■張為利 喻禮懷 肖天榮 劉正旭 徐登輝 李志兵 張艷云

(1.揚州大學(xué)動物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，江蘇揚州 225009；2.寶應(yīng)金雞禽業(yè)有限公司，江蘇寶應(yīng) 225815)

動物生產(chǎn)過程產(chǎn)生的惡臭問題正逐漸引起關(guān)注和重視。生物除臭飼料添加劑漸漸成為減少畜舍惡臭的重要方法。絲蘭提取物(天然類固醇薩灑皂角苷，YUCCA)是我國批準(zhǔn)的唯一一種飼用除臭劑，減少畜舍氨氣效果明顯[1-3]。但資源有限，價格高。我國允許用作飼料添加劑的地衣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、凝結(jié)芽孢桿菌、側(cè)孢芽孢桿菌也有一定的減少畜舍氨氣的作用，但尚未見有以除臭為主要功效的飼用微生態(tài)制劑產(chǎn)品。

巨大芽孢桿菌1259（Bacillus.megaterium1259，BM1259）制劑，是一種正在研發(fā)的新型除臭調(diào)理飼料添加劑。張艷云等（2008）[4]研究表明，在產(chǎn)蛋雞日糧中添加2×106CFU/g的BM1259可降低冬季密閉雞舍空氣氨濃度53%～74%，硫化氫濃度55%～90%?；粲谰玫龋?012）[5]研究顯示，BM1259制劑可以減少生長肥育豬糞氨氣釋放量。但未見有BM1259與絲蘭提取物作用比較的研究報道。本試驗旨在通過測定和分析日糧中添加了BM1259與添加了絲蘭素的蛋雞排泄物在不同存放時間氨態(tài)氮、尿素氮、尿酸的濃度以及脲酶活性、pH值，比較在日糧中添加這兩種制劑對蛋雞排泄物存放過程中幾種指標(biāo)的變化及影響，為BM1259作為飼料添加劑除臭劑應(yīng)用提供一定的依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

BM1259制劑由“新型生物飼料添加劑——BM1259的研制”課題組提供。BM1259制劑含活菌數(shù)為1010個/g。

絲蘭素采購自上海優(yōu)久生物科技有限公司，主要成分由絲蘭屬植物提取加工而成。

1.2 試驗動物與試驗設(shè)計

選取飼養(yǎng)環(huán)境、養(yǎng)殖規(guī)模、養(yǎng)殖密度相近的兩棟320日齡京紅一號蛋雞，每棟8 000只，隨機(jī)選取一棟飼喂在基礎(chǔ)日糧中添加150 g/t絲蘭素，另一棟飼喂在基礎(chǔ)日糧中添加200 g/t BM1259制劑?；A(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。試驗前和試驗第28 d，在兩棟雞舍環(huán)境條件相同的位置分別選取4個重復(fù)，每個重復(fù)9只雞，收集30 min內(nèi)排出未污染的新鮮排泄物。測得正式試驗前兩組排泄物中氨氮濃度差異不顯著（P＞0.05）。

1.3 飼養(yǎng)管理

兩棟雞舍的大小結(jié)構(gòu)基本一致，采用3層階梯式籠養(yǎng)，每籠3只，按產(chǎn)蛋雞常規(guī)的生產(chǎn)管理程序?qū)蓷澋半u進(jìn)行飼養(yǎng)管理。每天觀察蛋雞采食、糞便以及精神狀況。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

1.4 樣本的采集與處理

試驗第28 d上午9：00收集試驗雞30 min內(nèi)排出未經(jīng)污染的新鮮排泄物。按每個重復(fù)混勻，每個重復(fù)取90 g蛋雞新鮮排泄物于500 ml的錐形瓶中，每個錐形瓶中加入270 ml生理鹽水，置于30℃水浴存放，并分別于 0、6、12、24、48、72、168 h 各取 10 ml溶液，4℃、4 000 r/min離心5 min，氨態(tài)氮測定離心10 min。取上清液測定其中氨態(tài)氮、尿素氮、尿酸的濃度及脲酶活性。

1.5 測定指標(biāo)與方法

NH3-N的測定采用靛酚藍(lán)比色法[6]；尿酸的測定采用試劑盒法（試劑盒購自南京建成生物工程研究所，編號為C012）；尿素氮測定采用試劑盒法（試劑盒購自南京建成生物工程研究所，編號為C013-1）；脲酶活性的測定采用靛酚藍(lán)比色法[7]。脲酶活性以每24 h每克糞樣產(chǎn)生的氨氮毫克數(shù)為單位；pH值測定采用Sartorius PB-21型酸度計[8]。

1.6 數(shù)據(jù)處理

用Excel 2012軟件初步整理數(shù)據(jù)，采用SPSS 13.0軟件中的獨立性T檢驗進(jìn)行平均數(shù)顯著性比較，結(jié)果以“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示。

2 結(jié)果

2.1 日糧中添加BM1259與添加絲蘭素對蛋雞排泄物存放過程中氨態(tài)氮濃度變化的比較(見圖1)

從圖1可以看出，BM1259組和絲蘭素組蛋雞排泄物中氨態(tài)氮濃度均隨著存放時間的增加而增長，變化基本一致，上升的范圍在0.3～0.7 mg/g。0～12 h上升的速度較快，12～72 h保持在一定的水平，72 h～7 d間略有上升。兩組各時間段氨態(tài)氮濃度均差異不顯著（P＞0.05）。說明日糧中添加BM1259與添加絲蘭素對蛋雞排泄物存放過程中氨態(tài)氮濃度影響基本相同。

圖1 日糧中添加兩種不同制劑蛋雞排泄物存放過程中不同時間段的氨態(tài)氮濃度

2.2 日糧中添加BM1259與添加絲蘭素對蛋雞排泄物存放過程中尿酸濃度變化的比較（見圖2）

圖2 日糧中添加兩種不同制劑蛋雞排泄物存放過程中不同時間段的尿酸濃度

從圖2可以看出，BM1259組和絲蘭素組蛋雞排泄物中尿酸濃度變化趨勢一致，0～12 h略有上升，12～72 h尿酸濃度降低，72 h～7 d基本穩(wěn)定。兩組尿酸濃度除72 h BM1259組顯著低于絲蘭素組（P＜0.05）外，其他各時間段均差異不顯著（P＞0.05）。說明日糧中添加BM1259與添加絲蘭素對蛋雞排泄物存放過程中尿酸濃度影響趨勢基本相同；添加BM1259與添加絲蘭素相比，可明顯降低蛋雞排泄物存放72 h尿酸濃度。

2.3 日糧中添加BM1259與添加絲蘭素對蛋雞排泄物存放過程中尿素氮濃度變化的比較(見圖3)

圖3 日糧中添加兩種不同制劑蛋雞排泄物

從圖3可以看出，在7 d存放期間BM1259組和絲蘭素組蛋雞排泄物中尿素氮的濃度均為先下降后上升，變化趨勢基本一致。0～24 h明顯下降，24 h～7 d逐漸上升。各時間段兩組尿素氮濃度統(tǒng)計學(xué)差異都不顯著（P＞0.05）。說明日糧中添加BM1259與絲蘭素對蛋雞排泄物存放過程中尿素氮濃度變化影響基本一致。

2.4 日糧中添加BM1259與添加絲蘭素對蛋雞排泄物存放過程中脲酶活性變化的比較（見圖4）

圖4 日糧中添加兩種不同制劑蛋雞排泄物存放過程中不同時間段的脲酶活性

從圖4可以看出，BM1259組與絲蘭素組蛋雞排泄物中的脲酶活性變化趨勢一致，0～12 h脲酶活性迅速下降,12～24 h迅速上升，24～72 h緩慢上升。兩組排泄物中脲酶活性范圍在1.244 2～2.297 3 μg/(g·h)之間，除存放168 h BM1259組極顯著高于絲蘭素組（P＜0.01）外，其他各時間點兩組間差異均不顯著（P＞0.05）。

2.5 日糧中添加BM1259與添加絲蘭素對蛋雞排泄物存放過程中pH值變化的比較(見圖5)

圖5 日糧中添加兩種不同制劑蛋雞排泄物存放過程中不同時間的pH值

從圖5可以看出，兩組蛋雞排泄物pH值隨著存放時間變化的趨勢基本一致，0～6 h時明顯下降，12～48 h時pH值上升，72～168 h又明顯下降。整個存放期間各時間點兩組間排泄物pH值差異均不顯著（P＞0.05），pH值變化范圍在6.60～7.06。

3 討論

梁國旗等（2009）[1]研究表明，絲蘭素能有效減緩氨態(tài)氮的產(chǎn)生，減少氨氣的散發(fā)，改善畜禽舍空氣環(huán)境。李曉剛（2012）[9]研究表明，BM1259能夠降低尿酸、尿素降解為氨態(tài)氮的速度，降低消化道內(nèi)容物pH值，從而減少蛋雞排泄物中氨氣氣體的釋放。程志斌等（2012）[10]在研究絲蘭提取物與枯草芽孢桿菌對肉雞舍臭氣影響中的研究表明，絲蘭素與枯草芽孢桿菌組合使用能夠顯著降低雞舍氨氣的釋放，改善肉雞生長性能。

雞舍氨氣的最主要來源是排泄物中含氮化合物在微生物作用下轉(zhuǎn)化為氨氣，特別是尿酸、尿素在微生物酶作用下降解為氨，而氨易揮發(fā)；而且排泄物中的pH值影響氨的揮發(fā)。本試驗結(jié)果顯示，在整個試驗期間各時間段BM1259組與絲蘭素組排泄物中氨態(tài)氮、尿素氮、尿酸濃度及脲酶活性和pH值，除72 h BM1259組尿酸濃度顯著低于絲蘭素組、168 h BM1259組脲酶活性極顯著高于絲蘭素組外，其他各時間點各指標(biāo)兩組間差異均不顯著，而且各指標(biāo)變化趨勢基本一致。說明日糧中添加BM1259，對蛋雞排泄物存放過程中氨氮的釋放作用相近。

4 結(jié)論

日糧中添加BM1259與添加絲蘭素的蛋雞排泄物在30℃存放0～168 h期間排泄物中氨態(tài)氮、尿素氮、尿酸濃度及脲酶活性和pH值變化趨勢基本一致。

30 ℃存放0、6、12、24、48、72、168 h排泄物中氨態(tài)氮、尿素氮、尿酸濃度及脲酶活性和pH值，除72 h BM1259組尿酸濃度顯著低于絲蘭素組、168 h BM1259組脲酶活性極顯著高于絲蘭素組外，其他各時間點各指標(biāo)兩組間差異均不顯著。

本試驗條件下，蛋雞排泄物中氨態(tài)氮、尿素氮、尿酸的濃度及脲酶活性范圍分別為0.294 3～0.746 6 mg/g，0.357 2～0.974 2 mg/g，0.371 6～1.539 9 mg/g和1.244 2～2.297 3 μg/(g·h)。