李蛟龍，徐昊翔，尹茂文，高 峰，周光宏

(南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物科技學(xué)院 動(dòng)物源食品生產(chǎn)與安全保障省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇 南京 210095)

海濱錦葵為錦葵科海濱錦葵屬多年生耐鹽經(jīng)濟(jì)植物，集油料、飼料、醫(yī)藥和觀賞價(jià)值于一身，天然分布在美國(guó)東部沿海(特拉華州到德克薩斯州)的含鹽沼澤地帶，于1995年被引入我國(guó)。海濱錦葵具有多重抗性，例如耐鹽、抗旱、耐澇、抗蟲等。同時(shí)海濱錦葵的地下塊根特別發(fā)達(dá)，美國(guó)東部印第安土著有用其治療上呼吸道炎癥的習(xí)慣。有研究通過超聲波法、有機(jī)萃取法和層析法等方法，從海濱錦葵塊根中提取出皂甙[1-2]、多糖[1,3]和黃酮[2]等活性物質(zhì)，而這些活性物質(zhì)均具有一定的提高免疫的效應(yīng)[4-5]。但海濱錦葵塊根對(duì)畜禽生產(chǎn)性能和免疫功能是否有影響，國(guó)內(nèi)外尚未見相關(guān)報(bào)道。

隨著動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)研究的不斷深入，酶制劑受到越來越多研究者的重視。由于飼料原料中含有一些非淀粉多糖(如木聚糖、β-葡聚糖、纖維素等)和植酸等抗?fàn)I養(yǎng)成分[6]，影響了家禽對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用。飼料中添加外源性的酶制劑可以降解和消除飼料中的抗?fàn)I養(yǎng)成分，從而達(dá)到提高飼料養(yǎng)分利用率的目的[7]。在家禽日糧中添加復(fù)合酶制劑可以改善家禽的生產(chǎn)性能[8-9]，并提高機(jī)體免疫力[10-11]，是一種有效的機(jī)體免疫增強(qiáng)劑。

本試驗(yàn)以酶制劑作為對(duì)照，通過研究海濱錦葵塊根粉對(duì)肉仔雞生長(zhǎng)和免疫性能的影響，探討其飼用價(jià)值，為其合理開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

肉仔雞由南京某孵化場(chǎng)提供；海濱錦葵塊根粉由南京大學(xué)鹽生植物研究室提供；飼料用復(fù)合酶制劑由江蘇奕農(nóng)生物工程有限公司提供，主要組成和活性如下：α-淀粉酶，20 000 U/g；木聚糖酶，10 000 U/g；纖維素酶，20 000 U/g；β-葡聚糖酶，20 000 U/g；甘露聚糖酶,20 000 U/g；植酸酶,5 000 U/g。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選擇體重相近的1日齡健康A(chǔ)A肉仔雞96羽，隨機(jī)分為4個(gè)處理組，試驗(yàn)Ⅰ組為對(duì)照組，飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗(yàn)Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組分別在基礎(chǔ)日糧中添加0.02%復(fù)合酶制劑、0.5%海濱錦葵塊根粉和1%海濱錦葵塊根粉。每組設(shè)3個(gè)重復(fù)即可，每個(gè)重復(fù)6只雞，試驗(yàn)期21 d。

1.3 試驗(yàn)日糧及飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)日糧參照美國(guó)NRC(1994)AA肉仔雞的營(yíng)養(yǎng)需要，配制玉米-豆粕型基礎(chǔ)日糧，日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表1。飼養(yǎng)試驗(yàn)地點(diǎn)為南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院動(dòng)物房。肉仔雞自由采食和飲水，24 h光照，常規(guī)消毒免疫。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平Table 1 Composition and nutrients of basal diet

注：*每千克預(yù)混料提供：維生素B12.21 mg；維生素B27.8 mg；維生素B120.015 mg；維生素B111.2 mg；維生素H 0.04 mg；維生素B64 mg；維生素B340 mg；維生素D36 mg；膽堿 400 mg；維生素K 1.3 mg；維生素A 24 mg；泛酸鈣 10 mg；銅 7.6 mg；鐵 82 mg；鋅 65 mg；錳 110 mg；硒 0.3 mg；碘 1.1 mg。

Note： Premix provided per kg of diet: thiamin 2.21 mg, riboflavin 7.8 mg, vitamin B12(cobalamin) 0.015 mg, folic acid 1.2 mg, biotin 0.04 mg, pyridoxine HCl 4 mg, nicotinamide 40 mg, cholecalciferol 6 mg, choline chloride 400 mg, menadione 1.3 mg, Vitamin A 24 mg, calcium pantothenate 10 mg, Cu (from copper sulfate) 7.6 mg, Fe (from ferrous sulfate) 82 mg, Zn (from zinc oxide) 65 mg, Mn (from manganese sulfate) 110 mg, Se (from sodium selenite) 0.3 mg, I (from calcium iodate) 1.1 mg.

1.4 樣品采集與處理

于21日齡每個(gè)重復(fù)隨機(jī)抽取2只雞(每組8只)稱重后進(jìn)行翅靜脈采血，制備血清，進(jìn)行血清免疫指標(biāo)測(cè)定。采血后立即宰殺，分離免疫器官(胸腺、脾臟和法氏囊)稱重。

1.5 指標(biāo)測(cè)定

分別于試驗(yàn)的第1 d和第21 d對(duì)試驗(yàn)雞只進(jìn)行稱重，試驗(yàn)期間記錄每天投料量與剩料量，最后計(jì)算采食量、總增重和料重比。

血清指標(biāo)包括血清中溶菌酶活性、白介素6(IL-6)含量、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)含量和新城疫疫苗抗體效價(jià)。其中溶菌酶活性、IL-6含量、TNF-α含量參照試劑盒(南京建成生物工程研究所)使用說明測(cè)定，新城疫疫苗抗體效價(jià)參照周琴琴[12]的方法使用血凝抑制(HI)試驗(yàn)測(cè)定。

根據(jù)免疫器官重和活體重，計(jì)算免疫器官指數(shù)。公式如下：

免疫器官指數(shù)=器官重量(g)/活體重(kg)

1.6 統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)結(jié)果用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件中的單因子方差分析(One-Way ANOVA )進(jìn)行LSD多重比較。結(jié)果用平均值和平均標(biāo)準(zhǔn)誤(SEM)表示，以P<0.05為顯著性標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 海濱錦葵塊根粉對(duì)肉仔雞生長(zhǎng)的影響

與對(duì)照組和酶制劑組相比(見表2)，1%的海濱錦葵塊根粉組有提高采食量的趨勢(shì)，但差異不顯著(P>0.05)。與對(duì)照組和酶制劑組相比，0.5%和1%海濱錦葵塊根粉組有提高總增重的趨勢(shì)，但差異也不顯著(P>0.05)。四個(gè)處理組之間的料重比無顯著差異(P>0.05)。

2.2 海濱錦葵塊根粉對(duì)肉仔雞免疫器官的影響

與對(duì)照組相比(見表3)，酶制劑組、0.5%和1%海濱錦葵塊根粉組的法氏囊指數(shù)分別提高了25.49%、15.59%和33.33%，但差異均不顯著(P>0.05)。四個(gè)處理組之間的胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)也無顯著差異(P>0.05)。

表2 海濱錦葵塊根粉和酶制劑對(duì)肉仔雞生長(zhǎng)的影響Table 2 Effects of Kosteletzkya virginica root tuber flour and enzyme preparation on growth performance in broilers

表3 海濱錦葵塊根粉和酶制劑對(duì)肉仔雞免疫器官指數(shù)的影響Table 3 Effects of Kosteletzkya virginica root tuber flour and enzyme preparation on the immune organ index in broilers

2.3 海濱錦葵塊根粉對(duì)肉仔雞血清免疫的影響

與對(duì)照組相比(見表4)，添加酶制劑組、添加0.5%和1%海濱錦葵塊根粉組的溶菌酶活性分別提高了23.90%、3.94%和3.17%，但差異均不顯著(P>0.05)。與對(duì)照組相比，酶制劑組、0.5%和1%海濱錦葵塊根粉組的TNF-α含量分別降低了30.53%(P<0.01)、16.37%(P>0.05)和3.41%(P>0.05)。與1%的海濱錦葵塊根粉組相比，酶制劑組也顯著降低了TNF-α含量(P<0.05)。與對(duì)照組相比，酶制劑組、0.5%和1%海濱錦葵塊根粉組的IL-6含量分別降低了8.01%、13.67%和7.08%，但差異均不顯著(P>0.05)。添加酶制劑、0.5%和1%的海濱錦葵塊根粉對(duì)肉仔雞血清中新城疫疫苗抗體效價(jià)沒有顯著影響(P>0.05)。

表4 海濱錦葵塊根粉和酶制劑對(duì)肉仔雞血清免疫指標(biāo)的影響Table 4 Effects of Kosteletzkya virginica root tuber flour and enzyme preparation on some immunity parameters in plasma in broilers

注： 同行組間肩注不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，不同大寫字母表示差異極顯著(P<0.01)。

Note： Values with different lowercase superscripts within the same row means significant difference (P<0.05); Values with different capital letter superscripts within the same row means extreme difference (P<0.01).

3 討 論

酶制劑作為綠色環(huán)保畜禽添加劑，國(guó)內(nèi)外對(duì)此研究相對(duì)較多。在基礎(chǔ)飼糧中添加含蛋白酶、淀粉酶和木聚糖酶的復(fù)合酶制劑，能改善家禽的生產(chǎn)性能[8-9]。本試驗(yàn)表明，飼料中添加復(fù)合酶制劑對(duì)肉仔雞的生產(chǎn)性能無顯著影響，這與王修啟等[13]試驗(yàn)結(jié)果比較類似，研究結(jié)果的差異可能與飼糧營(yíng)養(yǎng)水平有關(guān)。另有研究發(fā)現(xiàn)[14-15]，日糧中添加黃酮類和多糖類提取物，均可以改善肉雞的生產(chǎn)性能。黃酮具有植物雌激素的作用，在動(dòng)物體內(nèi)影響性腺軸和生長(zhǎng)軸，使得睪酮和生長(zhǎng)激素等生成釋放增加，進(jìn)而加速蛋白質(zhì)合成，促進(jìn)肌肉生長(zhǎng)[16]。而植物多糖會(huì)影響肉仔雞的腸道發(fā)育和食糜中微生物菌群的平衡，促進(jìn)機(jī)體對(duì)飼料營(yíng)養(yǎng)成分的消化利用率，加快蛋白質(zhì)的合成，促進(jìn)肉仔雞的生長(zhǎng)[17]。本試驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)，添加海濱錦葵塊根粉對(duì)肉仔雞采食量和增重都有提高趨勢(shì)，說明海濱錦葵塊根粉中含有的黃酮類和多糖類等活性成分，在一定程度上有潛在的促生長(zhǎng)效應(yīng)。

法氏囊是禽類特有的體液免疫中樞免疫器官，胸腺是細(xì)胞免疫中樞器官，兩者分別是B和T淋巴細(xì)胞分化成熟的場(chǎng)所，脾臟是禽類最大的外周免疫器官，參與全身的非特異性及特異性免疫，中樞及外周免疫系統(tǒng)器官的發(fā)育狀況直接決定著家禽機(jī)體的免疫水平。免疫器官重量的增加是生長(zhǎng)發(fā)育較快的表現(xiàn)，而指數(shù)的提高意味著免疫系統(tǒng)成熟較快[18]。蔣桂韜等[19]研究發(fā)現(xiàn)，小麥型日糧中添加木聚糖酶顯著提高了黃羽肉雞免疫器官指數(shù)。本試驗(yàn)表明，添加酶制劑有提高肉仔雞法氏囊指數(shù)的趨勢(shì)。魏炳棟等[4]研究發(fā)現(xiàn)，飼料中添加黃芪多糖顯著影響肉仔雞的免疫器官發(fā)育，添加大豆黃酮對(duì)雞免疫器官發(fā)育也有顯著影響[20]。本試驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)，飼料中添加海濱錦葵塊根粉有提高肉仔雞法氏囊指數(shù)的趨勢(shì)，說明海濱錦葵塊根中含有的活性物質(zhì)有促進(jìn)肉仔雞免疫系統(tǒng)發(fā)育、提高其免疫性能的潛在能力。

機(jī)體在外來異物即抗原入侵后，免疫系統(tǒng)激活，產(chǎn)生促炎癥細(xì)胞因子和細(xì)胞趨化因子，通過一系列生理和病理性反應(yīng)來對(duì)付入侵者。而促炎癥因子往往是引起機(jī)體體溫升高、炎癥反應(yīng)、物質(zhì)代謝改變的主要因素之一，例如IL-1β、IL-6和TNF-α等[21]。本研究發(fā)現(xiàn)，酶制劑和海濱錦葵塊根粉都可以降低肉仔雞血清中IL-6和TNF-α的含量。大豆異黃酮和植物多糖都可以降低細(xì)胞因子的含量[22-23]，而IL-6能誘導(dǎo)B細(xì)胞分化和產(chǎn)生抗體，誘導(dǎo)T細(xì)胞活化增殖和分化，是炎性反應(yīng)的促發(fā)劑。TNF-α是炎癥反應(yīng)過程中出現(xiàn)最早、最重要的炎性介質(zhì)之一，能激活中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞，調(diào)節(jié)其他組織代謝活性并促使其他細(xì)胞因子的合成和釋放[24]。因此，本試驗(yàn)表明海濱錦葵塊根粉可以緩解或減少肉仔雞的炎癥反應(yīng)，提高機(jī)體的免疫功能。溶菌酶是一種低分子量不耐熱的堿性蛋白,是單核細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的分泌產(chǎn)物。它具抗菌、抗病毒、抗腫瘤等多種作用，血清溶菌酶活性是機(jī)體非特異性免疫反應(yīng)的重要指標(biāo)。許多研究發(fā)現(xiàn)，多糖和黃酮類物質(zhì)均可以提高雞血清中溶菌酶含量[25-26]。本研究也發(fā)現(xiàn)，酶制劑和海濱錦葵塊根粉都有提高肉仔雞血清中溶菌酶活性趨勢(shì)，表明海濱錦葵塊根中含有的多糖和黃酮等活性成分可以起到提高機(jī)體非特異性免疫功能的潛在能力。本試驗(yàn)測(cè)定了肉仔雞的新城疫疫苗的抗體效價(jià)，以評(píng)價(jià)肉仔雞的體液免疫情況，發(fā)現(xiàn)酶制劑對(duì)肉仔雞的新城疫疫苗抗體效價(jià)無顯著影響，但有升高的趨勢(shì)。而抗體水平直接反映機(jī)體的抗感染能力，表明酶制劑可以提高肉仔雞的抗感染能力，而未見海濱錦葵塊根粉對(duì)抗體效價(jià)的顯著影響。

4 小 結(jié)

酶制劑和海濱錦葵塊根粉對(duì)肉仔雞的生產(chǎn)性能有提高趨勢(shì)，可以在一定程度上提高機(jī)體的免疫功能，說明海濱錦葵塊根粉具有一定的飼料開發(fā)利用價(jià)值。如果能利用現(xiàn)代分離和波譜技術(shù)對(duì)海濱錦葵塊根的化學(xué)成分進(jìn)行進(jìn)一步的分離純化和結(jié)構(gòu)鑒定，必將為海濱錦葵塊根的進(jìn)一步開發(fā)利用提供更廣闊的空間。

參考文獻(xiàn)：

[1] 李思宇,袁亞光,欽 佩，等.海濱錦葵塊根皂苷及多糖的分離、純化及對(duì)細(xì)胞增殖活性的影響[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā),2013(25):87-91.

[2] 欽 佩,張鶴云,張?zhí)?從海濱錦葵中聯(lián)合提取錦葵黃酮與錦葵皂甙的方法及用途:中國(guó), 102210726A[P], 2011-10-12.

[3] 欽佩,張鶴云,張?zhí)?海濱錦葵多糖制備工藝及用途:中國(guó), 101638444A[P], 2010-2-3.

[4] 魏炳棟,于 維,陶 浩, 等.黃芪多糖對(duì)1-14日齡肉仔雞生長(zhǎng)性能、臟器指數(shù)及抗氧化能力的影響[J]. 動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào),2011, 23(3): 486-491.

[5] 梁 英,任成財(cái),姜 寧，等.黃芩黃酮對(duì)肉仔雞生長(zhǎng)性能和免疫功能的影響[J].動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào),2011,23(8) :1 409-1 414.

[6] Munir K,Maqsood S.A review on role of exogenous enzyme supplementation in poultry production [J]. Emirates Journal of Food and Agriculture,2013,25(1):66-80.

[7] Pariza M W,Cook M.Drtermining the safety of enzymes used in animal feed [J].Regulatory Toxicology and Pharmacology,2010,56:332-342.

[8] Cowieson A J,Bedford M,Ravindran V.Interactions between xylanase and glucanase in maize-soy-based diets for broilers[J].British Poultry Science,2010,51:246-257.

[9] 王明海,高 峰.飼料中添加復(fù)合酶制劑對(duì)肉雞生產(chǎn)性能的影響[J].飼料博覽,2008(2):9-12.

[10] Basmacioglu M H,Baysal S,Misirlioglu Z, et al. Effects of oregano essential oil with or without feed enzymes on growth performance, digestive enzyme, nutrient digestibility, lipid metabolism and immune response of broilers fed on wheat-soybean meal diets[J].British Poultry Science,2010,51:67-80.

[11] 高 峰,周光宏,韓正康.小麥米糠日糧添加粗酶制劑和寡果糖對(duì)雛雞生產(chǎn)性能、免疫和內(nèi)分泌的影響[J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào), 2002, 33(1):14-17.

[12] 周琴琴.不同劑量新城疫疫苗免疫對(duì)肉仔雞生長(zhǎng)性能、血液生化指標(biāo)和免疫功能的影響[D].楊凌:西北農(nóng)林科技大學(xué),2011.

[13] 王修啟, 邢寶松,張兆敏.小麥基礎(chǔ)日糧中添加木聚糖酶對(duì)肉雞生產(chǎn)性能的影響[J].河南農(nóng)業(yè)科學(xué),2004(1):44-47.

[14] 姜義寶,王成章,崔國(guó)文.紅車軸草異黃酮對(duì)肉雞免疫器官、免疫球蛋白及抗氧化性能的影響[J].2011,19(3):520-524.

[15] 梁 英,姜 寧,何雯娟,等.黃芩多糖對(duì)肉仔雞生長(zhǎng)性能和免疫功能的影響[J].動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào),2010,22(4): 1 031-1 036.

[16] 韓正康.異黃酮植物雌激素對(duì)雌性動(dòng)物生殖、泌乳和產(chǎn)蛋的影響及其作用機(jī)制探討[J].畜牧與獸醫(yī),2005,37(6):1-3.

[17] 陳紅莉.苜蓿多糖對(duì)肉仔雞消化代謝、生長(zhǎng)及免疫性能影響的研究[D].石河子: 石河子大學(xué), 2006.

[18] 王世若.現(xiàn)代動(dòng)物免疫學(xué)[M].長(zhǎng)春：吉林人民出版社,1996.

[19] 蔣桂韜,劉紹偉,周 輝，等.不同來源木聚糖酶對(duì)黃羽肉雞屠宰性能和免疫功能的影響[J]. 家畜生態(tài)學(xué)報(bào), 2010,31(2):48-52.

[20] 高 峰,周光宏,韓正康.大豆黃酮對(duì)雛公雞生產(chǎn)性能和機(jī)體免疫的影響[J].中國(guó)家禽, 2000, 22(10):8-9.

[21] Haddad J J,Saade N E,Safieh-Garabedian B.Interleukin-10 and the regulation of mitogen-activated protein kinases: are these signalling modules targets for the anti-inflammatory action of this cytokine [J]. Cellular Signalling,2003,15(3), 255-267.

[22] 許惠仙,汪 霞,金延華,等.大豆異黃酮和皂甙對(duì)肝癌前病變大鼠血清標(biāo)志酶及抗氧化活性的影響[J].大豆科學(xué),2012,31(1):124-126.

[23] 張 旭,費(fèi)紅軍,楊立峰，等.紫貽貝粗多糖提取物對(duì)小鼠免疫相關(guān)因子的影響[J].營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào),2011,33(5):497-501.

[24] Kogut M H.Impact of nutrition on the innate immune response to infection in poultry[J].The Journal of Applied Poultry Research, 2009,18(1):111-124.

[25] 廉新慧,李金敏,谷 巍.益生菌和兩種多糖合用對(duì)海蘭褐蛋雞免疫功能影響的研究[J].家畜生態(tài)學(xué)報(bào),2012,33(4):73-77.

[26] 蘇 杰,李 垚,陳 鑫,等.沙棘葉總黃酮對(duì)熱應(yīng)激條件下AA肉雞激素水平和免疫功能的影響[J].飼料研究,2009,30(15):22-25.