王艷歌，董 輝，黃 兵

（中國農(nóng)業(yè)科學院上海獸醫(yī)研究所 農(nóng)業(yè)部動物寄生蟲學重點實驗室，上海 200241）

寄生蟲乳酸脫氫酶研究進展

王艷歌，董 輝，黃 兵

（中國農(nóng)業(yè)科學院上海獸醫(yī)研究所 農(nóng)業(yè)部動物寄生蟲學重點實驗室，上海 200241）

大多數(shù)體內(nèi)寄生蟲的生存必須依賴糖酵解途徑將葡萄糖代謝為乳酸以提供能量。乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase, LDH）是糖酵解途徑的末端酶，催化丙酮酸還原為乳酸及乳酸氧化為丙酮酸的可逆反應，與寄生蟲生存密切相關。研究表明，各種寄生蟲LDH在理化性質(zhì)和分子結構方面均有獨特的特性，是良好的診斷分子和潛在的藥物作用靶標。對寄生蟲LDH功能的研究，對于促進寄生蟲病診斷、疫苗研究以及新抗蟲藥物的研發(fā)具有重要意義。本文對國內(nèi)外寄生蟲LDH的研究現(xiàn)狀進行了綜述。

乳酸脫氫酶；寄生蟲；診斷；藥物靶標；疫苗

乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase，LDH）是廣泛分布于微生物、植物和動物細胞內(nèi)的一種重要功能酶，是生命活動中最重要能源物質(zhì)“糖”無氧酵解途徑的關鍵酶之一。大多數(shù)體內(nèi)寄生蟲的能源主要來源于無氧糖酵解途徑，LDH是該途徑的末端酶，在NADH和NAD+的輔助下，催化丙酮酸與乳酸之間的可逆反應，釋放能量供機體所需。LDH一旦被抑制，將導致蟲體發(fā)育停止甚至死亡。已有研究表明，寄生蟲LDH是良好的診斷分子及潛在的藥物作用靶標。鑒于寄生蟲LDH的重要功能和作用，國內(nèi)外對該酶進行了一系列研究，主要集中在基因特性、蛋白特性、藥物篩選、免疫診斷等方面，本文對國內(nèi)外寄生蟲LDH的研究現(xiàn)狀進行了綜述。

1 原蟲LDH

1.1 瘧原蟲LDH（PlasmodiumLDH, PLDH）在基因特性方面，江莉等[1]對間日瘧原蟲（P. vivax，Pv）和惡性瘧原蟲（P. falciparum, Pf）LDH基因的序列進行了研究，發(fā)現(xiàn)編碼區(qū)全長均為951 bp，編碼316個氨基酸，核苷酸和氨基酸序列的同源性分別是75.1%和90.2%；特異性表位分別為38個和45個；兩種蟲體的LDH抗原對多克隆抗體最高抑制率，Pv可達70.3%，而Pf僅為30.5%。Brown等[2]對人體4種PLDH基因進行了研究，發(fā)現(xiàn)惡性瘧原蟲、間日瘧原蟲、卵形瘧原蟲（P. ovale, Po）以及三日瘧原蟲（P. malariae, Pm）LDH的氨基酸序列有90%～92%的一致性，PLDH序列與宿主LDH差異明顯，相似性僅為28%～30%，具有種、屬特異性。Winter等[3]在4種PLDH底物特異性環(huán)上發(fā)現(xiàn)含有相同的5個氨基酸插入序列（SDKEW），這種特異性插入片段除在剛地弓形蟲（Toxoplasma gondii）LDH有相同結構外，尚未在其它種屬發(fā)現(xiàn)，是一個重要的藥物靶標。

在診斷方面，由于PLDH是蟲體普遍存在的一種重要循環(huán)抗原，且具有種、屬特異性，在瘧疾診斷上有重要的應用價值[4]。汪俊云等[5]和孫莉等[6]分別成功制備了PfLDH和PvLDH的單克隆抗體，為研究瘧疾診斷試劑盒奠定了基礎。Wu等[7]用PfLDH單克隆抗體制作膠體金免疫層析試紙條，建立了一種快速、簡捷并特異檢測惡性瘧原蟲的方法。李雪峰等[8]評估瘧疾乳酸脫氫酶單克隆抗體快速檢測試劑在瘧疾診斷和鑒別診斷上的特異性和敏感性，發(fā)現(xiàn)OptiMal-IT金標層析法是一種快速、簡便、特異性強、敏感性高的瘧疾診斷和鑒別診斷試劑，可用于快速應急檢測瘧疾。

在藥物標靶方面，現(xiàn)有研究發(fā)現(xiàn)PLDH與宿主LDH在生化、免疫學特性和酶學方面有很大差異，被認為是潛在的藥物靶標[9]。鑒于PLDH在瘧原蟲能量代謝中的重要性及其與宿主LDH活性位點結構上的差異，國內(nèi)外學者對能夠抑制PLDH活性的藥物進行了研究，發(fā)現(xiàn)多種藥物能與PLDH發(fā)生作用。據(jù)Read等[10]和Menting等[11]報道，抗瘧疾藥物氯喹（Chloroquine）能夠競爭性地結合在LDH上的NADH結合位點，占據(jù)了與輔酶腺嘌呤環(huán)相似的位置，阻止NADH與LDH的相互作用，切斷糖酵解途徑，從而引發(fā)瘧原蟲的死亡。棉酚（Gossypol）具有很強抗瘧疾作用，其作用機理是特異性地抑制PLDH的活性，阻斷蟲體內(nèi)的能源供應，但其毒副作用太大，至今尚未作為抗瘧疾藥物[12]。Camerun等[13]研究發(fā)現(xiàn)，在低于抑制人LDH活性所需濃度100倍的情況下，吡咯類化合物（Pyrrolic nitrogen compounds）對PLDH有選擇性抑制作用，晶體結構分析顯示這些競爭性抑制劑作用于酶活性位點的氨基酸，沿NAD煙酰胺環(huán)堆積，提示該類化合物有可能成為治療瘧疾的新藥。對硫代吖啶酮（Thioacridone）、血紅素（Heme）、萘類化合物（Naphthalene compounds）等藥物的研究，也證實了這些藥物對PLDH有不同程度的抑制作用[14,15]。

1.2 弓形蟲LDH（ToxoplasmaLDH，TLDH）LDH是弓形蟲分化所必需的酶，在堿性條件下，LDH的上調(diào)表達，可增加弓形蟲的分化[16]。LDH的缺失，可導致慢性感染中不能形成嚴重的腦包囊負荷，使弓形蟲的致病性減弱[17]。弓形蟲可在中間宿主體內(nèi)進行速殖子與緩殖子之間的轉換，已發(fā)現(xiàn)在其不同發(fā)育階段表達2種LDH（TLDH1、TLDH2），預測的分子量分別是35.5 kDa和35.3 kDa，核苷酸和氨基酸序列的相似性分別為64.0%和71.1%。TLDH2在緩殖子內(nèi)表達，而TLDH1在緩殖子及速殖子內(nèi)均有表達，但不同發(fā)育階段只有其中一種LDH表達，提示TLDH的表達水平與弓形蟲蟲期轉換以及碳水化合物或能量代謝轉變之間有一定關聯(lián)[18]。TLDH2在底物特異環(huán)上也有與PLDH一樣的KSDKE插入片段，與TLDH1的KPDSE略有不同。但TLDH1和TLDH2具有比PLDH更廣泛的底物特異性，兩者也能被抑制PLDH活性的一些化合物如棉子酚及其衍生物（gossypol derivatives）、二羥基萘芬酸（dihydroxynaphthoic acids）等所抑制。雖然對底物抑制起關鍵性作用的輔酶結合位點的氨基酸相同（163M），但TLDH1具有底物抑制性，而TLDH2與PLDH一樣，無底物抑制性[19]。

1.3 球蟲LDH（EimeriaLDH）每種球蟲僅有一種LDH，堆型艾美耳球蟲（Eimeria acervulina）、巨型艾美耳球蟲（E. maxima）和柔嫩艾美耳球蟲（E. tenella）LDH基因的開放閱讀框大小分別是993 bp、993 bp和996 bp，分別編碼330個、330個和331個氨基酸，三者氨基酸的同源性為66%～80%，球蟲LDH聚合成同源四聚體才具有活性，其蛋白在卵囊、子孢子、裂殖體和裂殖子階段的表達水平相當，但其RNA轉錄僅在裂殖生殖階段發(fā)現(xiàn)，表明其合成局限于厭氧的細胞內(nèi)階段[20]。宋鴻雁[21]構建了堆型艾美耳球蟲LDH的DNA疫苗，動物保護性試驗和免疫機理研究證實，該DNA疫苗可誘導機體產(chǎn)生細胞免疫和體液免疫，共同參與抵抗球蟲感染，為機體提供一定保護力。

LDH在球蟲種內(nèi)蟲株之間變異也較大，是有用的遺傳學標記。黃兵等[22]用聚丙烯酰胺凝膠電泳對5種雞球蟲同工酶研究，結果表明不同種類球蟲之間的LDH同工酶酶譜存在明顯差異。余麗蕓等[23]發(fā)現(xiàn)柔嫩艾美耳球蟲耐藥蟲株的LDH酶譜為2條帶，敏感蟲株為3條帶，耐藥株比敏感株缺少LDH-2。張祝明等[24]研究發(fā)現(xiàn)與柔嫩艾美耳球蟲敏感株相比，抗磺胺氯吡嗪（Sulfaclozine）耐藥株有1條特異性的LDH條帶。郭濤等[25]采用聚丙烯酰胺凝膠電泳對不同耐藥株LDH同工酶進行了分析，發(fā)現(xiàn)敏感株有一條濃帶，而地克珠利（Diclazuril）抗藥株無酶帶。藥物對敏感株有效，對耐藥株完全無效，而敏感株與耐藥株之間的LDH電泳條帶明顯不同，提示球蟲LDH與藥物發(fā)揮抗球蟲作用可能具有密切關系。

1.4 隱孢子蟲LDH（CryptosporidiumLDH）郭志云等[26]成功克隆微小隱孢子蟲（C. parvum, Cp）南京株LDH基因，該基因全長有966 bp，編碼322個氨基酸，與國外分離的Iowa II株LDH基因編碼的氨基酸序列有98%的一致性，在關鍵結構位點存在突變。Madern等[27]表達微小隱孢子蟲L-乳酸脫氫酶(L-LDH1) 和 L-蘋果酸脫氫酶(L-MDH1) 基因 ，并對頂器復門原蟲LDH和MDH數(shù)據(jù)庫進行進化關系分析，證實早期假說，CpLDH1可能與CpMDH1從共同的祖先進化而來。

2 吸蟲LDH

2.1 日本血吸蟲LDH（Schistosoma japonicumLDH，SjLDH）劉傳愛等[28]成功獲得了日本血吸蟲LDH基因的全長cDNA序列，其全長有1251 bp，編碼331個氨基酸。Lv等[29-33]對日本血吸蟲LDH基因的抗原特性以及酶學特性進行了研究，結果表明，該基因編碼的蛋白大小約36 kDa，其重組蛋白具有很好的免疫活性，重組蛋白酶活性是379U/mg，正逆反應的最佳pH分別為pH6.0～7.0和pH9.0～10.0，最佳溫度分別為37～60 ℃和40～50 ℃，重組蛋白催化正反應的效率高于逆反應，表明重組蛋白在生理條件下主要催化正反應。生物信息學預測結果提示LDH是研究物種分子進化理想的分子，是免疫診斷、藥物作用及疫苗研制的潛在靶分子。藥物抑制試驗結果表明，血紅素、Fe3+對重組日本血吸蟲LDH的活性有極強的抑制作用。Xiao等[34]對感染日本血吸蟲的小鼠注入100～300 mg/kg 青蒿素（Artemisinin），24～72 h 后檢測LDH的活性，試驗表明，青蒿素因抑制了SjLDH活性而使乳酸的生成減少。

2.2 華支睪吸蟲LDH（Clonorchis sinensisLDH,CsLDH）胡文慶等[35]對華支睪吸蟲5個蟲齡期（10、20、30、60、90 d）的LDH同工酶進行了檢測，結果60 d、90 d蟲齡期的LDH-5相對濃度增加。Yang等[36]從成蟲cDNA文庫中篩選出了LDH基因，該基因全長1230 bp，編碼328個氨基酸，預測蛋白大小為35.6 kDa。酶活及酶抑制劑研究表明，CsLDH是一個潛在的藥物靶標。胡旭初等[37]分析CsLDH基因及其編碼蛋白的結構和特性，推測該酶不僅催化糖酵解過程的丙酮酸與乳酸間的可逆反應，而且能把乳酸直接排出體外，可作為篩選抗華支睪吸蟲新藥物的靶標，亦可介導特異性抗體對蟲體的ADCC作用和補體的殺傷作用，以及對酶活性的抑制作用，是一個重要的疫苗候選抗原。黃燦等[38]成功克隆并分別表達了CsLDH的兩個表位E10-20和E94～102，重組表達蛋白可被CsLDH免疫血清識別，其中重組E94～102更易被識別，且該重組蛋白免疫血清能抑制CsLDH催化丙酮酸還原成乳酸的反應。此前，作者曾研究發(fā)現(xiàn)吡喹酮（Praziquantel）、阿苯達唑（Abendazole）、芬苯達唑（Fenbendazole）、甲苯咪唑（Mebendazole）等4種藥物對CsLDH酶活性有明顯抑制作用，亞細胞定位發(fā)現(xiàn)CsLDH是位于蟲體皮層和消化道界面的膜蛋白，提示這些藥物可能以CsLDH作為藥物作用靶標[39]。

3 絳蟲LDH

3.1 帶絳蟲LDH（TaeniaLDH）申萍香等[40]研究了亞洲牛帶絳蟲LDH（T. saginata asiatica, Ta）基因及其編碼蛋白結構特性，發(fā)現(xiàn)該基因全長1285 bp，編碼區(qū)為92～1084 bp，編碼331個氨基酸，預測蛋白質(zhì)的大小約為35 kDa，有3個跨膜區(qū)，沒有其它亞細胞定位序列。戴佳琳等[41]發(fā)現(xiàn)牛帶絳蟲（T. saginata）成蟲LDH基因的編碼區(qū)有996 bp，編碼的氨基酸有332個，理論分子量為35.4 kDa，Western-blot分析表明, 原核高效表達的重組蛋白具有較好的免疫原性。杜武英等[42-44]對豬帶絳蟲（T.solium）LDH基因進行了研究，發(fā)現(xiàn)存在豬帶絳蟲LDH A和B兩個同源基因，全長分別為1332 bp（編碼區(qū)為161～1153 bp）和1497 bp（編碼區(qū)為166～1159 bp），均編碼331個氨基酸；LDH A編碼的蛋白質(zhì)理論分子量約為35 kDa，含3個跨膜區(qū)和多個磷酸化位點，4個主要的B細胞抗原表位，且重組蛋白具有較好的免疫原性和免疫反應性；兩種LDH在翻譯后的修飾位點、3個跨膜區(qū)和其他線性表位方面不完全相似，但兩者在蛋白的理化性質(zhì)、L-LDH結構域、構成LDH酶催化中心的關鍵氨基酸、包含LDH活性位點的線性表位、無亞細胞定位等方面是一致的。研究還證實，兩種LDH并非免疫診斷的特異抗原，但是膜定位發(fā)現(xiàn)，它們是重要的藥物靶標和疫苗候選分子。陳祖云等[45]發(fā)現(xiàn)亞洲帶絳蟲的LDH在蟲體表膜表達，功能受到抑制后，體內(nèi)的丙酮酸不能有效的轉化成乳酸排出體外，蟲體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)遭到破壞，直接影響了蟲體的表膜，這一點與吡喹酮作用后蟲體表膜結構受到破壞的結果一致，該研究從分子水平證實吡喹酮對亞洲帶絳蟲LDH有明顯抑制作用，其LDH可能是吡喹酮作用的分子靶標之一。方文等[46,47]用雙向電泳結合免疫印跡技術分析了豬囊尾蚴（Cysticercus cellulosae）和牛囊尾蚴（C. bovis）LDH，結果表明，豬和牛囊尾蚴均能檢測到LDH，其分子大小分別為35 368 Da和35 318 Da。

3.2 其他絳蟲LDH呂剛等[48]用生物信息學識別歐猥迭宮絳蟲（Spirometra erinaceieuropaei, Se）LDH全長cDNA序列，預測其編碼蛋白的結構與功能，所獲cDNA序列長1233 bp，最大編碼序列為1016 bp，編碼338個氨基酸殘基，預測的分子量約為36 kDa，并推斷LDH可能是是理想的免疫診斷、藥物作用及疫苗靶分子。Gan等[49]研究細粒棘球絳蟲（Echinococcus granulosus，Eg）LDH拓撲結構和功能，認為EgLDH是擁有2個跨膜區(qū)的合體跨膜蛋白，抗原決定簇抗體可以抑制EgLDH活性，試驗表明EgLDH是抗Eg的潛在藥物靶標和疫苗候選分子。

4 棘頭蟲LDH

許平等[50]研究發(fā)現(xiàn)蛭形巨吻棘頭蟲（Macracanthorhynchus hirudinaceus）LDH的活性與宿主豬的LDH存在差異，雄蟲的LDH活性是雌蟲的1.2倍，是宿主的1.6倍；雌蟲的LDH活性是宿主的1.4倍，表明蛭形巨吻棘頭蟲LDH活力高于宿主的LDH活力。廖黨金等[51]用聚丙烯酰胺凝膠電泳法分析蛭形巨吻棘頭蟲雄蟲、雌蟲體液和宿主血清的LDH同工酶的酶譜，結果表明雄蟲有3條酶帶、雌蟲有2條酶帶，具有很強的特異性；不同濃度的硝硫氰醚（Nitroscanate）對雄蟲和雌蟲特有的LDH同工酶酶帶活性具有不同程度的抑制。

5 蜱螨LDH

李貴生等[52]用聚丙烯酰胺盤狀電泳對格氏血厲螨（Haemolaelaps glasgowi）、鼠顎毛厲螨（Trieholaelaps myonyssognathus）和溜下盾螨（Hypoaspis lubrica）的LDH等同工酶進行了比較研究，分別獲得了4、2、4條酶帶，表明三個種屬間存在差異。裘明華等[53]首次報道了三種硬蜱不同發(fā)育期的同工酶酶譜，其中長角血蜱（Haemaphysalis longicornis）雌蟲和雄蟲若蟲LDH同工酶分別為2、3條酶帶，而幼蟲均為2條；亞洲璃眼蜱（Hyalomma asiaticume）雌蟲和雄蟲幼蟲和卵中LDH均為2條酶帶；殘緣璃眼蜱（H. detritum）卵的LDH為2條酶帶。

6 線蟲LDH

Mannen等[54]研究發(fā)現(xiàn)秀麗隱桿線蟲（Caenorhabditis elegans, Ce）LDH基因存在兩個內(nèi)含子，非脊椎動物LDH基因的兩個內(nèi)含子的位置相當于脊椎動物該基因的第二和第六內(nèi)含子的位置，已有研究表明鳥類和哺乳動物中保守的LDH編碼區(qū)存在6個內(nèi)含子，CeLDH基因的編碼區(qū)只包含其中的2個內(nèi)含子。Tsoi等[55]分析秀麗隱桿線蟲、哺乳動物、鳥類等物種的36種LDH同工酶的進化關系，表明哺乳動物LDH-C同工酶的出現(xiàn)似乎先于脊椎動物LDH-A和LDH-B的分化，后于非脊椎動物LDH。左迅等[56]對不同流行區(qū)周期型馬來絲蟲（Brugia malayi）微絲蚴同工酶進行圓盤電泳分析，結果顯示7個地區(qū)LDH同工酶型沒有任何差異，均為1條帶，相對遷移率（Relativemobility, Rm）為0.358，出現(xiàn)率為100%。

綜上所述，LDH是大多數(shù)體內(nèi)寄生蟲能量代謝中的關鍵酶之一，與寄生蟲的生存密切相關。已有研究表明，各種寄生蟲LDH在理化性質(zhì)和分子結構方面有其獨特性，可用于該種寄生蟲病的快速診斷、治療與監(jiān)測、藥物敏感性分析和藥物篩選等。另外，吡喹酮、青蒿素及其衍生物、甲苯咪唑等藥物均有廣譜抗寄生蟲功能，是目前廣泛應用的抗寄生蟲藥物，但其作用機制不詳。實驗證明這些藥物對寄生蟲LDH均有抑制作用，提示LDH可能是潛在的藥物分子靶標之一。因此，從分子水平對寄生蟲LDH功能進行研究，將有助于進一步了解其在能量代謝中的作用、酶學及免疫學特性，對于促進寄生蟲病診斷抗原和疫苗研究以及新抗蟲藥物的研發(fā)有重要的意義。

[1] 江莉, 王真瑜, 馬曉疆, 等. 間日瘧原蟲和惡性瘧原蟲乳酸脫氫酶基因的序列和重組抗原表位分析[J]. 中國寄生蟲學與寄生蟲病雜志, 2010, 28(2): 103-107.

[2] Brown W M, Yowell C A, Hoard A,et al. Comparative structural analysis and kinetic properties of lactate dehydrogenases from the four species of human malarial parasites[J]. Biochemistry, 2004, 43(20): 6219-6229.

[3] Winter V J, Cameron A, Tranter R,et al. Crystal structure of Plasmodium berghei lactate dehydrogenase indicates the unique structural differences of these enzymes are shared across the Plasmodium genus [J]. Mol Biochem Parasitol, 2003, 131(1): 1-10.

[4] 劉永生. 一種重要的瘧原蟲循環(huán)抗原—乳酸脫氫酶的研究進展及其在瘧疾診斷中的應用[J]. 國外醫(yī)學（寄生蟲病分冊）, 1998, 25(5): 200-203.

[5] 汪俊云, 包意芳, 楊玥濤, 等. 惡性瘧原蟲乳酸脫氫酶特異性單克隆抗體的制備[J]. 中國寄生蟲學與寄生蟲病雜志, 2005, 23(4): 213-216.

[6] 孫莉, 李明, 吳英松, 等. 間日瘧原蟲乳酸脫氫酶單克隆抗體的制備及其鑒定[J]. 廣東醫(yī)學, 2010, 31(8): 942-944.

[7] 吳英松, 雷臘梅, 李明. 用乳酸脫氫酶為靶分子的免疫層析技術檢測惡性瘧原蟲（英文）[J]. 第一軍醫(yī)大學學報, 2005, 25(7): 761-765.

[8] 李雪峰, 黃科生, 朱燕燕, 等. 瘧原蟲乳酸脫氫酶Mab在瘧疾診斷和療效考核上的應用[J]. 中國熱帶醫(yī)學, 2006, 6(10): 1743-1744轉1749.

[9] Makler M T, Piper R C, Milhous W K. Lactate dehyd rogenase and the diagnosis of malaria[J]. Parasitology Today, 1998, 14(9): 377.

[10] Read J A, Wilkinson K W, Tranter R,et al. Chloroquine binds in the cofactor binding site of Plasmodium falciparum[J]. J Biol Chem, 1999, 274(15): 10213-10218.

[11] Menting G T, Tilley L, Deady L W,et al. The antimalarial drug, chloroquine, interacts with lactate dehydrogenase from Plasmodium falciparum[J]. Mol Biochem Parasitol, 1997, 88: 215-224.

[12] Royer R E, Deck L M, Campos N M,et al. Biologically active derivatives of gossypol: synthesis and antimalarial activities of periacylated gossylic nitriles[J]. J Med Chem, 1986, 29(9): 1799-1801.

[13] Camerun A, Read J, Tranter R,et al. Identification and activity of a series of azole-based compounds with lactate dehydrogenase-directed anti-malarial activity[J]. J Biol Chem, 2004, 279(30): 31429-31439.

[14] Conners R, Schambach F, Read J,et al. Mapping the binding site for gossypol-like inhibitors of Plasmodium falciparum lactate dehydrogenase[J]. Mol Biochem Parasitol, 2005, 142(2): 137-148.

[15] Deck L M, Royer R E, Chamblee B B,et al. Selective inhibitors of human lactate dehyddrobenases and lactate dehydrogenase from the malarial parasite Plasmodiumfalciparum[J]. J Med Chem, 1998, 41(20): 3879-3887.

[16] Liwak U, Ananvoranich S. Toxoplasma gondii: over-expression of lactate dehydrogenase enhances differentiation under alkaline conditions[J]. Exp Parasitol, 2009, 122(2): 155-161.

[17] Al-Anouti F, Tomavo S, Parmley S,et a1. The expression of lactate dehydrogenase is important for the cell cycle of Toxoplasma gondii[J], J Biol Chem, 2004, 279(50): 52300-52311.

[18] Yang S M, Parmley S F. Toxoplasma gondii expresses two distinct lactate dehydrogenase homologous genes during its life cycle in intermediate hosts [J]. Gene, 1997, 184(1): 1-12.

[19] Dando C, Schroeder E R, Hunsaker L A,et a1.The kinetic properties and sensitivities to inhibitors of lactate dehydrogenases（LDH1 and LDH2）from Toxoplasma gondii：comparisons with pLDH from Plasmodium falciparum[J].Mol Biochem Parasitol, 2001, l18(1): 23-32.

[20] Schaap D, Arts G, Kroeze J,et al. An Eimeria vaccine candidate appears to be lactate dehydrogenase: characteriszation and comparative analysis[J]. Parasitology, 2004, 128: 603-616.

[21] 宋鴻雁. 堆型艾美耳球蟲乳酸脫氫酶DNA疫苗免疫保護作用及免疫機理研究[D]. 南京: 南京農(nóng)業(yè)大學, 2010.

[22] 黃兵, 趙其平, 陳兆國, 等. 五種雞球蟲卵囊的同工酶研究[J]. 畜牧獸醫(yī)學報, 1996, 27(4): 355-359.

[23] 余麗蕓, 汪明, 蔣金書, 等. 柔嫩艾美耳球蟲耐藥株與雞3種球蟲的同工酶的研究[J]. 畜牧獸醫(yī)學報, 1999, 30(2): 180-186.

[24] 張祝明. 4株柔嫩艾美爾球蟲耐藥性檢測及同工酶分析[D]. 合肥: 安徽農(nóng)業(yè)大學, 2006.

[25] 郭濤, 董輝, 黃兵, 等. 柔嫩艾美耳球蟲地克珠利與馬杜拉霉素耐藥株的三種同工酶分析[J]. 上海師范大學學報, 2011, 40(2): 197-201.

[26] 郭志云, 楊光, 荊春霞, 等. 微小隱孢子蟲LDH基因的克隆與序列分析[J]. 中國人獸共患病學報, 2010, 26(12): 1129-1133.

[27] Madern D, Cai X M, Abrahamsen M S,et al. Evolution of Cryptosporidium parvum lactate dehydrogenase from malate dehydrogenase by a very recent event of gene duplication[J]. Mol Biol Evol, 2004, 21 (3): 489-497.

[28] 劉傳愛, 肖建華, 梁瑜, 等. 日本血吸蟲乳酸脫氫酶基因的獲得和序列分析[J]. 實用預防醫(yī)學, 2004, 11(1): 17-20.

[29] Lv G, Hu X C, Peng Z Y,et a1. Expression and characterization of lactate dehydrogenase from Schistosoma japonicum[J]. Parasitol Res, 2006, 99(5): 593-596.

[30] 呂剛, 胡旭初, 黃燦, 等. 日本血吸蟲乳酸脫氫酶原核表達、純化及鑒定[J]. 中國公共衛(wèi)生, 2007, 23 (10): 1242-1244.

[31] 呂剛, 胡旭初, 黃燦, 等. 重組日本血吸蟲乳酸脫氫酶（SjLDH）酶學特性的研究[J]. 熱帶醫(yī)學雜志, 2007, 7(2): 122-125.

[32] 呂剛, 余新炳, 黃燦, 等. 日本血吸蟲乳酸脫氫酶（SjLDH）結構與功能的生物信息學分析[J]. 中國寄生蟲學與寄生蟲病雜志, 2007, 25(3): 202-205.

[33] 呂剛, 胡旭初, 黃燦, 等. 蒿甲醚、血紅素及Fe3+對重組日本血吸蟲乳酸脫氫酶（rSjLDH）作用的初步研究[J].中國人獸共患病學報, 2008, 24(2): 132-136.

[34] Xao S H, You J Q, Guo H F,et al. Effect of artemether on phosphorylase, lactate dehydrogenase, adenosine triphosphatase, and glucosephosphate dehydrogenase of Schistosoma japonicum harbored in mice[J]. Acta Pharmacol Sm, 1990, 20 (8): 750-754.

[35] 胡文慶, 秦小虎, 田春林, 等. 華支睪吸蟲不同發(fā)育期同工酶及蛋白質(zhì)的研究[J]. 中國病原生物學雜志, 2007, 2(6): 433-436.

[36] Yang G, Jing C X, Zhu P X,et a1. Molecular cloning and characterization of a novel lactate dehydrogenase gene from Clonorchis sinensis[J]. Parasitol Res, 2006, 99(1): 55-64.

[37] 胡旭初, 徐勁, 呂剛, 等. 華支睪吸蟲乳酸脫氫酶（CsLDH）基因的識別及其結構與功能分析[J]. 熱帶醫(yī)學雜志, 2007, 12: 1145-1148.

[38] 黃燦, 王樂旬, 胡旭初, 等. 華支睪吸蟲乳酸脫氫酶E_（10-20）及E_（94-102）表位的克隆表達與生物學特性初步研究[J]. 中山大學學報(醫(yī)學科學版), 2010, 31(4): 486-490.

[39] 黃燦, 胡旭初, 王樂旬, 等. 4種驅(qū)蟲藥對重組華支睪乳酸脫氫酶（CsLDH）作用研究[J]. 中國人獸共患病學報, 2005, 25(11): 1100-1102.

[40] 申萍香, 黃艷, 黃江, 等. 生物信息學分析亞洲牛帶絳蟲乳酸脫氫酶基因及其蛋白的結構與特性[J]. 中國人獸共患病學報, 2008, 24(8): 722-727.

[41] 戴佳琳, 黃江, 李波, 等. 牛帶絳蟲乳酸脫氫酶基因原核表達及免疫學特征[J]. 中國公共衛(wèi)生, 2010, 26(8): 987-988.

[42] 杜武英, 黃江, 胡旭初, 等. 豬帶絳蟲乳酸脫氫酶基因的序列分析、克隆表達和免疫學分析[J]. 中國人獸共患病學報, 2010, 26(3): 246-251.

[43] 杜武英, 戴佳琳, 黃艷, 等. 豬帶絳蟲乳酸脫氫酶A和B的生物信息學比較分析[J]. 熱帶醫(yī)學雜志, 2010, 10(3): 241-247轉368.

[44] Du W Y, Hu F Y, Yang Y B,et al. Molecular cloning, characterization, and immunolocalization of two lactate dehydrogenase homologous genes from Taenia solium[J]. Parasitol Res, 2011, 109 (3): 567-574.

[45] 陳祖云, 戴佳琳, 黃江, 等. 抗亞洲帶絳蟲藥物對乳酸脫氫酶抑制作用[J]. 中國公共衛(wèi)生, 2010, 26(5): 553-554.

[46] 方文, 包懷恩, 肖靚靚, 等. 雙向電泳結合蛋白質(zhì)印跡技術分析豬囊尾蚴乳酸脫氫酶[J]. 黑龍江畜牧獸醫(yī), 2011, 15(8): 8-10.

[47] 方文, 肖靚靚, 包懷恩, 等. 谷胱甘肽S-轉移酶和乳酸脫氫酶在亞洲帶絳蟲囊尾蚴中的表達[J]. 貴州農(nóng)業(yè)科學, 2011, 39(4): 150-153.

[48] 呂剛, 蘆亞君, 范志剛, 等. 歐猥迭宮絳蟲乳酸脫氫酶新基因識別及其結構與功能預測[J]. 中國公共衛(wèi)生, 2011, 27(8): 982-984.

[49] Gan W J, Zhang Z P, Lv G,et al. The topological structure and function of Echinococcus granulosus lactate dehydrogenase, a tegumental transmembrane protein[J]. Mol Biochem Parasitol, 2012, 184 (2): 109-117.

[50] 許平, 石雁羽, 廖黨金. 蛭形巨吻棘頭蟲與其宿主的乳酸脫氫酶比較研究[J]. 重慶師范學院學報（自然科學版）, 1997, 14(1): 61-64.

[51] 廖黨金, 石雁羽, 王雄清, 等. 蛭形巨吻棘頭蟲的LDH同工酶[J]. 中國獸醫(yī)學報, 1998, 18(2) 56-59.

[52] 李貴生, 孟陽春. 三種革螨同工酶的比較研究[J]. 廣東醫(yī)藥學院學報, 1989, 5(2): 14-17.

[53] 裘明華, 周友梅, 劉軍, 等. 長角血蜱、亞洲璃眼蜱和殘緣璃眼蜱同功酶的研究[J]. 重慶醫(yī)科大學學報, 1989, 14(4): 280-283.

[54] Mannen H, Li S S. The lactate dehydrogenase gene from nematode Caenorhabditis elegans contains only two of six introns conserved in the protein-encoding sequence of LDH genes from bird and mammals[J]. Biochem Mol Biol, 1995, 37 (6) : 1057-1061.

[55] Tsoi S C, Li S S. The Nucleotide and Deduced Amino-Acid Sequences of a cDNA Encoding Lactate Dehydrogenase from Caenorhabditis elegans: The Evolutionary Relationships of Lactate Dehydrogenases from Mammals, Birds, Amphibian, Fish, Nematode, Plants, Bacteria, Mycoplasma, and Plasmodium[J]. Biochem Bioph Res Commun, 1994, 205 (1): 558-564.

[56] 左迅, 黃蕙芬. 不同流行區(qū)周期型馬來絲蟲微絲蚴同工酶圓盤電泳比較分析[J]. 大連醫(yī)學院學報, 1992, 14(3): 74-77.

PROGRESS IN RESEARCH ON LACTATE DEHYDROGENASE OF PARASITES

WANG Yan-ge, DONG Hui, HUANG Bing
(Key Laboratory of Animal Parasitology of Ministry of Agriculture, Shanghai Veterinary Research Institute, CAAS, Shanghai 200241, China)

The survival of most parasites mainly depends on the glycolytic pathway, in which glucose is metabolized to lactic acid for their energy generation. Lactate dehydrogenase (LDH) as a terminal enzyme on anaerobic glycolytic pathway catalyzes the reversible reaction of pyruvate reduction to lactate and lactate oxidation to pyruvate. Thus LDH is closely associated with parasitic survival. Previous studies have showed that LDHs from different parasites exhibit particular physicochemical properties and molecular structures and play as ideal potential targets for diagnosis and drug screening. Research on LDH functions would provide useful information on searching potential antigen candidates for diagnostics and vaccine and on screening therapeutic drugs for parasitic diseases.

Lactate dehydrogenase; parasites; diagnosis; drug target; vaccine

S852.724.2

A

1674-6422（2014）01-0080-07

2013-10-09

國家自然科學基金（31272557）

王艷歌,女，碩士研究生，預防獸醫(yī)學專業(yè)

董輝，E-mail: donghui@shvri.ac.cn; 黃兵，E-mail: hb@shvri.ac.cn