本研究回顧性分析我院2011-10至2012-08 期間265例疑似HCV 感染患者的檢測數(shù)據(jù)，探討PCR-熒光探針法、抗-HCV 與ALT 檢測在丙型肝炎診斷中的應(yīng)用價值。

1 對象與方法

1.1 對象 265例疑似HCV 感染患者均為我院門診及住院患者，其中男146例，女119例，年齡15～80歲。全部患者均檢測HCV-RNA、抗-HCV 及ALT。HCV-RNA 檢測采用PCR-熒光探針法，嚴格按照試劑說明書要求和實驗操作規(guī)程進行檢測，同時設(shè)置陰、陽性對照和4個標準品，測定結(jié)果為0(無數(shù)值)的標本為HCV-RNA 陰性標本?？?HCV 檢測采用ELISA 法，同時設(shè)置陰、陽性對照和標準品，酶標儀450 nm/630 nm 波長測定。檢驗結(jié)果判斷:標本A值＜Cutoff值為陰性，≥Cutoff值為陽性。ALT 水平檢測采用全自動生化分析儀。

1.2 試劑與儀器 美國PTC-200 型Peltier Thermal Cycler 擴增儀，TECAN 全自動酶標儀，日立公司AU7600-120 全自動生化分析儀。丙型肝炎病毒核酸定量檢測試劑盒由上海科華生物工程股份有限公司提供，抗-HCV 酶聯(lián)免疫檢測試劑盒由北京金豪制藥股份有限公司提供。

1.3 統(tǒng)計學處理 應(yīng)用SPSS13.0 統(tǒng)計軟件，采用配對t 檢驗與χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 HCV-RNA 與抗-HCV 檢測結(jié)果 抗-HCV陽性檢出率為80.4%(213/265)，HCV-RNA 陽性檢出率為64.9%(172/265)。在213例抗-HCV陽性者血清中，171例查出HCV-RNA，其余血清未檢出HCV-RNA;52例抗-HCV 陰性血清中，有1例HCV-RNA 檢測結(jié)果陽性，其余均未檢出HCV-RNA。

HCV-RNA 與抗-HCV 均陽性171例，均為陰性51例，HCV-RNA 陽性而抗-HCV 陰性1例，HCV-RNA 陰性而抗-HCV 陽性32例。HCV-RNA 陽性多伴有抗-HCV 陽性(r=0.320)，二者有很好的相關(guān)性但并不呈正比關(guān)系。

2.2 HCV-RNA 和抗-HCV 陽性率的性別、年齡分布 由表1 可見，男性抗-HCV 與HCV-RNA的陽性率均高于女性，但差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);年齡＞40歲的患者抗-HCV 與HCV-RNA的陽性率明顯高于年齡≤40歲的患者，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。

表1 265例可疑HCV 感染患者性別、年齡分布與HCV-RNA 和抗-HCV 檢測結(jié)果統(tǒng)計表(n;%)

2.3 HCV-RNA 含量與ALT 相關(guān)性分析 從表2中顯示，265例可疑HCV 感染血清標本中，HCV-RNA 陽性172例，其中ALT 異常者有167例，異常率為97.09%;HCV-RNA 陰性98例，其中ALT 異常者1例，異常率為1.02%，ALT 異常率隨HCV-RNA 陽性率的增高而增加，并與HCV-RNA 含量成正相關(guān)性(r=0.999，P＜0.05)。但ALT 的水平與HCV-RNA 含量無相關(guān)性(r=0.800，P＞0.05)。

表2 265例疑似HCV 感染患者HCV-RNA 含量與ALT 的關(guān)系

3 討 論

3.1 HCV 檢測方法的選擇 目前，實驗室檢測HCV 的方法很多，主要有血清學檢測HCV 抗體、基因分型技術(shù)、定量檢測HCV-RNA 及HCV 抗原、核酸分子雜交法、基因芯片技術(shù)等。以上方法大部分僅限用于科學研究，而在臨床檢驗中酶聯(lián)免疫測定HCV 抗體仍是國內(nèi)外HCV 篩選最常用方法［5，6］。本研究265例全部采用ELISA 法檢測血清抗-HCV，213例樣本呈陽性，52例樣本呈陰性，但檢測HCV-RNA 時發(fā)現(xiàn)，52例抗-HCV 陰性患者中，有1例HCV-RNA 檢測結(jié)果為陽性。分析其中原因:一是可能由于抗-HCV 檢測存在“窗口期”，用該檢測方法無法檢測到病原存在［7］;二是可能因為患者使用免疫抑制劑或患其他嚴重疾病導致免疫力低下使抗體無法檢出。而PCR-熒光探針法在患者感染HCV 后1-3周就可檢出HCV-RNA［8］，在診斷HCV 感染中具有明顯優(yōu)勢。但是筆者并不主張單獨應(yīng)用PCR-熒光探針法進行丙型肝炎病毒核酸定量，因為如果患者感染的HCV 與該引物不匹配或者患者病毒載量太低，都有可能導致HCV-RNA 檢測結(jié)果為陰性。建議對于大規(guī)模體檢進行HCV 篩查，可先行抗-HCV 檢測，對其中抗-HCV 陽性標本或疑似陽性標本再進行HCV-RNA 檢測;而對于抗-HCV 陰性標本，如果可疑也可再進行HCV-RNA 檢測以減少漏診的機會。因此在醫(yī)療條件允許的醫(yī)院，可以同時開展HCV-RNA 與抗-HCV檢測從而減少HCV 感染的漏診率。

3.2 HCV-RNA 與抗-HCV 在診斷HCV 感染中的價值 從理論上講，對于同一群體同時進行抗-HCV 和HCV-RNA 檢測，HCV-RNA 的陽性檢出率應(yīng)該高于抗-HCV 的陽性檢出率，文獻［9］也支持這一觀點。但本研究結(jié)果與之相反，抗-HCV 陽性檢出率(80.4%)高于HCV-RNA 陽性檢出率(64.9%)?？紤]原因一是因為A值＜2.5 滴度狀態(tài)的血清，不容易檢測到HCV-RNA;二是因為某些干擾因素的存在，例如在本實驗中，有181例處于A值≥2.5 高滴度狀態(tài)，其中有171例查出HCV-RNA 陽性，有10例出現(xiàn)抗-HCV 高滴度而HCV-RNA 陰性，而此類患者有一個共同的特點就是他們的ALT 水平都處于正常范圍之內(nèi)，后經(jīng)證實全部為經(jīng)過抗病毒治療后接近康復的患者。三是可能樣本量還不夠大，處于窗口期的患者少，今后對這一類情況將重點關(guān)注。本研究結(jié)果提示，抗-HCV A值的高低可預(yù)示其血清中HCV-RNA 的存在與否，在一定程度上反映了感染個體的傳染性，這與文獻［10］認為抗-HCV 的滴度與感染的病毒活性相關(guān)的觀點一致。另外，本研究表明，HCV-RNA 陽性多伴有抗-HCV 陽性，二者有很好的相關(guān)性，但并不呈正比關(guān)系。

3.3 性別、年齡與HCV-RNA、抗-HCV 及ALT的關(guān)系 本研究顯示，男性抗-HCV、HCV-RNA的陽性率與女性比較，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);＞40歲患者的抗-HCV 與HCV-RNA 陽性率明顯高于≤40歲的患者，且ALT 異常率亦有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)，究其原因可能是因為40歲以上的成年人社會壓力過大及不良生活習慣如嗜酒、吸煙，或合并其他嚴重疾病致使機體抵抗力過低［11］，更易受病毒侵襲而使ALT 異常。本研究表明，抗-HCV、HCV-RNA 及ALT 具有很好的相關(guān)性，對丙肝診斷具有同等重要的作用。當HCV-RNA 處于活動性復制狀態(tài)時，肝臟功能亦處于損害狀態(tài)，ALT水平的檢測在診斷HCV 中有很好的輔助作用。

綜上所述，ELISA 法檢測抗-HCV 在丙型肝炎診斷中仍舊為首選檢測方法，尤其適合于大規(guī)模篩查。PCR-熒光探針法檢測丙型肝炎病毒核酸定量結(jié)果會更精確，對于診斷HCV 感染者的病情及轉(zhuǎn)歸是一項很有意義的指標。

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