左志輝，唐素芳，王 衛(wèi)

(天津市藥品檢驗所，天津 300070)

利培酮是由比利時楊森公司研發(fā)的一種苯并異噁唑衍生物，系一種選擇性單胺能拮抗劑，為臨床療效較好的抗精神病藥物，用于治療急性和慢性精神分裂癥，可減輕與精神分裂癥有關(guān)的情感癥狀。本品在《英國藥典》(2012)、《歐洲藥典》(6.0)、《美國藥典》(34)、《日本藥局方》(15)均未見收載。利培酮膠囊規(guī)格為1 mg，原國家標(biāo)準(zhǔn)YBH10752006 采用小杯法測定其溶出度。目前國外藥典溶出度測定法中均未收載小杯法，且隨著檢測手段高效液相色譜儀靈敏度的提高，無需采用特殊裝置小杯法。本文建立了槳法測定利培酮膠囊的溶出度體系，并建立了更合理的液相色譜系統(tǒng)檢測其溶出量。大杯法適用于不同型號的溶出儀、更真實反映藥物溶出情況，本研究建立的方法具有推廣價值。此項目為2011 年國家藥品標(biāo)準(zhǔn)提高的研究項目，所建立的方法將收載于國家食品藥品監(jiān)督管理局國家藥品標(biāo)準(zhǔn)中，廣泛應(yīng)用于利培酮膠囊的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 安捷倫HP 1200 型高效液相色譜儀;Toyama NTR-6100 型溶出儀;Autoscience AS 10200 超聲儀;色譜柱:Agilent Extend C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)。

1.2 試劑和藥品 甲醇為色譜純，水為去離子水。利培酮對照品為中國生物制品檢定所提供(批號分別為100303 -200101、123 -9302)。利培酮膠囊(寧波大紅鷹藥業(yè)股份有限公司提供，批號110401、110501、110601，規(guī)格1 mg/粒)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗色譜柱:Agilent Extend C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);以甲醇-0.05 mol/L 醋酸銨溶液(用氨試液調(diào)節(jié)pH 至7.0)(60∶40)為流動相;檢測波長為234 nm;柱溫為40 ℃;流速1.0 ml/min。利培酮峰與其他雜質(zhì)峰的分離度大于6.5。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取利培酮對照品適量，加0.1 mol/L 鹽酸溶液溶解并稀釋制成每1 ml 中約含2 μg 的溶液，作為對照品溶液。

2.3 溶出度測定法 取本品，照溶出度測定法(《中國藥典》2010 年版二部附錄XC 第二法)，以0.1 mol/L鹽酸500 ml 為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速50 r/min，依法操作，經(jīng)30 min 時，取溶液濾過，棄去初濾液15 ml，取續(xù)濾液作為供試品溶液;另精密稱取利培酮對照品適量，加0.1 mol/L 鹽酸溶液溶解并稀釋制成每1 ml 中約含2 μg的溶液，作為對照品溶液。照“2.1”項下的色譜條件，精密量取供試品溶液與對照品溶液各50 μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計算每片的溶出量。限度為標(biāo)示量的80%，應(yīng)符合規(guī)定。對照品溶液與供試品溶液色譜圖見圖1。

圖1 對照品(A)供試品(B)HPLC 色譜圖

2.4 線性關(guān)系考查 精密稱取利培酮對照品20.83 mg，置200 ml 量瓶中，加0.1 mol/L 鹽酸超聲使溶解，放冷，并稀釋至刻度，搖勻，作為儲備液，分別精密量取1、2.5、5、6 和8 ml，置250 ml 量瓶中，用0.1 mol/L 鹽酸稀釋至刻度，搖勻。分別取上述溶液50 μl 注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以濃度C(μg/ml)對峰面積A作標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性回歸方程為A =74.7410 C -0.7129(r= 0. 9999，n = 5)。試驗結(jié)果表明，利培酮在0.4166 ～3.3328 μg/ml 范圍內(nèi)，濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗 分別取利培酮膠囊(批號110401)與對照品，照“2.2”與“2.3”項下方法配制對照品和供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，分別連續(xù)進樣6 次，按利培酮峰面積計算RSD 分別為0.53%和0.51%，結(jié)果表明該方法精密度較好。

2.6 回收率試驗 取利培酮對照品20.83 mg，置200 ml 量瓶中，加0.1 mol/L 鹽酸超聲使溶解，放冷，并稀釋至刻度，搖勻，作為儲備液，分別精密量取3、4 和6 ml，置250 ml 量瓶中，并分別加入處方量的空白輔料，超聲使混勻，用0.1 mol/L 鹽酸稀釋至刻度，搖勻，作為供試液(分別相當(dāng)于60%、80%、100%溶出濃度)。另取儲備液適量，稀釋制成每1 ml 含利培酮約2 μg 的溶液作為對照品溶液，取上述溶液分別進樣50 μl，測定峰面積，計算平均回收率為101. 7%，RSD 為0.57%。結(jié)果表明本方法的回收率高，見表1。

2.7 溶出均一性考查 取3 批樣品，照“2. 2”與“2.3”項下方法配制對照品溶液與供試品溶液，分別在10、20、30、45 和60 min 取樣，繪制溶出曲線(見圖2)，結(jié)果顯示，本品在45 min 時已達到全溶出，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，結(jié)果表明該方法均一性較好。故取樣點定為30 min 較合理。

表1 溶出度回收率結(jié)果

圖2 利培酮膠囊(110401、110501、110601 批)溶出曲線

2.8 穩(wěn)定性試驗 取溶出度測定供試品溶液，分別于0、2、11、16 和24 h 按“2.1”項下色譜條件進樣測定，按利培酮峰面積計算RSD 為0.78%。結(jié)果表明，利培酮供試品溶液在24 h 內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 輔料干擾試驗 按處方比例稱取空白輔料，混勻，取相當(dāng)于一粒膠囊的輔料量，按“溶出度測定法”項下方法配制空白輔料溶液，按“2.1”項下色譜條件進行測定。結(jié)果表明，空白基質(zhì)峰不干擾利培酮的測定，并與雜質(zhì)峰完全分離。

2.10 樣品溶出度測定 3 批樣品按“2.3”項下方法測定，結(jié)果見表2。

表2 溶出度測定結(jié)果

3 討論

3.1 流動相的選擇 原國標(biāo)YBH 10752006 利培酮膠囊溶出度測定采用小杯法;以甲醇-0.04 mol/L 醋酸銨溶液(醋酸調(diào)節(jié)pH 至3.0)(50∶ 50)為流動相。根據(jù)利培酮原料及其他制劑的有關(guān)物質(zhì)檢查色譜系統(tǒng)，經(jīng)試驗，建立了以甲醇-0.05 mol/L 醋酸銨溶液(用氨試液調(diào)節(jié)pH 至7.0)(60∶ 40)為流動相的色譜系統(tǒng)。該色譜系統(tǒng)下，利培酮峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離效果更佳。由于本品規(guī)格僅為1 mg，為滿足HPLC 法測定要求，溶出介質(zhì)體積確定為500 ml。

3.2 測定波長的選擇 原國標(biāo)YBH 10752006 利培酮膠囊溶出度測定檢測波長為274 nm，考慮到利培酮膠囊有關(guān)物質(zhì)與含量測定檢測波長均為234 nm，故溶出度測定檢測波長統(tǒng)一為234 nm。

3.3 濾膜吸附試驗 取對照品溶液，考查0.45 μm 濾膜的吸附情況。比較棄初濾液5、10 和15 ml，結(jié)果表明，棄初濾液15 ml 后濾膜無吸附。故擬定標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定，30 min 時取溶液濾過，棄去初濾液15 ml，取續(xù)濾液作為供試品溶液。