李華鐳，張 青，劉益飛，黃 華（南通大學附屬醫(yī)院泌尿外科；病理科，江蘇600）

前列腺癌組織中CXCR7與Ki67的表達及相關性研究

李華鐳1*，張 青2，劉益飛2，黃 華2
（南通大學附屬醫(yī)院1泌尿外科；2病理科，江蘇226001）

目的：研究趨化因子受體CXCR7與細胞增殖指數Ki67在前列腺癌組織及良性前列腺增生組織中的表達水平及相關性。方法：應用免疫組織化學檢測83例前列腺癌組織及40例良性前列腺增生組織中CXCR7與Ki-67的表達。結果：CXCR7和Ki67在前列腺癌標本中的陽性表達率分別為61.4%和69.9%，在良性前列腺增生組織中的表達率分別為17.5%和10.0%，CXCR7和Ki-67在前列腺癌組織中的表達呈正相關，差異具有統計學意義（P<0.05）。結論：CXCR7可能參與了細胞周期的調控，促進前列腺癌的發(fā)生、發(fā)展，對前列腺癌的診斷和治療具有指導意義。

前列腺癌；CXCR7；Ki67；免疫組織化學法

前列腺癌是我國男性泌尿生殖系統發(fā)病率第二的惡性腫瘤[1]，目前為止，關于前列腺癌的發(fā)病機制還未完全了解。CXCR7最早被稱為孤兒受體，最先從狗甲狀腺cDNA庫篩選出來，在小鼠體內位于1號染色體，在人體內位于2號染色體。CXCR7具有典型的趨化因子結構特征，與CXCR4含有31%的同源序列，是除CXCR4之外CXCL12的另一受體。多項研究顯示CXCR7陽性表達的腫瘤易發(fā)生浸潤和轉移[2]。Ki67核抗原與細胞的增殖及預后密切相關[3]。選擇本院病理科2009年6月1日—2014年6 月1日手術切除或穿刺獲得前列腺癌標本83例，采用免疫組織化學方法檢測CXCR7和Ki67前列腺癌和良性前列腺增生組織中的表達，研究其相關性，為前列腺癌的診斷和治療提供新的思路和方法。

1 材料與方法

1.1 材料 前列腺癌標本83例，年齡47～87歲。腫瘤直徑≥3cm 38例，<3cm 45例；無淋巴結轉移者81例，有淋巴結轉移者2例。Gleason分級∶高分化（2～4分）20例，中分化（5～6分）39例，低分化（7～10分）24例。TNM分期∶Ⅰ期20例，Ⅱ期38例，Ⅲ期21例，Ⅳ期2例，缺少2例。對照組采用40例良性前列腺增生的標本。所有患者術前均未進行放化療或激素治療，病理切片已由本院病理科確診。

1.2 方法 CXCR7多克隆抗體及細胞增殖因子Ki-67（均美國Santa Cruz公司），兩者稀釋濃度均為1∶100。S-P試劑盒及DAB酶底物顯色試劑盒（北京中杉金橋生物技術有限公司）。采用免疫組織化學方法（S-P法），所有前列腺癌組織均經過10%中性福

爾馬林固定，常規(guī)取材，包埋，連續(xù)厚度為5μm石蠟切片，二甲苯脫蠟，梯度酒精，3%雙氧水阻斷內源性過氧化物酶，高溫高壓組織抗原修復，非免疫性動物血清封閉，一抗4℃過夜，生物素標記的二抗（IgG），PBS沖洗，加鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物，DAB顯色，蘇木素復染，梯度酒精脫水，二甲苯透明，封片。陰性對照以PBS代替一抗，余步驟相同。

1.3 結果判定 CXCR7定位于細胞漿或細胞膜，Ki-67定位于細胞核，以相應位置呈現淡黃色至深棕色為細胞陽性表達。每張切片隨機選取10個高倍視野，計數細胞總數以及陽性細胞數，按陽性細胞所占百分比計分∶<10%為0分，10%～50%為1分，51% ～75%為2分，76%～100%為3分；根據染色強度評分∶無染色為1分，淺染色為2分，中等染色為3分，深染色為4分。陽性細胞百分數評分與顏色強度評分相乘所得的乘積作為判定結果∶≤2分為不表達（-），4～6分為低表達，7～12分為高表達，并確定低表達和高表達為陽性表達。由兩名高年資病理科醫(yī)生采用雙盲法閱片。

1.4 統計學處理 采用SPSS 21.0軟件包進行數據分析處理，采用χ2檢驗，相關性分析采用Spearman等級相關分析處理，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 CXCR7、Ki67在前列腺癌與良性前列腺增生組織中表達的比較 CXCR7、Ki67前列腺癌標本中陽性表達率分別為61.4%和69.9%，在良性前列腺增生組織中的陽性表達率分別為17.5%和10.0%，CXCR7、Ki67陽性表達率在前列腺癌組織與良性前列腺增生組織間差異均有統計學意義（P<0.05）。如圖1～8。

圖1 CXCR7在前列腺癌組織中表達陽性（S-P法，200×）

圖2 CXCR7在前列腺癌組織中表達陰性（S-P法，200×）

圖3 Ki67在前列腺癌組織中表達陽性（S-P法，200×）

圖4 Ki67在前列腺癌組織中表達陰性（S-P法，200×）

圖5 CXCR7在良性前列腺增生組織中表達陽性（S-P法，200×）

圖6 CXCR7在良性前列腺增生組織中表達陰性（S-P法，200×）

圖7 Ki67在良性前列腺增生組織中表達陽性（S-P法，200×）

圖8 Ki67在良性前列腺增生組織中表達陰性（S-P法，200×）

2.2 CXCR7、Ki67表達與前列腺癌患者臨床病理特征的關系 CXCR7在高分化、中分化和低分化前列腺腺癌中表達率分別為25.0%、66.7%和83.3%。CXCR7的表達與前列腺癌不同分化程度呈相關性（P<0.05），而與其他臨床病理特征無相關性。Ki67在高分化、中分化和低分化前列腺腺癌中表達率分別為45.0%、76.9%和79.2%，Ki67的表達與前列腺癌不同分化程度呈相關性（P<0.05），而與其他臨床病理特征無相關性。見表1。

表1 CXCR7、Ki67基因表達與前列腺癌患者臨床病理特征的關系

2.3 前列腺癌組織中CXCR7、Ki67蛋白表達的相關性分析 本實驗中83例前列腺癌組織及40例良性前列腺增生組織同時進行CXCR7和Ki67染色。CXCR7和Ki67均呈陽性表達42例，CXCR7陽性表達而Ki67陰性表達9例，CXCR7陰性表達而Ki67陽性表達16例，CXCR7和Ki67均呈陰性表達16例，采用Spearman相關分析顯示，83例前列腺癌組織中CXCR7和Ki67的表達呈正相關（r=0.332，P< 0.001），見表2。

3 討 論

腫瘤的發(fā)生發(fā)展是一個多因素的過程，了解相關腫瘤的發(fā)病機制能為腫瘤的治療提供重要依據。目前已經發(fā)現50多種趨化因子以及20多種趨化因子受體，其中趨化因子受體CXCR7是近年來研究的熱點，該受體為G蛋白偶聯受體，含有七次跨膜結構域[4]?，F已多項研究證實CXCR7可以與其配體CXCL12和CXCL11結合參與胃癌、肺癌、乳腺癌、結腸癌、卵巢癌等多種腫瘤的浸潤和轉移[5]。研究發(fā)現CXCR7高表達的肝細胞癌患者通過刺激血管內皮生長因子（VEGF）更容易發(fā)生肝外肺轉移[6-7]。CXCR7與相應配體結合后形成的二聚體，與β-arrestin關聯參與的非經典途徑激活絲裂原活化蛋白激酶[8-9]。CXCR7與其他的受體不同，CXCR7可以增強細胞的粘附作用，促進腫瘤細胞發(fā)生侵襲，但并不會引起細胞鈣離子的內流作用[10]。在前列腺癌中IL-8能通過細胞內信號誘導CXCR7的表達同時下調CXCR4以及促進表皮生長因子受體（EGFR）磷酸化，誘導細胞發(fā)生有絲分裂，從而引起細胞增殖，侵襲及血管形成作用?；蚯贸鼵XCR7mRNA后能明顯減少細胞增殖，這是由于抑制了細胞循環(huán)的G1期，減少了G1期向S期蛋白的表達作用[11]。Ki67作為細胞增殖因子與細胞合成代謝有關，在G1至M期表達最高，目前在多種腫瘤中Ki67被用來作為腫瘤細胞的增殖能力的標記，Ki67的表達越強代表腫瘤細胞的增殖越活躍，預后越差[3]。

本文研究結果顯示CXCR7在83例前列腺癌組織中的陽性表達率為61.4%，40例良性前列腺增生組織中為17.5%，在前列腺癌組織中的表達水平高于良性增生的前列腺組織（P＜0.05）；Ki67在83例前列腺癌組織中的陽性表達率為69.9%，40例良性前列腺增生組織中為10%，在前列腺癌組織中的表達水平高于良性增生的前列腺組織（P＜0.05）；CXCR7 和Ki67的表達均與Gleason分級以及TNM分期有

一定相關性，且兩者在Gleason分級中高、中分化與低分化前列腺癌組織之間的差異具有統計學意義（P<0.05），提示惡性程度越高的腫瘤CXCR7與Ki67的表達水平越高。說明在疾病的進展過程中CXCR7 與Ki67發(fā)揮著重要作用，參與了腫瘤細胞的增殖，侵襲和轉移。本文CXCR7與Ki67的表達情況采用Spearman相關分析，顯示前列腺癌組織中CXCR7的陽性表達與Ki67的陽性表達呈正相關（r=0.332，P<0.001），提示CXCR7可能參與了細胞周期的調控，促進細胞的增殖，促進了腫瘤惡性轉化，但是如何參與細胞周期的調控，如何與其他信號因子協調參與細胞調控的機制還有待進一步研究和證實。

表2 前列腺癌組織中CXCR7與Ki-67蛋白表達的相關性 例

采用免疫組織化學對CXCR7和Ki67的表達進行聯合診斷提高前列腺癌的診斷率，同時還可初步判斷腫瘤的惡性程度、發(fā)展趨勢及其預后，為前列腺癌的臨床治療提供重要依據。

[1]Ferlay J，Shin HR，Bray F，et al.Estimates ofworldwide burden of cancer in 2008:GLOBOCAN 2008［J］.Int JCancer，2010，127（12）∶2893-2917.

[2]Melchionna R，Di Carlo A，De Mori R，et al.Induction of myogenic differentiation by SDF-1 via CXCR4 and CXCR7 receptors［J］.Muscle Nerve，2010，41（6）∶828-835.

[3]林海利，鄭周達，陳森期，等.前列腺癌組織Ki-67表達及其臨床意義的研究［J］.中華腫瘤防治雜志，2007，14（23）∶1805-1806.

[4]Singh AK，Arya RK，Trivedi AK，et al.Chemokine receptor trio∶CXCR3，CXCR4 and CXCR7 crosstalk via CXCL11 and CXCL12［J］.Cytokine Growth Factor Rev，2013，24（1）∶41-49.

[5]Sánchez-Martín L，Sánchez-Mateos P，Caban¨as C.CXCR7 impact on CXCL12 biology and disease［J］.Trends Mol Med，2013，19（1）∶12-22.

[6]Xue TC，Chen RX，Han D，et al.Down-regulation of CXCR7 inhibits the growth and lungmetastasis of human hepatocellular carcinoma cells with highly metastatic potential［J］. Exp Ther Med，2012，3（1）∶117-123.

[7]Zheng K，Li HY，Su XL，et al.Chemokine receptor CXCR7 regulates the invasion，angiogenesis and tumor growth of human hepatocellular carcinoma cells［J］.J Exp Clin Cancer Res，2010，29∶31.

[8]Rajagopal S，Kim J，Ahn S，et al.β-arrestin-but not G protein-mediated signaling by the"decoy"receptor CXCR7［J］. Proceedings of the National Academy of Sciences，2010，107 （2）∶628-632.

[9]Kovacs JJ，Hara MR，Davenport CL，et al.Arrestin development∶emerging roles for beta-arrestins in developmental signaling pathways［J］.Dev Cell，2009，17（4）∶443-458.

[10]Burns JM，Summers BC，Wang Y，et al.A novel chemokine receptor for SDF-1 and I-TAC involved in cell survival，cell adhesion，and tumor development［J］.J Exp Med，2006，203（9）∶2201-2213.

[11]Singh RK，Lokeshwar BL.The IL-8-regulated chemokine receptor CXCR7 stimulates EGFR signaling to promote prostate cancer growth［J］.Cancer Res，2011，71（9）∶3268-3277.

Expression and Correlation of CXCR7 and Ki67 in Prostatic Cancer

LIHualei1,ZHANG Qing2,LIU Yifei2,HUANG Hua2
（1Department of urinary surgery；2Department of Pathology,Affiliated Hospital of Nantong University,Jiangsu226001）

Objective：To study the CXCR7 and Ki67 expression and their correlation of them in prostatic cancer. M ethods：The expression of CXCR7 and Ki67 was detected in 83 cases with prostatic cancer and in 40 cases with benign prostatic hyperplasia by the immunohistochemistry.Results：CXCR7 and Ki67 expression in the caseswith prostatic cancer were 61.4%（51/83）and 69.9%（58/83）,which were obviously higher than those in the caseswith benign prostatic hyperplasia 17.5%（7/40）and 10%（4/40）（P<0.05）.The expression of CXCR7 and Ki67 were coincident in prostatic cancer （P<0.05）.Conclusions：CXCR7might take part in cell cycle control,so as to promote the occurrence and development of prostate cancer,and could have the guiding significance in its diagnosis and treatment of it.

prostatic cancer;CXCR7;Ki67;immunohistochemistry

R737.25

A

李華鐳，男，漢族，江蘇南通人，生于1980年9月，碩士，主治醫(yī)師。研究方向∶男性泌尿生殖系統惡性腫瘤分子病理。 通信作者∶黃華，副主任技師，E-mail:hhua666@126.com

2014-08-03

1006-2440（2014）05-0445-04