■王 燕 文奇男 陳偉康 劉曉蘭 劉 驥 張永根 郭建華

（1.齊齊哈爾大學(xué)食品與生物工程學(xué)院，黑龍江齊齊哈爾 161006；2.遼寧省農(nóng)牧業(yè)機(jī)械研究所有限公司，遼寧沈陽(yáng) 110036；3.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，黑龍江哈爾濱，150030）

我國(guó)飼料工業(yè)中蛋白飼料短缺現(xiàn)象比較嚴(yán)重，因此需要廣泛開(kāi)發(fā)新的蛋白質(zhì)資源，利用微生物發(fā)酵法生產(chǎn)高蛋白飼料是解決目前飼料蛋白質(zhì)資源匱乏的有效途徑。我國(guó)玉米年產(chǎn)量達(dá)1.2×108t，約占世界總產(chǎn)量的22%，因此玉米加工淀粉的副產(chǎn)物玉米黃粉含量豐富，且玉米黃粉蛋白含量可達(dá)到60%以上，氨基酸總量高于豆粕和魚粉，且代謝能高于玉米。但是其蛋白主要是以醇溶蛋白為主，占蛋白總量的68%，水溶性差，不易被吸收，適口性差，且氨基酸不平衡，因此限制了玉米黃粉的有效利用。

酶法和微生物發(fā)酵法都可以有效酶解玉米黃粉，但是酶法水解肽味苦，微生物發(fā)酵可以改善玉米黃粉風(fēng)味，且成本較低，因此利用微生物固態(tài)發(fā)酵玉米黃粉是提高玉米附加值的必然趨勢(shì)。與液態(tài)發(fā)酵相比，固態(tài)發(fā)酵設(shè)備構(gòu)造簡(jiǎn)單、投資少、能耗低、便于推廣。龐錚采用好食性脈孢霉發(fā)酵玉米黃粉制作發(fā)酵飼料，顯著提高可溶性蛋白含量，并飼喂鵪鶉，降低了飼料成本。李秀梅通過(guò)誘變篩選出產(chǎn)蛋白酶高的納豆芽孢桿菌發(fā)酵玉米黃粉，以鵪鶉為試驗(yàn)動(dòng)物，得出在全價(jià)配合飼料中添加45%的納豆桿菌濃醪發(fā)酵玉米黃粉可以提高鵪鶉的生長(zhǎng)性能，降低飼料成本。閆亞婷等采用納豆芽孢桿菌發(fā)酵玉米黃粉顯著提高蛋白質(zhì)溶解度和可溶性糖含量，從而改善玉米黃粉的飼用品質(zhì)。鄭喜群等通過(guò)對(duì)納豆桿菌發(fā)酵玉米黃粉產(chǎn)生抗氧化活性肽的研究，確定了納豆桿菌發(fā)酵玉米黃粉的適宜工藝條件，使玉米黃粉的可溶性蛋白質(zhì)含量達(dá)到23.67 mg/ml。

許多研究表明，微生物發(fā)酵飼料對(duì)菌種依賴性較大，因此需要選育優(yōu)質(zhì)菌株。菌株的選擇要從菌株特性（分類、來(lái)源、純度、發(fā)酵特性）、安全性資料（毒理、藥理）、健康效應(yīng)及研究結(jié)果等方面綜合考慮。由于微生物酶系互補(bǔ)，因此復(fù)合菌種發(fā)酵效果優(yōu)于單菌種發(fā)酵。好食性脈孢霉是本實(shí)驗(yàn)室自主研發(fā)的一類對(duì)底物和環(huán)境要求較低，且能利用多種碳源的高產(chǎn)蛋白酶的安全菌株，目前已申請(qǐng)發(fā)明專利。王曉杰等用好食性脈孢霉對(duì)玉米酒糟進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵，料液比1∶1.2，接菌量1×106個(gè)孢子/g干基，初始pH值7.5，溫度為30℃，發(fā)酵96 h，測(cè)定發(fā)酵浸提液蛋白溶出率為36.30%，比發(fā)酵前提高28.96%，粗纖維含量減少30.32%。

納豆芽孢桿菌，具有較強(qiáng)的抗菌活性，但是卻能與其他益生菌搭配使用以提高發(fā)酵飼料性能。將納豆芽孢桿菌與3株乳酸菌混菌發(fā)酵進(jìn)行體外厭氧培養(yǎng)研究，結(jié)果表明納豆芽孢桿菌通過(guò)產(chǎn)生過(guò)氧化氫酶和枯草蛋白酶促進(jìn)乳酸桿菌的生長(zhǎng)和活性。牛麗亞等研究發(fā)現(xiàn)，納豆芽孢桿菌和啤酒酵母混菌發(fā)酵麥麩、玉米黃粉和豆粕的混合物比單菌株發(fā)酵產(chǎn)物穩(wěn)定。

本課題以玉米黃粉為主要原料，麩皮為輔助原料，以好食性脈孢霉和納豆芽孢桿菌為菌株，采用單因素法對(duì)發(fā)酵玉米黃粉的條件進(jìn)行優(yōu)化，最大限度地提高玉米黃粉的蛋白溶解性，提高玉米黃粉的附加值，為緩解資源短缺和提高原料利用率做貢獻(xiàn)。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)菌種

納豆芽孢桿菌和好食性脈孢霉由齊齊哈爾大學(xué)生物工程實(shí)驗(yàn)室提供。

1.2 培養(yǎng)基

納豆菌液體種子培養(yǎng)基：葡萄糖2%，K2HPO40.1%，MgSO40.05%，5%(v/v)的土豆汁(20%比例配制)，pH值7.0。

脈孢霉液體種子培養(yǎng)基：K2HPO40.05%，10%(v/v)的土豆汁(20%比例配制)，pH值6.4。

發(fā)酵培養(yǎng)基：玉米黃粉∶麩皮=8∶2，料水比=1∶1.6，pH值自然。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 納豆桿菌種子生長(zhǎng)曲線的確定

本試驗(yàn)在溫度為37℃、裝液量為50 ml（250 ml錐形瓶）、搖瓶轉(zhuǎn)速為200 r/min的條件下培養(yǎng)，每4 h取一次樣，在560 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度，再根據(jù)菌體濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線算出菌體濃度。以時(shí)間為橫坐標(biāo)，菌體濃度為縱坐標(biāo)，作圖。

1.3.2 脈孢霉種子生長(zhǎng)曲線的確定

在玉米漿10%（v/v）,K2HPO40.05%(w/w),搖床轉(zhuǎn)速180 r/min，錐形瓶裝樣量60 ml/250 ml,接菌量6.0×106個(gè)/ml，30℃，初始pH值6.4的條件下培養(yǎng)。每4 h取樣一次，用重量法測(cè)出它的菌體濃度。以培養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo)，菌體濃度為縱坐標(biāo)，繪制種子培養(yǎng)基中菌體的生長(zhǎng)曲線。

1.3.3 發(fā)酵培養(yǎng)基的優(yōu)化

以8 g玉米黃粉＋2 g麩皮為發(fā)酵底物，料水比=1∶1.6，菌體混合比（w/w，納豆菌∶脈孢霉）=5∶5，兩種菌同時(shí)接到發(fā)酵底物上，接種量0.23%（w/w），30℃，pH值自然，培養(yǎng)時(shí)間40 h。以上述條件為基礎(chǔ)，采用單因素試驗(yàn)優(yōu)化料水比、菌體混合比、接菌先后順序及間隔、接種量、發(fā)酵溫度、發(fā)酵時(shí)間。

2 結(jié)果與分析

2.1 納豆桿菌生長(zhǎng)曲線的確定（見(jiàn)圖1）

圖1 納豆菌的生長(zhǎng)曲線

由圖1可知，在0～8 h，納豆芽孢桿菌處于適應(yīng)期，從第8 h開(kāi)始，納豆菌開(kāi)始快速生長(zhǎng)，直到20 h，納豆菌開(kāi)始進(jìn)入穩(wěn)定期。對(duì)數(shù)期的菌體生長(zhǎng)迅速，對(duì)環(huán)境適應(yīng)力強(qiáng)，適合接種。對(duì)數(shù)期后期也符合這個(gè)條件，而且有較高的菌體濃度，能縮短在發(fā)酵培養(yǎng)基中的培養(yǎng)時(shí)間。綜上所述，納豆桿菌的適宜種齡為19 h，此時(shí)菌體濃度為3.96 mg/ml。

2.2 好食性脈孢霉生長(zhǎng)曲線（見(jiàn)圖2）

圖2 好食脈孢霉的生長(zhǎng)曲線

由圖2可以很明顯看出，在0～8 h脈孢霉處于生長(zhǎng)適應(yīng)期，主要是菌體吸水膨脹，子囊消失的過(guò)程。從第8 h開(kāi)始，菌體生長(zhǎng)迅速，進(jìn)入生長(zhǎng)對(duì)數(shù)期，一直到20 h。20～24 h菌體生長(zhǎng)依然比較快，可能由于菌體濃度過(guò)高，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)變少，菌體之間的競(jìng)爭(zhēng)性抑制開(kāi)始變得顯著，菌體濃度增長(zhǎng)趨于平緩。從24 h開(kāi)始，菌體濃度幾乎沒(méi)有變化，進(jìn)入了生長(zhǎng)穩(wěn)定期。綜上所述，因此選擇20 h為脈孢霉最佳種子培養(yǎng)時(shí)間，此時(shí)菌體濃度為3.65 mg/ml。

2.3 混菌發(fā)酵培養(yǎng)基的優(yōu)化

2.3.1 發(fā)酵培養(yǎng)基培養(yǎng)時(shí)間的優(yōu)化

在微生物發(fā)酵過(guò)程中，產(chǎn)物濃度會(huì)有所變化，培養(yǎng)到一定時(shí)間會(huì)使產(chǎn)率達(dá)到最大，繼續(xù)培養(yǎng)，產(chǎn)率則會(huì)減小。因此要獲得發(fā)酵產(chǎn)物，需根據(jù)不同菌種和不同底物來(lái)確定最佳發(fā)酵時(shí)間。以8 g玉米黃粉加2 g麩皮為發(fā)酵底物，料水比=1∶1.6，菌體混合比（w/w,納豆菌∶脈孢霉）=5∶5，兩種菌同時(shí)接到發(fā)酵底物上，接種量0.23%（w/w），30℃，pH值自然，培養(yǎng)時(shí)間分別為0、12、22、32、40、46、58、70、82 h。充分拍打發(fā)酵錐形瓶，使發(fā)酵培養(yǎng)基松散，再往發(fā)酵錐形瓶中分別加50 ml生理鹽水，浸提4 h，然后測(cè)定可溶性蛋白含量，并計(jì)算出蛋白增加量（選擇用可溶性蛋白增加量來(lái)衡量培養(yǎng)條件的好壞，可忽略底物不同而引起的培養(yǎng)基蛋白含量不一致的問(wèn)題）。試驗(yàn)結(jié)果如圖3。

從圖3可知，0～12 h，可溶性蛋白增加緩慢，12～40 h，可溶性蛋白增加量比較大，當(dāng)培養(yǎng)40 h時(shí)，可溶蛋白為9.9 mg/ml。到了40 h以后，由于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消耗比較多，40～58 h可溶性蛋白增加量降低。但58～70 h時(shí)，發(fā)酵浸提液中可溶性蛋白增加量又增多，并在70 h時(shí)達(dá)到最大，為10.4 mg/ml，這可能是由于菌體出現(xiàn)了二次生長(zhǎng)的原因，再次利用了發(fā)酵底物中的氮源，合成新的蛋白質(zhì)。培養(yǎng)基在35 h后，開(kāi)始依稀有納豆的味道，70 h時(shí)，有大量乳白菌絲生成，培養(yǎng)基有異香。

圖3 培養(yǎng)時(shí)間對(duì)可溶性蛋白增加量的影響

由于培養(yǎng)40 h和70 h可溶性蛋白含量增加量差別不大，考慮到工業(yè)上需要控制生產(chǎn)成本和提高設(shè)備利用率，選擇培養(yǎng)時(shí)間為40 h。

2.3.2 發(fā)酵底物中麩皮與玉米黃粉添加比例優(yōu)化

培養(yǎng)基是微生物發(fā)酵的基礎(chǔ)，它為微生物提供生長(zhǎng)繁殖所必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。玉米黃粉營(yíng)養(yǎng)豐富，但成粉末狀，加水易結(jié)塊，不利于空氣流動(dòng)和菌體發(fā)酵。麩皮價(jià)格低廉，添加它能降低成本，并且能使發(fā)酵培養(yǎng)更松散，透氣性更好，需要研究它的添加比例。

在250 ml錐形瓶中裝入麩皮和玉米黃粉共10 g，麩皮∶玉米黃粉分別為1∶9，2∶8，3∶7，4∶6，5∶5，料水比=1∶1.6，菌體混合比（w/w，納豆菌∶脈孢霉）=5∶5，兩種菌同時(shí)接到底物上，接種量0.23%（w/w），30℃，pH值自然，培養(yǎng)時(shí)間40 h。振蕩發(fā)酵錐形瓶，使發(fā)酵培養(yǎng)基松散，再往錐形瓶中分別加50 ml生理鹽水，浸提4 h，然后測(cè)定可溶性蛋白含量，并計(jì)算出蛋白增加量。試驗(yàn)結(jié)果如圖4所示。

圖4 不同比例輔料添加對(duì)可溶性蛋白增加量的影響

麩皮的蛋白含量比玉米黃粉蛋白少很多，因此可被菌體利用的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)少，大量添加降低發(fā)酵產(chǎn)物營(yíng)養(yǎng)成分，所以它只能作為輔料少量添加。從圖4可知，當(dāng)麩皮∶玉米黃粉為3∶7或者更高時(shí)，可溶性蛋白增加較少。當(dāng)麩皮∶玉米黃粉為2∶8時(shí)，可溶性蛋白增加量最多。此時(shí)的培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)比較豐富，而且透氣性好，適合作為發(fā)酵底物配方。當(dāng)玉米黃粉∶麩皮為9∶1時(shí)，加水后易結(jié)塊，透氣性不好，因而影響菌體發(fā)酵。

2.3.3 菌體混合比例的優(yōu)化

納豆芽孢桿菌繁殖速度要比好食性脈孢霉快，好食性脈孢霉的芽孢個(gè)體要比納豆芽孢桿菌個(gè)體大，因此最適培養(yǎng)條件有一定差別。要讓它們?cè)谙嗤呐囵B(yǎng)條件下，更好更快的利用底物來(lái)發(fā)酵，需要一個(gè)適宜的菌體混合比。

菌體混合比（w/w，納豆菌∶脈孢霉）分別為1∶9，3∶7，5∶5，7∶3，9∶1，2 g麩皮+8 g玉米黃粉，料水比=1∶1.6，兩種菌同時(shí)接到發(fā)酵培養(yǎng)基中，接種量0.23%（w/w），30 ℃，pH值自然，培養(yǎng)時(shí)間40 h。振蕩發(fā)酵錐形瓶，使發(fā)酵培養(yǎng)基松散，再往錐形瓶中分別加50 ml生理鹽水，浸提4 h，然后測(cè)定可溶性蛋白含量，并計(jì)算出蛋白增加量。試驗(yàn)結(jié)果如圖5所示。

圖5 菌體混合比例對(duì)可溶性蛋白增加量的影響

培養(yǎng)基中的微生物協(xié)同互生發(fā)酵，菌體繁殖較快，代謝旺盛，又能分泌不同的蛋白酶類，能充分利用發(fā)酵底物中的氮源來(lái)合成蛋白。由圖5可知，在納豆芽孢桿菌和好食性脈孢霉比例為3∶7和5∶5的情況下，可溶性蛋白增加量較多。當(dāng)納豆菌∶脈孢霉（w/w）為3∶7時(shí)，增加的最多，是最適宜的比例。

2.3.4 接種量的優(yōu)化

發(fā)酵時(shí)，綜合產(chǎn)物的得率和生產(chǎn)成本，會(huì)有一個(gè)適宜的接種量。本試驗(yàn)是混菌發(fā)酵，還要考慮到菌株之間的競(jìng)爭(zhēng)性，更有必要對(duì)其適宜接菌量進(jìn)行確定。

試驗(yàn)選擇接菌量分別為：0.15%(w/w)，0.23%(w/w)、0.31%(w/w)、0.39%(w/w)、0.47%(w/w)，兩種菌同時(shí)接到發(fā)酵培養(yǎng)基中，菌體混合比（w/w,納豆菌∶脈孢霉）為3∶7，2 g麩皮+8 g玉米黃粉，料水比=1∶1.6，30℃，pH值自然，培養(yǎng)時(shí)間40 h。振蕩發(fā)酵錐形瓶，使發(fā)酵培養(yǎng)基松散，不粘瓶，再往錐形瓶中分別加50 ml生理鹽水，浸提4 h，然后測(cè)定可溶性蛋白含量，并計(jì)算出蛋白增加量。試驗(yàn)結(jié)果如圖6所示。

圖6 接菌量對(duì)可溶性蛋白增加量的影響

從圖6可知，隨著接菌量的增加，可溶性蛋白含量呈現(xiàn)先增大后減小的趨勢(shì)。不難看出，接菌量大，可溶性蛋白含量增加的多，但當(dāng)接菌量過(guò)大時(shí)，會(huì)使菌體稠密，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和氧氣供應(yīng)不足，不利于發(fā)酵。另外，從控制生產(chǎn)成本的角度考慮，也應(yīng)選擇接菌量為0.31%(w/w)。

2.3.5 培養(yǎng)溫度的優(yōu)化

一切生化反應(yīng)都與溫度有關(guān)，它是影響微生物發(fā)酵的重要因素之一。由于蛋白質(zhì)、核酸等機(jī)體組成物質(zhì)對(duì)溫度敏感，因此溫度對(duì)菌體生長(zhǎng)、產(chǎn)物合成都有很大影響，甚至能決定微生物生物發(fā)酵的方向。因此，需確定一個(gè)適宜溫度，使發(fā)酵按設(shè)想方向進(jìn)行。

納豆芽孢桿菌的適宜生長(zhǎng)溫度為28℃，好食性脈孢霉適宜生長(zhǎng)溫度為37℃。本試驗(yàn)選擇的發(fā)酵溫度分別為25、28、30、32、34 ℃，菌體混合比（w/w,納豆菌∶脈孢霉）為3∶7，兩種菌同時(shí)接到培養(yǎng)基中，接菌量為0.31%（w/w），2 g麩皮+8 g玉米黃粉，料水比=1∶1.6，pH值自然，培養(yǎng)時(shí)間40 h。充分振蕩發(fā)酵錐形瓶，使發(fā)酵培養(yǎng)基松散，不成塊，再往錐形瓶中分別加50 ml生理鹽水，浸提4 h，然后測(cè)定可溶性蛋白含量，并計(jì)算出蛋白增加量。試驗(yàn)結(jié)果如圖7所示。

圖7 發(fā)酵溫度對(duì)可溶性蛋白增加量的影響

由圖7可知，當(dāng)溫度為30～34℃時(shí)，發(fā)酵效果比較好，培養(yǎng)基中的可溶性蛋白增加量比較多。但此時(shí)的溫度不是納豆芽孢桿菌和好食性脈孢霉各自的最佳生長(zhǎng)溫度，說(shuō)明在此溫度下，兩種微生物盡管個(gè)體生長(zhǎng)未達(dá)到最好，但此溫度適合混菌生產(chǎn)可溶性蛋白。而32℃可溶性蛋白增加量最多，為最適培養(yǎng)溫度。

2.3.6 料水比的優(yōu)化

固態(tài)發(fā)酵最大的特點(diǎn)就是培養(yǎng)基含游離態(tài)水少甚至不含游離態(tài)水，因此無(wú)廢水排放，且易保存，發(fā)酵產(chǎn)品能直接飼喂。水對(duì)菌體生產(chǎn)和產(chǎn)物合成都有較大影響，當(dāng)培養(yǎng)基中含水量多會(huì)使氧氣含量減少，從而影響發(fā)酵，如果含水量過(guò)少則無(wú)法滿足菌體的代謝需要，抑制產(chǎn)物合成。因此需要根據(jù)不同的菌株和底物來(lái)確定一個(gè)合適的料水比。

本試驗(yàn)選擇的料水比分別是1∶1.2、1∶1.6、1∶2.0、1∶2.4、1∶2.8，發(fā)酵溫度為32 ℃，菌體混合比（w/w,納豆菌∶脈孢霉）為3∶7，兩種菌同時(shí)接到發(fā)酵培養(yǎng)基中，接菌量為0.31%（w/w），2 g麩皮+8 g玉米黃粉，pH值自然，培養(yǎng)時(shí)間40 h。充分振蕩發(fā)酵錐形瓶，使發(fā)酵培養(yǎng)基松散，不成塊，再往錐形瓶中分別加50 ml生理鹽水，浸提4 h，然后測(cè)定可溶性蛋白含量，并計(jì)算出蛋白增加量。試驗(yàn)結(jié)果如圖8所示。

圖8 料水比對(duì)可溶性蛋白增加量的影響

在試驗(yàn)開(kāi)始前，料水比1∶1.6，1∶2.0物料和水混合比較好，1∶1.2較松散，但是1∶2.4，1∶2.8較緊密。由圖8可知，當(dāng)料水比為1∶2.0時(shí)，可溶性蛋白增加最多，而且發(fā)酵培養(yǎng)基比較松散，結(jié)塊現(xiàn)象不明顯。

2.3.7 接菌順序及間隔時(shí)間的優(yōu)化

兩種菌混合發(fā)酵時(shí)，總會(huì)有一個(gè)相對(duì)優(yōu)勢(shì)和一個(gè)相對(duì)弱勢(shì)的菌株，它們對(duì)發(fā)酵培養(yǎng)基的適應(yīng)時(shí)間和發(fā)酵時(shí)間都會(huì)有些差別。對(duì)本試驗(yàn)來(lái)說(shuō)，霉菌的菌體生長(zhǎng)比納豆菌慢，發(fā)酵所需時(shí)間也較納豆菌長(zhǎng)，因此需要對(duì)接菌順序和間隔時(shí)間進(jìn)行優(yōu)化。

本試驗(yàn)接菌先后和間隔時(shí)間分別為：A：先往培養(yǎng)基中加脈孢霉，24 h后再接入納豆菌；B：先加脈孢霉，12 h后再加納豆菌；C：納豆菌和脈孢霉同時(shí)接入；D：先加納豆菌，12 h后再加脈孢霉；E：先加納豆菌，24 h后再加脈孢霉。菌株混合后再繼續(xù)培養(yǎng)40 h，其他條件分別為，菌體混合比（w/w，納豆菌∶脈孢霉）為3∶7，2 g麩皮+8 g玉米黃粉，料水比=1∶2.0，接種量0.31%（w/w），32℃，pH值自然。培養(yǎng)完成后，振蕩發(fā)酵錐形瓶，使發(fā)酵培養(yǎng)基松散，再往錐形瓶中分別加50 ml生理鹽水，浸提4 h，然后測(cè)定可溶性蛋白含量，并計(jì)算出蛋白增加量。試驗(yàn)結(jié)果如圖9所示。

圖9 接菌順序及時(shí)間間隔對(duì)可溶性蛋白增加量的影響

由圖9可知，先接入脈孢霉接再入納豆菌，然后繼續(xù)培養(yǎng)的效果要強(qiáng)于先加納豆菌或者兩種微生物同時(shí)添加。脈孢霉的培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)，先接脈孢霉能讓菌體先快速生長(zhǎng)，到一定數(shù)量時(shí)，再接入納豆菌，此時(shí)它們協(xié)同發(fā)酵，甚至互相利用對(duì)方所合成營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，可溶性蛋白含量增加明顯。A脈孢霉總共培養(yǎng)了64 h，納豆菌培養(yǎng)了40 h，B脈孢霉培養(yǎng)了52 h，納豆菌培養(yǎng)了40 h，這兩種情況下可溶性蛋白增加接近，為了提高設(shè)備利用率選擇B較合適（從設(shè)備利用率考慮，C最佳，工業(yè)上可以考慮用C條件），可溶性蛋白增加11.8 mg/ml。

3 結(jié)論

混菌發(fā)酵玉米黃粉的發(fā)酵條件：發(fā)酵培養(yǎng)基組成為麩皮∶玉米黃粉=2∶8，料水比=1∶2,接菌順序及時(shí)間為：先接脈孢霉，12 h后再接納豆菌，接種量為0.31%(w/w)，培養(yǎng)溫度為32℃，pH值自然，培養(yǎng)40 h，可溶性蛋白增加11.8 mg/ml。

（參考文獻(xiàn)12篇，刊略，需者可函索）