李 蕾，宋乃寧，李海山，艾文超，陳會明

(中國檢驗檢疫科學(xué)研究院國家質(zhì)檢總局進(jìn)口化學(xué)品研究所，北京 100123)

鄰苯二甲酸酯類(phthalate esters，PAE)又稱鈦酸酯，是1，2－苯二甲酸的酯類復(fù)合物質(zhì)的統(tǒng)稱，主要用途作為增塑劑添加至高分子聚合物中增加材料的柔韌性。PAE主要品種繁多，根據(jù)分子量大小分為以下2種:低分子量的鄰苯二甲酸二丁酯(di－butyl phthalate，DBP)和鄰苯二甲酸丁基芐基(benzyl butyl phthalate，BBP)多用于個人護(hù)理產(chǎn)品，如香水、護(hù)理液及化妝品［1－2］;而高分子量PAE，例如鄰苯二甲酸二乙基己基酯〔di－(2－ethylhexyl)phthalate，DEHP〕、鄰苯二甲酸二異壬酯(di－iso－nonyl phthalate，DINP)和鄰苯二甲酸二丁酯(di－n－butyl phthalate，DnBP)則通常添加于地板膠、墻漆和醫(yī)療器械［3－4］等消費品中，用以增加塑料材料的柔韌性。PAE具有基本相似的化學(xué)結(jié)構(gòu)，但各個物質(zhì)顯現(xiàn)獨特的物理及化學(xué)性質(zhì)。目前研究者已確定不同化學(xué)結(jié)構(gòu)的酯類物質(zhì)具有特異的毒性，但還未闡明具體的機(jī)制。人類主要通過食管、皮膚接觸及呼吸道暴露于PAE，低分子量的PAE可通過呼吸和皮膚進(jìn)入人體，而高分子量物質(zhì)則主要以食管和呼吸道作為主要暴露途徑。大部分PAE在人體內(nèi)代謝經(jīng)過2個階段［5］，首先水解為初級代謝物，即鄰苯二甲酸單酯，并在尿苷5'－二磷酸葡糖醛酸基轉(zhuǎn)移酶的催化作用下與葡萄糖醛酸反應(yīng)生成各自的葡糖醛酸結(jié)合物。作為PAE體內(nèi)生物標(biāo)志物的鄰苯二甲酸單酯生物活性增高，比母體化合物具有更高的毒性［6］。目前的動物毒理研究顯示，PAE及其代謝產(chǎn)物涉及的毒性終點包括發(fā)育毒性［7－8］、生殖毒性［9－10］、免疫毒性［11－12］和肝毒性［13］，最新報道顯示其與乳腺癌［14］以及卵巢癌［15］有密切聯(lián)系。本文針對PAE物質(zhì)的暴露途徑及其在體內(nèi)毒理學(xué)效應(yīng)及機(jī)制進(jìn)行綜述。

1 暴露途徑

1.1 注射暴露

對醫(yī)療器械及血袋中遷移的PAE物質(zhì)研究起始于20世紀(jì)70年代［16］，研究證實，醫(yī)用材料中的DEHP通過與藥品的接觸使患者暴露，最終暴露濃度與所用藥品有關(guān)，此類暴露具有特定的群體，長期暴露者包括透析、血友病和糖尿病患者。有研究證實，聚氰乙烯(polyvinyl chloride，PVC)儲存袋與藥品在24～26℃接觸4 h后，利用氣相色譜的氫火焰離子化檢測器可檢測到DEHP，且在12 h濃度達(dá)到最高值［17］。

1.2 經(jīng)口暴露

經(jīng)口暴露于污染的水源、食物以及食物容器是人體染毒最常見的途徑，兒童是此種暴露受害的特殊人群。由于PAE與高分子材料的結(jié)合并不緊密，因此，兒童在用嘴接觸PVC產(chǎn)品后，體內(nèi)PAE物質(zhì)水平顯著增高。Babich等［18］根據(jù)歐洲、加拿大、日本和美國對于軟塑料玩具中DINP的研究報告綜述了其對于兒童暴露的危害程度。研究采用新的DINP遷移速率測量方式，綜合考慮兒童口部運動活動和兒童年齡因素，最終得出如下結(jié)論:42%的檢測樣品中存在DINP，12～23月齡兒童是最大的暴露群體，平均暴露量為每天0.08 mg·kg－1。

1.3 經(jīng)皮暴露

鄰苯二甲酸二乙酯(diethyl phthalate，DEP)與DnBP分別廣泛存在于香水與指甲油中，研究者調(diào)查了2003年5月到2006年7月紐約市186名孕婦個人護(hù)理產(chǎn)品使用情況［19］，檢測分析孕婦尿樣中存在代謝單酯2－甲基－D－赤藻糖醇－4－磷酸和鄰苯二甲酸正丁酯，結(jié)果顯示，使用香水是DEP暴露的重要來源。

1.4 吸入暴露

PAE物質(zhì)大量添加于建筑材料及消費品中，是普遍存在的環(huán)境污染物。對瑞典斯德哥爾摩家庭環(huán)境、托兒所及工作環(huán)境的11種有機(jī)磷酯類和6種鄰苯二甲酸酯類物質(zhì)濃度檢測表明，上述物質(zhì)存在于所有的取樣地點，PAE分布更廣泛，且兩者濃度相差近10 倍［20］。

2 毒理學(xué)效應(yīng)及其機(jī)制

目前，PAE對人類健康的潛在危害研究集中在利用體內(nèi)及動物實驗研究該類物質(zhì)與人類健康終點可能的聯(lián)系，及其所可能產(chǎn)生的生理學(xué)后果。目前，PAE物質(zhì)危害機(jī)制研究重點是其對核受體家族的影響，及后續(xù)因氧化損傷導(dǎo)致的炎癥反應(yīng)，上述影響與個體器官病變及人體肥胖糖尿病等疾病息息相關(guān)。

2.1 生殖及發(fā)育毒性

PAE具有類雌激素效應(yīng)，在體內(nèi)外實驗及動物模型中都表現(xiàn)抗雄激素作用，可影響個體內(nèi)分泌及生殖系統(tǒng)發(fā)育，并具有明顯的性別差異。動物實驗證實，產(chǎn)前及發(fā)育早期暴露于PAE的雄性動物生殖道會出現(xiàn)尿道下裂、隱睪癥、隱睪和肛門生殖器距離縮短等癥狀，統(tǒng)稱睪丸發(fā)育不全綜合征。傳統(tǒng)理論認(rèn)為，PAE通過影響間質(zhì)細(xì)胞的睪酮生成，減少胰島素樣因子3表達(dá)而引發(fā)一系列的癥狀。

Wu等［21］的實驗結(jié)果顯示，小鼠每天暴露DEHP 500 mg·kg－1后，睪酮與胰島素樣因子3減少是一系列睪丸發(fā)育不全綜合征癥狀出現(xiàn)的關(guān)鍵，且甲基化程度和DNA甲基轉(zhuǎn)移酶水平在受孕19 d與出生后3 d顯著增加。所以，DNA甲基化可能在睪丸畸形中發(fā)揮重要作用。DNA的甲基化狀態(tài)對染色體的結(jié)構(gòu)維持、X染色體失活、基因印記以及胚胎發(fā)育、正常細(xì)胞功能的維持，乃至疾病的發(fā)生是十分重要的。在胚胎期，基因組范圍的DNA甲基化模式異常會導(dǎo)致胚胎致死，而在成體中，異常的甲基化則意味著疾病，特別是腫瘤的發(fā)生。但在人類胎兒睪丸細(xì)胞體外實驗中，暴露于任何劑量的鄰苯二甲酸單乙基己基酯〔mono－(2－ethylhexyl)phthalate，MEHP〕其睪酮及黃體生成激素刺激類睪酮水平都無變化，不會引起Sertoli細(xì)胞的增殖及凋亡，但減少了抗穆氏管激素mRNA的表達(dá)，通過調(diào)節(jié)生殖細(xì)胞的凋亡減少其數(shù)量［22］。所以推測PAE在小鼠和人類中利用不同的機(jī)制影響雄性生殖系統(tǒng)，其生殖系統(tǒng)毒性具有種屬及年齡依賴性，可能由于胎兒和青春期生殖器官比成人要敏感的緣故。

PAE物質(zhì)的生殖毒性還表現(xiàn)為對睪丸及生精細(xì)胞的損害作用，干擾生精細(xì)胞與Sertoli細(xì)胞間的相互作用。DBP抑制睪丸Sertoli細(xì)胞中雄激素結(jié)合蛋白和抑制素的mRNA表達(dá)量，MEHP則通過抑制Sertoli細(xì)胞組織金屬蛋白酶抑制物－2(tissue inhibitor of matrix metalloproteinase 2，TIMP2)水平，激活生精上皮基質(zhì)金屬蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2，MMP2)發(fā)揮作用。MEHP可阻止CCAAT增強(qiáng)子與CEBPA蛋白(CCAAT/enhancer binding protein)的結(jié)合，從而抑制 TIMP 2基因表達(dá)［23］。

2.2 肝毒性

毒理學(xué)中對動物肝過氧化物酶體體積、數(shù)量及過氧化物酶體增殖物激活受體(peroxisome proliferator－activated receptor，PPAR)的變化判斷外源物的肝毒性，PAE作為過氧化物酶體激活劑(peroxisome proliferator，PP)對PPAR具有激活效應(yīng)，導(dǎo)致過氧化物酶體體積和數(shù)量的增加會導(dǎo)致肝腫大或肝癌，其誘導(dǎo)DNA低甲基化也已確認(rèn)為產(chǎn)生肝毒性的機(jī)制之一。

通常認(rèn)為嚙齒類動物中PP通過影響核受體PPARα改變基因轉(zhuǎn)錄從而影響肝細(xì)胞發(fā)育導(dǎo)致癌癥。對F344大鼠進(jìn)行的為期26周的口服鄰苯二甲酸二己酯(dihexyl phthalate，DHP)實驗，再一次驗證了 PAE對 PPAR的激活作用［24］。給藥組F344大鼠肝重量明顯減輕，病理學(xué)觀察顯示，肝細(xì)胞肥大，且血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶和谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶水平下降。研究表明，DHP誘導(dǎo)肝癌前期細(xì)胞損失，是具有遺傳毒性的大鼠肝癌致癌物。但最近研究發(fā)現(xiàn)，DEHP在PPARα缺失的小鼠中也增加其肝癌疾病的發(fā)生，所以推測PP可能依賴其他的核受體影響轉(zhuǎn)錄進(jìn)程，而并非只依賴PPARα引發(fā)多重核受體的轉(zhuǎn)錄途徑［25］。

在人類和實驗動物腫瘤研究中，基因組的低甲基化在腫瘤前期發(fā)生中發(fā)揮重要作用，DNA的甲基化水平和組蛋白修飾程度已經(jīng)成為腫瘤早期檢測的敏感性指標(biāo)。Wistar雄大鼠經(jīng)口暴露于DBP后，可降低肝細(xì)胞原癌基因c-myc的甲基化程度［26］，但也證實此變化與DNA復(fù)制和DNA甲基轉(zhuǎn)移酶活性無關(guān)。

無論通過何種途徑作用，PAE物質(zhì)對大小鼠的肝致癌性已經(jīng)有很充足的數(shù)據(jù)支撐，在過去的十幾年中，包括亞慢性，亞急性和急性相關(guān)的實驗都揭示了PAE物質(zhì)的作用機(jī)制［27］_______激活PPARα及調(diào)控下游轉(zhuǎn)錄因子。最近動物模型及轉(zhuǎn)基因鼠系也作為研究對象加入到機(jī)制研究中，動物模型及人類暴露于環(huán)境中PAE的研究數(shù)據(jù)顯示，嚙齒動物及人體癌的誘導(dǎo)產(chǎn)生是幾類肝細(xì)胞多重分子信號及通路交叉作用的結(jié)果，并且證實PAE的作用靶器官不僅只有肝。國際腫瘤研究機(jī)構(gòu)認(rèn)為，PAE對人類癌癥相關(guān)靶器官是肝和睪丸，但暴露于PAE與人類肝癌相關(guān)的流行病學(xué)調(diào)查研究很少。

2.3 免疫毒性

PAE 物質(zhì)具有免疫佐劑性質(zhì)［28－29］，其機(jī)制研究應(yīng)包括免疫細(xì)胞的基因表達(dá)及通過細(xì)胞機(jī)制調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)［30］。研究證明，BBP不存在佐劑作用，但是其代謝物苯甲醇可引發(fā)明顯的免疫抑制［31］。免疫抑制是免疫毒理學(xué)研究的主要領(lǐng)域，很多研究致力于闡明化學(xué)物和藥物引起單方面或多方面免疫應(yīng)答能力降低的可能性。人角膜內(nèi)皮細(xì)胞系B4G12體外暴露于DBP，BBP和DEHP后，細(xì)胞繁殖能力降低，暴露于DBP的B4G12炎癥細(xì)胞因子白細(xì)胞介素1β(IL－1β)，IL－8 和 IL－6 分泌增加，基因表達(dá)水平也升高［32］。另外巨噬細(xì)胞THP－1細(xì)胞暴露于DEHP 200 μmol·L－13 h后，分別利用ELISA和DNA微陣及RT－PCR分析檢測基因表達(dá)及免疫相關(guān)因子、趨化因子的改變情況發(fā)現(xiàn)，IL－8，CXCL1，CXCL2， CXCL3， CXCL6， CCL3， MMP3，MMP10，MMP14，集落刺激因子2(colony stimulating factor 2，CSF2)mRNA，腫瘤壞死因子 α(tumor necrosis factorα，NF－α)，IL－1β 和 IL－6 mRNA表達(dá)水平都明顯升高［33］，某些與中性粒細(xì)胞積聚有關(guān)的炎癥和呼吸系統(tǒng)疾病局部或血清中IL－8水平往往升高，如胃炎、炎癥性結(jié)腸炎、慢性支氣管炎等。不同濃度的DBP對巨噬細(xì)胞的吞噬能力均有影響［34］，可顯著降低表面清道夫受體CD36的表達(dá)，引發(fā)免疫抑制。先天性或獲得性免疫缺陷與微生物感染密切相關(guān)，所以對病原微生物抵抗力的破壞是免疫抑制的一個顯著特征，常見的感染部位為呼吸道感染、消化道感染、及中樞神經(jīng)系統(tǒng)及表皮炎癥。免疫抑制與腫瘤的產(chǎn)生也有密切關(guān)系，人類隨著年齡增長胸腺逐步萎縮，胸腺素水平下降，腫瘤產(chǎn)生率也隨之上升。

PAE除與免疫抑制相關(guān)外，還可引起超敏反應(yīng)。一般認(rèn)為Th2可介導(dǎo)炎癥級聯(lián)反應(yīng)可最終導(dǎo)致過敏性皮炎及哮喘，而胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素(thymic stromal lymphopoietin，TSLP)公認(rèn)為Th2反應(yīng)的調(diào)控因子，在異硫氰酸熒光素(fluorescein isothiocyanate，F(xiàn)ITC)誘導(dǎo)接觸性變態(tài)反應(yīng)模型評估TSLP作用的實驗中，發(fā)現(xiàn)DBP致敏導(dǎo)致TSLP水平升高，F(xiàn)ITC半抗原與其他溶劑并無此作用。因此，在FITC誘導(dǎo)的接觸性過敏反應(yīng)模型中，DBP對TSLP水平的上調(diào)作用是該模型成功構(gòu)建的重要因素，并可能同時引發(fā)Th2型反應(yīng)［35］。在小鼠淋巴結(jié)細(xì)胞中，DEHP 與 DINP 可刺激產(chǎn)生 IL－4［36－37］，在大鼠血細(xì)胞中，DEHP可明顯增加CD11b的表達(dá)，并專司炎癥細(xì)胞從血管至炎癥部位的遷移與附著［38］，PAE還可直接作用于呼吸道上皮細(xì)胞引發(fā)哮喘。

2.4 腫瘤及致癌性

PAE的基因毒性研究及其相關(guān)的毒性數(shù)據(jù)相當(dāng)廣泛復(fù)雜，且有很多的實驗?zāi)Ｐ?。其毒性表現(xiàn)包括DNA損傷、染色體相關(guān)損傷及影響、增加癌癥發(fā)生概率和細(xì)胞凋亡的逆轉(zhuǎn)，及對核受體及基因表達(dá)的影響等。

DEHP對雌雄大小鼠肝癌的作用有充足的數(shù)據(jù)支持［39－40］，除了肝，還有其對潛在靶器官的致癌毒性的報道。雄性大鼠暴露于DEHP可引發(fā)腺泡細(xì)胞腺瘤，增加Leydig細(xì)胞腫瘤發(fā)生率，具有劑量依賴性［41］，雌性大鼠暴露則增加患乳腺癌、卵巢癌與肝毒細(xì)胞瘤的風(fēng)險［42－43］。

引發(fā)癌癥的機(jī)制研究涉及動物實驗與人體試驗，研究證明，DEHP暴露量低于可引發(fā)細(xì)胞毒性時，對DNA就已造成損傷。體外實驗發(fā)現(xiàn)，DEHP 1 ～10 g·L－1和 MEHP 30 g·L－1彗星試驗結(jié)果均為陽性，但此濃度的物質(zhì)并未具有細(xì)胞毒性［44－45］。DEHP在人體組織中可增加染色體畸變的概率，增加多倍體的產(chǎn)生，改變有絲分裂的速率［46－47］。人體細(xì)胞組織實驗顯示，DEHP可影響細(xì)胞凋亡和細(xì)胞增殖，增加腫瘤細(xì)胞系中腫瘤的活動侵襲及擴(kuò)散，并激活很多特定的核受體。

通過BBP對乳腺癌腫瘤生成過程的研究，確認(rèn)BBP通過誘導(dǎo)淋巴增強(qiáng)因子1的過表達(dá)誘導(dǎo)腫瘤產(chǎn)生。而在卵巢癌細(xì)胞系BG－1中，證實在DBP可導(dǎo)致細(xì)胞增殖加快，暴露6 h后可上調(diào)細(xì)胞周期蛋白D和CDK－4，表明其可損傷內(nèi)分泌系統(tǒng)，刺激雌激素陽性腫瘤細(xì)胞的繁殖［15］。而對于肝腫瘤，許多實驗證實與PAE物質(zhì)的PPARα，β和γ核受體激活物活性有關(guān)。DEHP代謝物MEHP可激活小鼠PPARα和PPARγ，但其本身對 PPARβ并無激活活性［48－49］。PPAR核受體在不同種類動物肝中表達(dá)有差異，其中大小鼠肝中PPARα表達(dá)水平較高，而人類則較低，所以目前還未有研究證實PAE物質(zhì)對人類肝中PPARα有激活作用。根據(jù)目前的研究結(jié)果，肝腫瘤與PAE物質(zhì)的聯(lián)系只限于大小鼠嚙齒動物種屬，其與人類肝癌的關(guān)系無論是基礎(chǔ)研究還是流行病學(xué)都還未有明確證據(jù)［50－51］。

3 展望

盡管PAE作為商業(yè)用途已經(jīng)廣泛使用了超過50年，但其關(guān)于人類健康暴露相關(guān)的研究還不充分。PAE種類繁多，分子結(jié)構(gòu)存在差異，理化性質(zhì)更是復(fù)雜，其毒理學(xué)效應(yīng)與實驗種屬、靶器官的敏感性及染毒方式有密切的聯(lián)系。另外，PAE進(jìn)入人體后的代謝過程也對研究結(jié)果產(chǎn)生一定影響，代謝產(chǎn)生的單酯比母體化合物具有更高的生物活性，其毒理學(xué)效應(yīng)也是研究的重點。以上因素也給研究帶來了不小的難度，目前的PAE暴露于健康終點研究中的限制主要集中在以下幾點:① 分析方法的準(zhǔn)確性、敏感性對結(jié)果的影響;② 受試人群數(shù)量不足;③PAE物質(zhì)在體內(nèi)經(jīng)過代謝后單酯物質(zhì)定性定量及毒理學(xué)效應(yīng)研究［52－54］。

根據(jù)以上所了解的PAE的研究限制及毒性相關(guān)的綜合背景，建議今后的研究方向從物質(zhì)暴露方式開始系統(tǒng)研究。確定不同的暴露方式對人體的危害，物質(zhì)進(jìn)入人體后側(cè)重母體化合物水解物與人體健康的聯(lián)系，包括暴露后所涉及的分子通路研究。具體研究包括高分子鏈PAE體內(nèi)生物標(biāo)志物的篩選，長鏈水解單酯在體內(nèi)的作用，其對DNA鏈的損傷作用，其引發(fā)疾病的機(jī)制研究，以及相關(guān)的流行病學(xué)研究。另外因為環(huán)境中PAE并非單一存在，研究也應(yīng)涉及PAE混合物的范疇，且其與其他內(nèi)分泌干擾物相互協(xié)作所產(chǎn)生的影響也在研究范圍之內(nèi)。

［1］Api AM.Toxicological profile of diethyl phthalate:a vehicle for fragrance and cosmetic ingredients［J］.Food Chem Toxicol，2001，39(2):97－108.

［2］Dickerson RN. Di－(2－ethylhexyl)phthalate asa plasticizer for intravenous bags and tubing:a toxicological quandary［J］.Nutrition，1997，13(11－12):1010－1012.

［3］Eveillard A，Lasserre F，de Tayrac M，Polizzi A，Claus S，Canlet C，et al.Identification of potential mechanisms of toxicity after di－(2－ethylhexyl)－phthalate(DEHP)adult exposure in the liver using a systems biology approach［J］.Toxicol Appl Pharmacol，2009，236(3):282－292.

［4］Hines CJ， Hopf NB， Deddens JA， Silva MJ，Calafat AM.Occupational exposure to diisononyl phthalate(DiNP)in polyvinyl chloride processing operations［J］.Int Arch Occup Environ Health，2012，85(3):317－325.

［5］Silva MJ，Barr DB，Reidy JA，Kato K，Malek NA，Hodge CC，et al.Glucuronidation patterns of common urinary and serum monoester phthalate metabolites［J］.Arch Toxicol，2003，77(10):561－567.

［6］Ito R，Seshimo F，Miura N，Kawaguchi M，Saito K，Nakazawa H.Effect of sterilization process on the formation of mono(2－ethylhexyl)phthalate from di(2－ethylhexyl)phthalate［J］.J Pharm Biomed Anal，2006，41(2):455－460.

［7］Saillenfait AM，Gallissot F，Sabaté JP.Differential developmental toxicities of di－n－h(huán)exyl phthalate and dicyclohexyl phthalate administered orally to rats［J］.J Appl Toxicol，2009，29(6):510－521.

［8］Saillenfait AM，Sabaté JP，Gallissot F.Developmental toxic effects of diisobutyl phthalate，the methyl－branched analogue of di－n－butyl phthalate，administered by gavage to rats［J］.Toxicol Lett，2006，165(1):39－46.

［9］Martino－Andrade AJ， Chahoud I. Reproductive toxicity of phthalate esters［J］.Mol Nutr Food Res，2010，54(1):148－157.

［10］Foster PM.Disruption of reproductive development in male rat offspring following in utero exposure to phthalate esters［J］.Int J Androl，2006，29(1):140－147.

［11］Larsen ST，Hansen JS，Hansen EW，Clausen PA，Nielsen GD.Airway inflammation and adjuvant effect after repeated airborne exposures to di－(2－ethylhexyl)phthalate and ovalbumin in BALB/c mice［J］.Toxicology，2007，235(1－2):119－229.

［12］Jepsen KF， Abildtrup A， Larsen ST. Monophthalates promote IL－6 and IL－8 production in the human epithelial cell line A549［J］.Toxicol In Vitro，2004，18(3):265－269.

［13］Jin M，Dewa Y，Kawai M，Nishimura J，Saegusa Y，Kemmochi S，et al.Induction of liver preneoplastic foci in F344 rats subjected to 28－day oral administration of diheptyl phthalate and its in vivo genotoxic potential［J］.Toxicology，2009，264(1－2):16－25.

［14］Hsieh TH， Tsai CF， Hsu CY，Kuo PL，Hsi E，Suen JL，et al.n－Butyl benzyl phthalate promotes breast cancer progression by inducing expression of lymphoid enhancer factor 1［J］.PLoS One，2012，7(8):e42750.

［15］Park MA，Hwang KA，Lee HR，Yi BR，Jeung EB，Choi KC.Cell growth of BG－1 ovarian cancer cells is promoted by di－n－butyl phthalate and hexabromocyclododecane via upregulation of the cyclin D and cyclin－dependent kinase－4 genes ［J］. Mol Med Rep，2012，5(3):761－766.

［16］Jaeger RJ， Rubin RJ. Extraction， localization，and metabolism of di－2－ethylhexyl phthalate from PVC plastic medical devices［J］.Environ Health Perspect，1973，3:95－102.

［17］Gotardo MA，Monteiro M.Migration of diethylhexyl phthalate from PVC bags into intravenous cyclosporine solutions［J］.J Pharm Biomed Anal，2005，38(4):709－713.

［18］Babich MA，Chen SB，Greene MA，Kiss CT，Porter WK，Smith TP，et al.Risk assessment of oral exposure to diisononyl phthalate from children's products［J］.Regul Toxicol Pharmacol，2004，40(2):151－167.

［19］Just AC，Adibi JJ，Rundle AG，Calafat AM，Camann DE， Hauser R， et al. Urinary and air phthalate concentrations and self－reported use of personal care products among minority pregnant women in New York city［J］.J Expo Sci Environ Epidemiol，2010，20(7):625－633.

［20］Bergh C，Torgrip R，Emenius G，Ostman C.Organophosphate and phthalate esters in air and settled dust－a multi－location indoor study［J］.Indoor Air，2011，21(1):67－76.

［21］Wu S，Zhu J，Li Y，Lin T，Gan L，Yuan X，et al.Dynamic effect of di－2－(ethylhexyl)phthalate on testicular toxicity:epigenetic changes and their impact on gene expression［J］.Int J Toxicol，2010，29(2):193－200.

［22］Lambrot R，Muczynski V，Lécureuil C，Angenard G，Coffigny H，Pairault C，et al.Phthalates impair germ cell development in the human fetal testis in vitro without change in testosterone production［J］.Environ Health Perspect，2009，117(1):32－37.

［23］Yao PL， Lin YC， Richburg JH. Transcriptional suppression of Sertoli cell Timp2 in rodents following mono－(2－ethylhexyl)phthalate exposure is regulated by CEBPA and MYC［J］.Biol Reprod，2011，85(6):1203－1215.

［24］Nakane F，Kunieda M，Shimizu S，Kobayashi Y，Akane H，Akie Y，et al.Twenty－six－week oral toxicity of diheptyl phthalate with special emphasis on its induction ofliverproliferative lesions in male F344 rats［J］.J Toxicol Sci，2012，37(3):527－537.

［25］Ren H， Aleksunes LM， Wood C， Vallanat B，George MH，Klaassen CD，et al.Characterization of peroxisome proliferator－activated receptor alphaindependent effects of PPARalpha activators in the rodent liver:di－(2－ethylhexyl)phthalate also activates the constitutive－activated receptor［J］.Toxicol Sci，2010，113(1):45－59.

［26］Kostka G， Urbanek－Olejnik K， Wiadrowska B.Di－butyl phthalate－induced hypomethylation of the c－myc gene in rat liver［J］.Toxicol Ind Health，2010，26(7):407－416.

［27］Rusyn I， Corton JC. Mechanistic considerations for human relevance of cancer hazard of di(2－ethylhexyl)phthalate［J］.Mutat Res，2012，750(2):141－158.

［28］Kimber I，Dearman RJ.An assessment of the ability of phthalates to influence immune and allergic responses［J］.Toxicology，2010，271(3):73－82.

［29］Kuo PL，Hsu YL，Huang MS，Tsai MJ，Ko YC.Ginger suppresses phthalate ester－induced airway remodeling［J］.J Agric Food Chem，2011，59(7):3429－3438.

［30］Bornehag CG， Nanberg E. Phthalateexposure and asthma in children［J］.Int J Androl，2010，33(2):333－345.

［31］Larsen ST，Lund RM，Thygesen P，Poulsen OM，Nielsen GD.Investigation of the adjuvant and immuno－suppressive effects of benzyl butyl phthalate，phthalic acid and benzyl alcohol in a murine injection model［J］.Food Chem Toxicol，2003，41(3):439－446.

［32］Krüger T， Cao Y， Kj?rgaard SK，Knudsen LE，Bonefeld－J?rgensen EC.Effects of phthalates on the human corneal endothelial cell line B4G12［J］.Int J Toxicol，2012，31(4):364－371.

［33］Nishioka J，Iwahara C，Kawasaki M，Yoshizaki F，Nakayama H，Takamori K，et al.Di－(2－ethylhexyl)phthalate induces production of inflammatory molecules in human macrophages［J］.Inflamm Res，2012，61(1):69－78.

［34］Li L，Li HS，Song NN，Chen HM.The immunotoxicity of dibutyl phthalate on the macrophages in mice ［J］. ImmunopharmacolImmunotoxicol，2013，35(2):272－281.

［35］Shigeno T，Katakuse M，F(xiàn)ujita T，Mukoyama Y，Watanabe H.Phthalate ester－induced thymic stromal lymphopoietin mediates allergic dermatitis in mice［J］.Immunology，2009，128(1 Suppl):e849－e857.

［36］Lee MH，Park J，Chung SW，Kang BY，Kim SH，Kim TS.Enhancement of interleukin－4 production in activated CD4+T cells by diphthalate plasticizers via increased NF－AT binding activity［J］.Int Arch Allergy Immunol，2004，134(3):213－222.

［37］Oh PS，Lim KT.Suppressive effect of CTB glycoprotein(75 kDa)on IL－4 expression in primarycultured lymphocytes treated with di(2－ethylhexyl)phthalate［J］.Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol，2009，380(2):115－124.

［38］Gourlay T，Samartzis I，Stefanou D，Taylor K.Inflammatory response of rat and human neutrophils exposed to di－(2－ethyl－h(huán)exyl)－phthalate－plasticized polyvinyl chloride［J］.Artif Organs，2003，27(3):256－260.

［39］David RM， Moore MR， Finney DC， Guest D.Chronic toxicity of di(2－ethylhexyl)phthalate in mice［J］.Toxicol Sci，2000，58(2):377－385.

［40］David RM， Moore MR， Finney DC， Guest D.Chronic toxicity of di(2－ethylhexyl)phthalate in rats［J］.Toxicol Sci，2000，55(2):433－443.

［41］Voss C，Zerban H，Bannasch P，Berger MR.Lifelong exposure to di－(2－ethylhexyl)－phthalate induces tumors in liver and testes of Sprague－Dawley rats［J］.Toxicology，2005，206(3):359－371.

［42］Reynolds P，Urayama KY，Von Behren J，F(xiàn)eusner J.Birth characteristics and hepatoblastoma risk in young children［J］.Cancer，2004，100(5):1070－1076.

［43］Oue T， Kubota A， Okuyama H， Kawahara H，Nara K，Kawa K，et al.Hepatoblastoma in children of extremely low birth weight:a report from a single perinatal center［J］.J Pediatr Surg，2003，38(1):134－137.

［44］Anderson D，Yu TW，Hin?al F.Effect of some phthalate esters in human cells in the comet assay［J］.Teratog Carcinog Mutagen，1999，19(4):275－280.

［45］Kleinsasser NH， Harréus UA， Kastenbauer ER，Wallner BC，Sassen AW，Staudenmaier R，et al.Mono(2－ethylhexyl)phthalate exhibits genotoxic effects in human lymphocytes and mucosal cells of the upper aerodigestive tract in the comet assay［J］.Toxicol Lett，2004，148(1－2):83－90.

［46］Tsutsui T，Watanabe E，Barrett JC.Ability of peroxisome proliferators to induce cell transformation，chromosome aberrations and peroxisome proliferation in cultured Syrian hamster embryo cells［J］.Carcinogenesis，1993，14(4):611－618.

［47］Müller－Tegethoff K，Kasper P，Müller L.Evaluation studies on the in vitro rat hepatocyte micronucleus assay［J］.Mutat Res，1995，335(3):293－307.

［48］Issemann I，Green S.Activation of a member of the steroid hormone receptor superfamily by peroxisome proliferators［J］. Nature， 1990， 347(6294):645－650.

［49］Dreyer C，Krey G，Keller H，Givel F，Helftenbein G，Wahli W.Control of the peroxisomal beta－oxidation pathway by a novel family of nuclear hormone receptors［J］.Cell，1992，68(5):879－887.

［50］Maloney EK， Waxman DJ. Trans－activation of PPARalpha and PPARgamma by structurally diverse environmental chemicals［J］.Toxicol Appl Pharmacol，1999，161(2):209－218.

［51］Hurst CH，Waxman DJ.Activation of PPARalpha and PPARgamma byenvironmentalphthalate monoesters［J］.Toxicol Sci，2003，74(2):297－308.

［52］Cobellis L，Latini G，De Felice C，Razzi S，Paris I，Ruggieri F，et al.High plasma concentrations of di－(2－ethylhexyl)－phthalate in women with endometriosis［J］.Hum Reprod，2003，18(7):1512－1515.

［53］Latini G，De Felice C，Presta G，Del Vecchio A，Paris I，Ruggieri F，et al.In utero exposure to di－(2－ethylhexyl)phthalate and duration of human pregnancy［J］.Environ Health Perspect，2003，111(14):1783－1785.

［54］Rozati R，Reddy PP，Reddanna P，Mujtaba R.Role of environmental estrogens in the deterioration of male factor fertility［J］.Fertil Steril，2002，78(6):1187－1194.