李 莉 李惠英 鐘海燕 樊 茂 劉曉寧 (云南省昆明市兒童醫(yī)院，昆明 650000)

iNKT 細(xì)胞(invariant Natural killer T cells，iNKT cells)，半恒定自然殺傷T 細(xì)胞，是一群能夠調(diào)控機(jī)體抗病毒、細(xì)菌、真菌、寄生蟲、腫瘤、同種異體移植物以及自身組織免疫反應(yīng)的免疫調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞［1，2］。與傳統(tǒng)T 細(xì)胞相比，iNKT 細(xì)胞不僅具有CD1d 限制性，而且可以同時(shí)表達(dá)NK 細(xì)胞表面標(biāo)志CD161(人類)(鼠類NK1.1)以及恒定的Vα24-Jα18/Vβ11 T 細(xì)胞受體(TCR)(人類)(鼠類Vα14-Jα18/Vβ8.2、7、2 TCR)。iNKT 細(xì)胞可通過(guò)其表面TCR 與抗原遞呈細(xì)胞表面的MHC Ⅰ樣分子——CD1d 遞呈的糖脂質(zhì)抗原結(jié)合而激活，活化后快速產(chǎn)生大量的細(xì)胞因子，調(diào)節(jié)天然免疫和適應(yīng)性免疫應(yīng)答［3］。1 型糖尿病(Type 1 diabetes，T1D)是器官特異性的自身免疫反應(yīng)性疾?。?］。近年來(lái)大多數(shù)研究表明，iNKT 細(xì)胞數(shù)量減少、功能缺失與自身免疫T1D 的發(fā)生密切相關(guān)［5，6］。雖然目前對(duì)于iNKT細(xì)胞減少引發(fā)自身免疫T1D 的作用機(jī)制尚不清楚，但新近發(fā)現(xiàn)的一些參與調(diào)控iNKT 細(xì)胞發(fā)育以及參與iNKT 細(xì)胞調(diào)控T1D 的相關(guān)基因、信號(hào)分子將可能成為評(píng)價(jià)人類自身免疫T1D 發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)鍵指標(biāo)［7，8］。因此，本文將對(duì)這些相關(guān)基因、信號(hào)分子在控制NKT 細(xì)胞發(fā)育以及與T1D 發(fā)病之間的聯(lián)系展開綜述。

1 控制NKT 細(xì)胞表達(dá)的相關(guān)基因座位——Nkt1、Nkt2、Idd

非肥胖型糖尿病小鼠(NOD 小鼠)是多種自身免疫性疾病(Autoimmunity disease，AID)的易感動(dòng)物，包括T1D、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(Systemic lupus erythematosus，SLE)、實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎(Experimental autoimmune encephalomyelitis)等。目前已證明，NOD 小鼠胸腺、肝臟、脾臟中的NKT 細(xì)胞數(shù)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于其他常見(jiàn)種系小鼠，而且其NKT 細(xì)胞產(chǎn)生IL-4 的量也相對(duì)較低，相比C57BL/6 小鼠低將近20 倍［9-11］。

有研究通過(guò)比對(duì)NOD 小鼠與C57BL/6 小鼠的基因圖譜，篩選出了與NKT 細(xì)胞數(shù)量具有重要聯(lián)系的兩個(gè)基因座位:即C57BL/6 小鼠1 號(hào)染色體上的Nkt1 座位和2 號(hào)染色體上的Nkt2 座位，這兩個(gè)基因座位分別與NOD 狼瘡小鼠1 號(hào)染色體遠(yuǎn)端的易感基因Babs2/Bana3 以及NOD 糖尿病小鼠2 號(hào)染色體上的易感基因Idd13 相對(duì)應(yīng)［12-14］。這說(shuō)明NOD小鼠AID 的發(fā)生與這兩個(gè)基因座位的缺陷具有很大的關(guān)系，而正因?yàn)槿狈@些基因座位的表達(dá)，才使得其體內(nèi)的NKT 細(xì)胞數(shù)量極少、功能缺失、并導(dǎo)致機(jī)體內(nèi)T1D、SLE 等AID 的發(fā)生。

有研究發(fā)現(xiàn)，C57BL/6 小鼠殺傷細(xì)胞的凝集素樣受體亞家族B(Klrb)Ⅱ型跨膜蛋白C 型凝集素受體中的兩個(gè)受體(Klrb1c/NKR-P1C、Klrb1b/NKRP1B)均可與NK1.1 抗體-PK136 反應(yīng)，而NOD 小鼠體內(nèi)的淋巴細(xì)胞卻并不能與之反應(yīng)，這說(shuō)明C57BL/6 小鼠淋巴細(xì)胞內(nèi)含有可以表達(dá)NK1.1(即具有Klrb1c/ NKR-P1C 及Klrb1b/ NKR-P1B)的自然殺傷細(xì)胞(Natural killer cells，NK cells)以及NKT 細(xì)胞，而在NOD 小鼠淋巴細(xì)胞中卻缺少這些細(xì)胞。因此，為了使NOD 小鼠體內(nèi)也可產(chǎn)生具有表達(dá)NK1.1特性的殺傷細(xì)胞，研究者通過(guò)回交雜種的方式，首先將親本代C57BL/6 小鼠與NOD 小鼠進(jìn)行雜交，產(chǎn)生了子代共基因NOD Nkrp1b 系小鼠(既可表達(dá)NK1.1，又?jǐn)y帶有C57BL/6 等位基因Klrb1c);而后又將其與父母代C57BL/6 小鼠回交，回交至少10代后產(chǎn)生的子代NOD 小鼠，因具有父母代C57BL/6小鼠更多的遺傳背景(C57BL/6 小鼠可表達(dá)Nkt1b、Nkt2b)，才 被 稱 為 NOD.Nkrp1b Nkt1 小 鼠 或NOD.Nkrp1b Nkt2 小鼠［12-15］。

Jordan 等［12］研究發(fā)現(xiàn)，與NOD.Nkrp1b 小鼠相比，NOD.Nkrp1b Nkt1 小鼠胸腺和脾臟內(nèi)NKT 細(xì)胞數(shù)量表達(dá)增加。這說(shuō)明通過(guò)與C57BL/6 小鼠雜交、回交，NOD 小鼠體內(nèi)獲得了更多的C57BL/6 Nkt1座位，該基因的表達(dá)修復(fù)了NOD 小鼠體內(nèi)NKT 細(xì)胞缺失的功能。然而，值得一提的是，NOD.Nkrp1b Nkt1 小鼠體內(nèi)的NKT 細(xì)胞數(shù)量雖然增高了，但卻并不能防止T1D 的發(fā)生，這可能與小鼠體內(nèi)增加的NKT 細(xì)胞未成熟有關(guān)。

Fletcher 等［16］發(fā)現(xiàn)，與NOD.Nkrp1b 小鼠相比，NOD.Nkrp1b Nkt2 小鼠可以產(chǎn)生更多的胸腺NKT細(xì)胞亞群，并能減少T1D 的發(fā)生幾率。通過(guò)采用微陣列技術(shù)對(duì)NOD.Nkrp1b Nkt2 小鼠和NOD.Nkrp1b小鼠的胸腺細(xì)胞進(jìn)行基因表達(dá)分析，F(xiàn)letcher 等鑒別出了控制NKT 細(xì)胞數(shù)量的潛在基因——過(guò)氧化物酶膜蛋白編碼基因Pxmp4，而過(guò)氧化物酶在糖脂代謝過(guò)程中是很重要的。而且Pxmp4 還綁定于伴侶/膜運(yùn)輸分子Pex19，而Pex19 又是在Nkt1 連鎖區(qū)域被編碼的。這些相關(guān)的證據(jù)表明Nkt1、Nkt2 在NKT細(xì)胞的表達(dá)過(guò)程中可能具有非常重要的調(diào)控作用。

此外，胰島素依賴性糖尿病(Insulin-dependent diabetes，Idd)基因，作為與T1D 發(fā)生密切相關(guān)的易感基因，在控制NKT 數(shù)量表達(dá)的過(guò)程中，其也可能參與其中［17］。Jordan 等［12］研究發(fā)現(xiàn)，C57BL/6 小鼠2 號(hào)染色體上的Nkt2 基因座位與NOD 糖尿病小鼠2 號(hào)染色體上的易感基因Idd13 相對(duì)應(yīng)。目前發(fā)現(xiàn)至少有兩個(gè)基因位點(diǎn)與Idd13 有關(guān)，其中一個(gè)是β2m(編碼β2-微球蛋白)，而NKT 細(xì)胞TCR 識(shí)別的CD1d 又是β2m 依賴的膜整合糖蛋白［16，17］，這說(shuō)明這些基因位點(diǎn)的表達(dá)與否很可能與NKT 細(xì)胞的活化程度有關(guān)。另外，Ueno 等［18］還報(bào)道稱，在Idd9.1基因座位表達(dá)的T1D 易感基因產(chǎn)物可能在致病機(jī)制中起著關(guān)鍵的作用。

綜上所述，Nkt1、Nkt2 及Idd 基因的表達(dá)與NKT細(xì)胞數(shù)量的控制密切相關(guān)，并且這種控制將對(duì)NKT細(xì)胞減少或功能缺失誘導(dǎo)的AID 的發(fā)生發(fā)展產(chǎn)生影響。

2 調(diào)控NKT 細(xì)胞發(fā)育的相關(guān)信號(hào)分子——SLAM、SAP、Slamf1、Slamf6

近期研究發(fā)現(xiàn)，淋巴細(xì)胞信號(hào)活化分子(Signaling lymphocytic activation molecule，SLAM)、SLAM 相關(guān)蛋白(SLAM associated protein，SAP)以及SLAM-SAP 信號(hào)通路的活化在NKT 細(xì)胞的發(fā)育過(guò)程中是必不可少的關(guān)鍵因素［19，20］。SAP 表達(dá)于T細(xì)胞、NK 細(xì)胞表面、并綁定于SLAM 家族受體的細(xì)胞質(zhì)部分、通過(guò)招募Fyn、介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路的活化，而調(diào)控胸腺NKT 細(xì)胞的發(fā)育。動(dòng)物模型研究表明，SAP 介導(dǎo)信號(hào)通路的活化程度與自身免疫性疾病的發(fā)生密切相關(guān)，因此其被認(rèn)為是導(dǎo)致人體病理發(fā)生的重要因素［21］。

Jordan 等［12］通過(guò)微陣列技術(shù)分別 對(duì)NOD.Nkrp1b Nkt1 小鼠以及NOD.Nkrp1b 小鼠進(jìn)行了基因表達(dá)分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn):Slamf1 和Slamf6(分別編碼SLAM 和ly108)很可能是調(diào)控Nkt1 表達(dá)、并控制NKT 細(xì)胞數(shù)量產(chǎn)生多少的最主要基因。因?yàn)镾lamf1 編碼的受體分子SLAM 可與SAP 結(jié)合、活化SAP 信號(hào)，而SLAM-SAP 信號(hào)又是NKT 細(xì)胞發(fā)育過(guò)程中必不可少的信號(hào)通路，有研究證實(shí)在SAP 缺失或其下游Src 激酶Fyn 缺失的小鼠體內(nèi)NKT 細(xì)胞嚴(yán)重缺陷［22-24］。

流式細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果也證實(shí):與NOD.Nkrp1b 小鼠相比，NOD.Nkrp1b Nkt1 小鼠胸腺細(xì)胞表面的、Slamf1 編碼的免疫球蛋白樣受體SLAM 的表達(dá)水平呈顯著上升。這歸根結(jié)底還在于野生型NOD 小鼠的胸腺細(xì)胞發(fā)育時(shí)，其表面的SLAM 表達(dá)存在異常。因此，即便子代NOD.Nkrp1b 小鼠已開始遺傳C57BL/6 小鼠殺傷細(xì)胞的特性，但未經(jīng)過(guò)多次回交，其胸腺NKT 細(xì)胞表面的SLAM 表達(dá)還是相對(duì)較低的［25］。除此之外，Jordan 等［12］還研究證實(shí):C57BL/6 和NOD.Nkrp1b Nkt1 小鼠體內(nèi)的雙陽(yáng)性胸腺細(xì)胞表面的SLAM 表達(dá)水平已達(dá)到了峰值，而在成熟的單陽(yáng)性細(xì)胞中其表達(dá)水平相對(duì)降低;與之相反的是，在NOD.Nkrp1b 小鼠體內(nèi)，單陽(yáng)性胸腺細(xì)胞亞群表面表達(dá)的SLAM 最高，而在雙陽(yáng)性細(xì)胞內(nèi)SLAM表達(dá)卻相對(duì)較低。這說(shuō)明SLAM 在胸腺中的表達(dá)高低直接關(guān)系到NKT 細(xì)胞的發(fā)育速度，即SLAM 表達(dá)增高，將促進(jìn)雙陽(yáng)性NKT 細(xì)胞(未成熟)在胸腺中的發(fā)育，反之，雙陽(yáng)性NKT 細(xì)胞發(fā)育將受到阻滯。對(duì)于上述研究發(fā)現(xiàn)的SLAM 在C57BL/6 小鼠胸腺細(xì)胞的表達(dá)模式，同樣得到另一研究結(jié)論的支持，該研究顯示Slamf1 和Slamf6 基因在雙陽(yáng)性胸腺細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)接近了峰值，而在單陽(yáng)性細(xì)胞內(nèi)兩者表達(dá)水平下降。由此可見(jiàn)，等位基因的變異對(duì)于雙陽(yáng)性胸腺細(xì)胞表面SLAM 的表達(dá)水平是影響很大的，而這也直接關(guān)系到NKT 細(xì)胞的發(fā)育過(guò)程。雙陽(yáng)性胸腺細(xì)胞表面SLAM的表達(dá)下降，使得在NKT 細(xì)胞發(fā)育過(guò)程中，SLAMSLAM 同型連接功能降低，接著SAP 信號(hào)減弱，最終導(dǎo)致NKT 細(xì)胞發(fā)育阻滯，這也可能就是NOD 小鼠體內(nèi)NKT 細(xì)胞缺陷的原因［25］。

SLAM 表達(dá)缺陷除可導(dǎo)致上述NKT 細(xì)胞發(fā)育阻滯外，還可導(dǎo)致NOD 小鼠NKT 細(xì)胞功能失活。例如，有研究發(fā)現(xiàn)當(dāng)髓樣樹突狀細(xì)胞和NKT 細(xì)胞系之間的SLAM-SLAM 連接被蛋白肽鍵阻斷后，Th2 型細(xì)胞因子(IL-4/IL-10)會(huì)應(yīng)激產(chǎn)生選擇性修復(fù)［25］。

Slamf6 是與Slamf1 緊密連接的、可能影響NKT1 效 應(yīng) 的 潛 在 基 因［12，22］。有 學(xué) 者 將 骨 髓 和Slamf1/Slamf6 雙突變體的嵌合體混合，研究Slamf1和Slamf6 的表達(dá)對(duì)NKT 細(xì)胞發(fā)育的影響，結(jié)果證明Slamf6 也參與了NKT 細(xì)胞的發(fā)育。該研究首先將Ja18-/-小鼠經(jīng)放射線照射后，接著將CD45 標(biāo)記的野生型小鼠骨髓和Slamf1 及Slamf6 缺失的嵌合體小鼠骨髓分別與經(jīng)放射線照射后的Ja18-/-小鼠骨髓以1 ∶1比例混合，然后將混合后的骨髓再分別導(dǎo)入經(jīng)放射線照射的Ja18-/-小鼠體內(nèi)、重建免疫功能，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Slamf1 和Slamf6 缺失的細(xì)胞不能刺激產(chǎn)生與野生型相同數(shù)目的NKT 細(xì)胞，而且表達(dá)嵌合體的小鼠也因Slamf1 和Slamf6 的缺失導(dǎo)致在陽(yáng)性選擇后NKT細(xì)胞的正常增殖分化功能受到破壞［25］。

由此可見(jiàn)，SLAM、SAP、Slamf1、Slamf6 在調(diào)控NKT 細(xì)胞表達(dá)方面發(fā)揮著非常重要的作用。通過(guò)收集并借鑒研究這些基因、分子的表達(dá)信息，將為后期深入研究NKT 細(xì)胞減少誘導(dǎo)AID 發(fā)生的相關(guān)分子機(jī)制提供有力的證據(jù)，有望在未來(lái)將NKT 細(xì)胞應(yīng)用于臨床治療指明新方向。

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