鄒維生

前列地爾對(duì)兔內(nèi)皮細(xì)胞缺氧復(fù)氧損傷后抗栓功能的影響

鄒維生

目的探討前列地爾(PGE1)對(duì)兔內(nèi)皮細(xì)胞缺氧復(fù)氧損傷模型的抗栓功能影響。方法對(duì)體外培養(yǎng)、并建立兔內(nèi)皮細(xì)胞缺氧復(fù)氧損傷的模型進(jìn)行分組：模型組、低濃度PGE1組、中濃度PGE1組、高濃度PGE1組、正常組。對(duì)以上各組培養(yǎng)上清液中一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、細(xì)胞內(nèi)血管假性血友病因子(vWF)的含量或表達(dá)等進(jìn)行測(cè)量。結(jié)果與正常組比較, 模型組NO含量、SOD活性、vWF表達(dá)均有所下降, MDA含量增加, 且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；而低、中、高濃度PGE1組與模型組比較, 其NO含量、SOD活性、vWF表達(dá)均有所增加或增強(qiáng), MDA含量降低, 且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論P(yáng)GE1對(duì)機(jī)體缺氧復(fù)氧損傷之后的血管內(nèi)皮細(xì)胞抗栓功能具有積極的保護(hù)作用。

前列地爾；內(nèi)皮細(xì)胞；模型；缺氧復(fù)氧；抗栓功能

前列地爾(PGE1)具有廣泛的藥理性活作用, 對(duì)某些神經(jīng)-體液因子的表達(dá)有積極的調(diào)節(jié)作用, 從而間接地具有保護(hù)內(nèi)皮的作用［1］。本文通過對(duì)體外培養(yǎng)、并建立兔內(nèi)皮細(xì)胞缺氧復(fù)氧損傷的模型進(jìn)行分組研究, 以探討PGE1對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞抗栓功能的保護(hù)作用?，F(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料

1. 1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 1周齡試驗(yàn)用大白兔。

1. 2藥品及試劑 前列地爾注射液、膠原酶、胰蛋白酶、SOD、NO試驗(yàn)劑盒、RPMⅠ164培養(yǎng)液、兔抗人Factor Ⅷ抗體等。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2. 1兔內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng) 無菌環(huán)境中, 取急死試驗(yàn)用兔主動(dòng)脈, 將其主動(dòng)脈外膜去除, 并用PBS清洗3次之后加入0.1%Ⅱ型膠原酶；并于37℃條件下, 消化40 min；離心10 min之后棄除上清液；加入RPMⅠ164培養(yǎng)液混勻沉淀細(xì)胞。置于37℃條件、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng), 待用。

2. 2建立缺氧復(fù)氧模型 配制模擬缺氧和復(fù)氧溶液。將缺氧溶液替換正常培養(yǎng)液3 h, 以達(dá)缺氧目的；再將復(fù)氧溶液替換缺氧溶液2 h, 達(dá)到復(fù)氧效果［2］。

2. 3分組實(shí)驗(yàn) 正常組：正常細(xì)胞培養(yǎng)；模型組：缺氧復(fù)氧操作損傷模型；低濃度組：0.05 μg/ml+缺氧復(fù)氧損傷；中濃度組：0.20 μg/ml+缺氧復(fù)氧損傷；高濃度組：0.40 μg/ml +缺氧復(fù)氧損傷；同時(shí), 將前列地爾加入缺氧復(fù)氧液中, 并逐漸調(diào)整至以上終濃度。

2. 4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 本文采用SPSS16.0對(duì)文中所有相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析, 計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn), P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

與正常組比較, 模型組NO含量、SOD活性、vWF表達(dá)均有所下降, MDA含量增加, 且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；而低、中、高濃度PGE1組與模型組比較, 其NO含量、SOD活性、vWF表達(dá)均有所增加或增強(qiáng), MDA含量降低, 且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

4 討論

內(nèi)皮細(xì)胞及其合成物質(zhì)具有對(duì)抗和促進(jìn)血栓形成的雙重功能。則可以通過對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞分泌物活性物質(zhì)來進(jìn)一步判斷內(nèi)皮細(xì)胞的抗栓功能。國(guó)內(nèi)外諸多文獻(xiàn)均指明：引發(fā)內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)損傷以及功能障礙主要是由于氧化操作引起的脂質(zhì)過氧化化產(chǎn)物MDA, 并由MDA的變化進(jìn)一步判斷內(nèi)皮細(xì)胞損傷的大概原因。與此同時(shí), 作為機(jī)體重要的抗氧化酶SOD的活性變化也同樣可以對(duì)機(jī)體內(nèi)部抗氧化損傷能力的加以具體反映［3］。

本文通過比較正常組和模型組SOD和MDA水平發(fā)現(xiàn),模型組SOD活動(dòng)降低明顯, 而MDA水平升高明顯, 從而證明缺氧復(fù)氧曾對(duì)細(xì)胞造成了較為嚴(yán)重的氧化損傷。本文又通過將三組不同PGE1濃度組與模型組比較, 其中, SOD活性均升高明顯；而MDA水平均低于模型組。因此, 該對(duì)比實(shí)驗(yàn)也說明了PGE1可有效提高內(nèi)皮細(xì)胞清除氧自由基的能力, 從而使緩角、降低內(nèi)皮細(xì)胞脂質(zhì)過氧化損傷程度, 起到了積極的保護(hù)作用。同時(shí), 內(nèi)皮細(xì)胞分泌的重要抗栓因子——NO, 也是反映內(nèi)皮細(xì)胞功能的指標(biāo)之一。而在文中的實(shí)驗(yàn)結(jié)果中, 則可以看出, 與正常組比較, 模型組NO含量下降明顯；而低、中、高濃度PGE1組與模型組比較, 其NO含量均有所增加, 且差異明顯。從而也證明了PGE1可通過積極活化NO, 使其濃度升高, 可有效對(duì)抗血栓形成。vWF作為外源性凝血系統(tǒng)的啟動(dòng)因子, 具有促進(jìn)血小板聚焦和黏附作用, 也是內(nèi)皮細(xì)胞抗栓功能的重要標(biāo)志物。本文模型組與正常組比較, vWF表達(dá)均有所下降；而低、中、高濃度PGE1組與模型組比較, vWF表達(dá)均有所增加；這也明說了vWF具有保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞抗栓功能的作用。

因此, PGE1對(duì)機(jī)體缺氧復(fù)氧損傷之后的血管內(nèi)皮細(xì)胞抗栓功能具有積極的保護(hù)作用。

［1］ 王少綱.前列地爾脂微球載體治療急性腦梗死臨床療效觀察.中國(guó)實(shí)用神經(jīng)疾病雜志, 2010, 13(20):21-22.

［2］ 關(guān)欣, 李應(yīng)東.細(xì)胞缺氧復(fù)氧模型建立方法的研究進(jìn)展.醫(yī)學(xué)綜述, 2008, 14(18):2737-2739.

［3］ Fang W, LT H, Zhou L. Protective effects of prostanglandin E1 on human umbilical vein endothelial cell in jury induced by hydrogen peroxide.Acta Phamacol Sin, 2010, 31(4):485-492.

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