羅哲容，蘇雙良，任慧君，王 慧，趙志壯，冷雪冰，白秀娟，*（.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，黑龍江哈爾濱5000；.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，黑龍江哈爾濱5000；．吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)中藥材學(xué)院，吉林長春08）

不同劑量水蛭粉對高脂飲食兔血脂水平的影響

羅哲容1，蘇雙良2，任慧君1，王 慧2，趙志壯2，冷雪冰3，白秀娟2，*
（1.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，黑龍江哈爾濱150030；2.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，黑龍江哈爾濱150030；3．吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)中藥材學(xué)院，吉林長春130118）

目的：研究不同劑量水蛭粉對高脂飼料喂養(yǎng)兔血清血脂水平的影響。方法：選擇體質(zhì)健康伊拉肉兔150只，隨機(jī)分成5組，即空白組、高脂組和三個不同劑量組（0.15、0.075、0.0375g/kg水蛭粉），在實(shí)驗前、實(shí)驗第20d和第40d空腹稱重，并心臟采血，測定血清中總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）含量。結(jié)果：各組體重隨時間而增長，實(shí)驗結(jié)束時，各組間體重差異不顯著（p＞0.05）；高脂組TC、TG、LDL-C水平明顯高于空白組（p＜0.01），HDL-C水平高于空白組，但差異不顯著（p＞0.05）；高、中、低劑量組TC、TG、LDL-C水平明顯低于高脂組（p＜0.01），高、中、低劑量組之間無顯著差異（p＞0.05）；高、中、低劑量組HDL-C水平與高脂組差異不顯著（p＞0.05）。結(jié)論：水蛭粉能調(diào)節(jié)高脂飼料喂養(yǎng)過程中兔的血脂水平，對高脂血癥起到保健作用，且低劑量水蛭粉（0.0375g/kg）則可達(dá)到顯著的降血脂效果。

水蛭，高脂飲食，血脂，兔

《中國藥典》記載，中藥水蛭來源為水蛭科動物螞蟥（Whitmania pigra Whitman）、水蛭（Hirudo nipponica Whitman）或柳葉螞蟥（Whitmania acranulata Whitman）的干燥全體[1]，具有抗凝血、抗癌、抗炎、抗纖維化等功效[2-5]，在治療缺血性中風(fēng)、動脈粥樣硬化、惡性腫瘤、慢性腎病、心絞痛和腦損傷等臨床疾病都有較好的療效[6-10]。李漢平[11]用單味水蛭粉治療高脂血癥62例，取得較好療效。如今，由于人們的生活質(zhì)量在不斷提高，飲食結(jié)構(gòu)也比較復(fù)雜，大多數(shù)情況下易造成高脂飲食，體內(nèi)血脂水平受高脂飲食的影響而不斷升高，從而可能導(dǎo)致高脂血癥、脂肪肝、動脈粥樣硬化以及冠心病等相關(guān)疾病。因此，開發(fā)出更多更好的具有調(diào)節(jié)血脂水平并且對人體沒有傷害的保健藥品是勢在必行的。長久以來，利用水蛭及其復(fù)方治療高脂血癥的相關(guān)報道較多，但對水蛭在日常飲食中添加是否可起到調(diào)節(jié)血脂水平、預(yù)防相關(guān)疾病、發(fā)揮營養(yǎng)保健作用及其適宜用量研究報道較少。本實(shí)驗以兔為研究對象，探索在高脂飼料喂養(yǎng)過程中，添加不同劑量的水蛭粉對兔血脂水平變化的影響，為水蛭粉作為營養(yǎng)保健藥品進(jìn)行開發(fā)和利用奠定實(shí)驗基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與設(shè)備

基礎(chǔ)飼料 黑龍江肇東希望飼料有限責(zé)任公司；高脂飼料 成分為0.5%膽固醇、8%蛋黃粉、10%豬油、81.5%基礎(chǔ)飼料；水蛭（Hirudo nipponica） 哈爾濱中藥材大市場，粉碎后與高脂飼料混勻制成含1%水蛭粉的高脂飼料（即100g高脂飼料中含水蛭粉1g）；實(shí)驗動物 體質(zhì)健康的伊拉兔150只，雄性，3月齡，體重為（2.045±0.031）kg，由東北農(nóng)業(yè)大學(xué)特種經(jīng)濟(jì)動物實(shí)驗室肉兔繁育基地提供。

飛鴿離心機(jī) 上海安亭科學(xué)儀器廠。

1.2 分組和給藥

兔適應(yīng)性飼養(yǎng)7d，觀察記錄采食量。適應(yīng)期結(jié)束后，隨機(jī)分為5組，每組30只。飼喂方案見表1。上述各組兔均單籠飼養(yǎng)，限食量，根據(jù)適應(yīng)期采食情況規(guī)定每兔每日100g，自由飲水，連續(xù)喂養(yǎng)40d。高、中、低劑量組均按計算好的藥量飼喂含1%水蛭粉的高脂飼料，待食完后給與高脂飼料補(bǔ)充至規(guī)定食量。每10d稱體重1次調(diào)整含藥高脂飼料的飼喂量。

1.3 體重及生化指標(biāo)的測定

實(shí)驗開始前、實(shí)驗第20d和第40d進(jìn)行體重的測定以及心臟采血。稱重和采血前空腹12h，自由飲水。采集的血樣室溫靜置至血清析出后，3000r/min離心10min，采集血清。將血清樣本送至吉林省吉林市化工總醫(yī)院進(jìn)行含量檢測，檢測指標(biāo)包括血清總膽固醇（TC）、甘油三脂（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDLC）。低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）含量由F公式[12]LDL-C=TC-（HDL-C）-TG/2.2計算得出。

1.4 數(shù)據(jù)處理

各組實(shí)驗數(shù)據(jù)采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示，用SPSS 17.0軟件對所有數(shù)據(jù)利用Oneway-ANOVA程序進(jìn)行方差分析和Duncan多重比較。

表1 實(shí)驗設(shè)計方案Table 1 Experiment design

表2 不同時期各組體重（kg）Table 2 Weight in different groups of different time（kg）

表3 不同時期各組TC水平（mmol/L）Table 3 Serum TC in different groups of different time（mmol/L）

2 結(jié)果與分析

2.1 各組動物體重水平

不同時期各組兔子的體重變化見表2。實(shí)驗前，各組間體重差異不顯著（p＞0.05）；第20d，高脂組顯著低于其他組（p＜0.01），推測是由于初期兔對高脂飼料的采食量少，從而導(dǎo)致體重增長緩慢，高、中、低劑量組間差異不顯著（p＞0.05）；第40d，各組間比較，差異不顯著（p＞0.05），因此可以說明，兔對高脂飼料的適應(yīng)性隨著時間不斷增強(qiáng)，采食逐漸恢復(fù)正常水平；實(shí)驗結(jié)束時，各組兔體重均增加，可以推測出飼料中添加的水蛭粉對兔體重的增加無不良影響。

2.2 水蛭粉對血清中血脂水平的影響

2.2.1 血清總膽固醇（TC）水平變化 不同時期各組TC水平變化見表3。實(shí)驗前，各組TC含量差異均不顯著（p＞0.05）；第20d，各組間差異均不顯著（p＞0.05），但高脂組和高、中、低劑量組均高于空白組，高、中、低劑量組均低于高脂組，可以說明高脂飼料的喂養(yǎng)使兔的TC含量逐步上升，添加水蛭粉的各組TC含量上升的速度與高脂組相比相對較慢；第40d，高脂組顯著高于其他組（p＜0.01），空白組和高、中、低劑量組間差異不顯著（p＞0.05），結(jié)果表明，實(shí)驗結(jié)束時，飼喂高脂飼料可使兔血清TC含量明顯升高，水蛭粉能明顯抑制血清TC升高，其中低劑量組效果最明顯。

2.2.2 血清甘油三酯（TG）水平變化 不同時期各組TG水平變化見表4。實(shí)驗前，各組TG含量差異均不顯著（p＞0.05）；第20d，高脂組和高、中、低劑量組均高于空白組，說明兔食用高脂飼料會使血清TG升高，各組間差異均不顯著（p＞0.05），推測在此階段，水蛭粉對TG的影響不明顯；第40d，高脂組顯著高于其他組（p＜0.01），說明高脂飼料的喂養(yǎng)使兔血清TG顯著升高，空白組和高、中、低劑量組間差異不顯著（p＞0.05），并且高、中、低劑量組TG趨于正常水平，推測40d的飼喂過程中，水蛭粉需經(jīng)過一段時間的才發(fā)揮出抑制TG水平升高的效果，并且低劑量的水蛭粉抑制TG水平上升的效果最佳。

2.2.3 血清高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）水平變化 不同時期各組HDL-C水平變化見表5。實(shí)驗前，各組HDL-C水平差異均不顯著（p＞0.05）；第20d，高脂組高于空白組和高、低劑量組，低于中劑量組，組間差異均不顯著（p＞0.05），說明水蛭粉對血清中HDL-C水平有一定的影響，但此階段效果不明顯；第40d，高劑量組高于其他各組，與空白組和低劑量組差異顯著（p＜0.05），高脂組高于空白組，但差異不顯著（p＞0.05）。結(jié)果表明，本實(shí)驗高脂飼料的喂養(yǎng)對兔血清HDL-C水平的影響不顯著，推測水蛭粉有升高血清HDL-C的功效。

2.2.4 血清低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）水平變化 不同時期各組LDL-C水平變化見表6。實(shí)驗前，各組LDL-C水平差異均不顯著（p＞0.05）；第20d，高脂組高于其他各組，但彼此之間差異均不顯著（p＞0.05），高、中、低劑量組LDL-C升高趨勢較高脂組緩慢，說明高脂飼料的飼喂能使兔血清LDL-C水平升高，水蛭粉能減緩其上升趨勢；第40d，高脂組顯著高于空白組和高、中、低劑量組（p＜0.01），高、中、低劑量組低于空白組，但組間差異不顯著（p＞0.05），結(jié)果表明，高脂飼料的喂養(yǎng)使兔血清LDL-C水平明顯升高，水蛭粉有抑制血清LDL-C升高且使其趨于正常水平的功效。

3 討論

目前，人們生活水平的提高使得在日常生活中出現(xiàn)飲食結(jié)構(gòu)不均衡的現(xiàn)象，其中高脂飲食最為常見。當(dāng)人的飲食狀況長期維持在高脂飲食，會使血液中TC、TG含量過高而形成高脂血癥，多余的脂質(zhì)附著在血管內(nèi)壁上不斷被氧化形成脂質(zhì)過氧化物，進(jìn)而在血管中堆積，從而極易導(dǎo)致動脈粥樣硬化，冠心病、腦血栓等心腦血管疾病大都與動脈動脈粥樣硬化有關(guān)[13]。

表4 不同時期各組TG水平（mmol/L）Table 4 Serum TG in different groups of different time（mmol/L）

表5 不同時期各組HDL-C水平（mmol/L）Table 5 Serum HDL-C in different groups of different time（mmol/L）

表6 不同時期各組LDL-C水平（mmol/L）Table 6 Serum LDL-C in different groups of different time（mmol/L）

倪鴻昌等[14]報道，高脂血癥是導(dǎo)致脂肪肝的重要因素之一，同時脂肪肝患者血中TC和TG含量明顯高于非脂肪肝患者，且以TG增高為主要特征。曹斌等[15]報道，高脂血癥將導(dǎo)致動脈粥樣硬化，是冠心病、腦卒中的危險因素，并且認(rèn)為TG、LDL-C與其危險性有協(xié)同作用。王志輝等[16]報道，TC、TG的升高、HDL-C的降低都參與了動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展，血脂異常（TC、TG、LDL-C的升高，HDL-C的降低）是其發(fā)病的始動性生物化學(xué)變化。李鳳文等[17]報道，LDL-C易被氧化成為氧化修飾的低密度脂蛋白（OXLDL），OX-LDL的啟動和放大過程，會引發(fā)單核細(xì)胞黏附在血管內(nèi)皮細(xì)胞上，從而改變內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能，并誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)多種粘附分子，促進(jìn)動脈粥樣硬化的發(fā)生與發(fā)展，因此OX-LDL是促進(jìn)動脈粥樣硬化的重要危險因素。并且有研究指出HDL-C是動脈粥樣硬化性心腦血管疾病的保護(hù)因子[18]。因此，本實(shí)驗通過檢測血清中TC、TG、HDL-C和LDL-C含量來反映兔的血脂狀況，觀察高脂飲食以及水蛭粉對兔血脂水平的影響。

李鳳文[17]、范亞明等[19]的實(shí)驗中，模型組TC、TG和LDL-C水平與空白組比較顯著升高，與本實(shí)驗高脂組結(jié)果一致，但其HDL-C水平降低（p＞0.05），本實(shí)驗高脂組HDL-C水平升高（p＞0.05），推測原因可能是由于高脂飼料成分和實(shí)驗時間不同造成。李鳳文等[17]利用水蛭治療動脈粥樣硬化模型兔4周，治療量為每日0.57g/kg，血清TC、TG、LDL-C水平降低，HDL-C水平升高；范亞明等[19]在研究水蛭及水蛭素對兔動脈粥樣硬化的影響時，一組實(shí)驗兔飼喂每日添加2g水蛭粉的膽固醇飼料，實(shí)驗3個月時，血清TC、TG、LDL-C水平降低，HDL-C水平升高。兩者的實(shí)驗所添加的水蛭粉含量與本實(shí)驗高、中、低劑量相比均較高，但血脂水平變化趨勢一致，說明本實(shí)驗在高脂飲食的同時添加較低劑量的水蛭粉同樣可以改善體內(nèi)血脂狀況。對于抑制血脂升高的保健類藥物的研究也有報道，王蕾等[20]用番茄紅素調(diào)節(jié)動脈粥樣硬化兔血脂，實(shí)驗結(jié)果說明番茄紅素可以明顯降低TC和TG水平，對HDL-C和LDL-C水平影響甚微；馬亞兵等[21]利用葡萄籽原花青素對兔高脂血狀況進(jìn)行調(diào)節(jié)，發(fā)現(xiàn)其可明顯降低TC、TG和LDL-C水平，對HDL-C水平影響很小。本實(shí)驗結(jié)果證明水蛭粉對TC、TG、HDL-C和LDL-C水平都具有明顯的影響，并且水蛭粉可直接應(yīng)用到藥品中而不需要進(jìn)一步的提取精化，從而可降低開發(fā)成本，因此水蛭作為保健藥品開發(fā)利用與番茄紅素和葡萄籽原花青素相比具有明顯的優(yōu)勢。

本實(shí)驗發(fā)現(xiàn)水蛭粉能顯著降低高脂飲食兔血清中TC、TG、LDL-C的含量，升高HDL-C含量，減少脂類物質(zhì)在血管內(nèi)的沉積，增加脂質(zhì)的逆轉(zhuǎn)運(yùn)，從而抑制血脂水平的升高，起到預(yù)防保健作用，并且水蛭粉低劑量組（0.0375g/kg·d）的降脂效果最佳。

4 結(jié)論

從本實(shí)驗可以看出，高脂飲食可以使兔血脂水平發(fā)生紊亂，在高脂飲食中添加不同劑量水蛭粉均能夠改善高脂飲食兔的血脂水平，且不同劑量水蛭粉降血脂水平有一定差異，綜合考慮，最佳劑量為低劑量（0.0375g/kg）。水蛭粉作為保健品用來預(yù)防高脂血癥的相關(guān)機(jī)理，尚需進(jìn)行深入的研究與探索。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

[2]馮光軍，朱正光，余傳林，等.水蛭乙醇提取物體外抗凝血活性研究[J].中藥材，2007，30（8）：909-911.

[3]劉京生，苗智慧，董力，等.水蛭抗腫瘤作用的實(shí)驗研究[J].時珍國醫(yī)國藥，2001，12（10）：885.

[4]李建平，張躍文，張躍武，等.水蛭通栓治療前列腺炎的實(shí)驗研究[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報，2008，26（5）：27－28．

[5]賈彥，牛英才，張英博，等.天然水蛭素對實(shí)驗性肝纖維化大鼠肝臟結(jié)締組織生長因子mRNA表達(dá)的影響[J].時珍國醫(yī)國藥，2009，20（1）：95－97.

[6]甄洪亮，漢京彥，王家安.生水蛭膠囊對缺血性中風(fēng)患者脂質(zhì)代謝的影響[J].中國中醫(yī)急癥，2007，16（8）：914-916.

[7]邱全，董少龍，林英輝，等.水蛭膠囊治療腦動脈硬化癥療效觀察[J].廣西中醫(yī)藥，2004，27（3）：14-16.

[8]唐莉，段巧虹，范平生.水蛭治療惡性腫瘤高凝狀態(tài)臨床研究[J].中醫(yī)藥臨床雜志，2012，24（9）：871-872.

[9]劉盛娟，舒惠荃，張驍.水蛭治療慢性腎臟病的應(yīng)用[J].吉林中醫(yī)藥，2012，32（9）：924-925.

[10]曾凡軍.中藥水蛭粉對心絞痛和腦損傷的臨床療效介紹[J].中國民康醫(yī)學(xué)，2012，24（2）：231-232.

[11]李漢平.水蛭粉治療高脂血癥62例臨床分析[J].交通醫(yī)學(xué)，2000，14（3）：320.

[12]祝文彩，叢輝，王旭東，等.間接計算法與勻相法直接測定LDL-C的比較研究[J].現(xiàn)代檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2006，21（3）：31-33.

[13]宋鴿，包海鷹.金頂側(cè)耳對飲食性高脂血癥小鼠的降血脂作用[J].食用菌學(xué)報，2013，20（1）：84-88.

[14]倪鴻昌，李俊，金涌，等.大鼠實(shí)驗性高脂血癥和高脂血癥性脂肪肝模型研究[J].中國藥理學(xué)通報，2004，20（6）：703-706.

[15]曹斌，周維海，韋錦斌，等.菲牛蛭對實(shí)驗性高脂血癥血脂及血液流變學(xué)的影響[J].廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2010，27（2）：198-200.

[16]王志輝，劉宏，王永久.調(diào)脂益壽膠囊治療兔高脂血癥和動脈粥樣硬化的實(shí)驗研究[J].中國誤診學(xué)雜志，2010，10（22）：5296-5298.

[17]李鳳文，劉曉穎，張立石，等.水蛭及其復(fù)方對實(shí)驗性動脈粥樣硬化家兔主動脈內(nèi)皮素基因表達(dá)的影響[J].中醫(yī)雜志，1999，40（1）：50-51.

[18]Shefer S，Nguyen LB，Salen G，et al.Differing effects of cholesterol and taurocholate on steady state hepatic HMG-CoA reductase and cholesterol 7 alpha-hydroxylase activities and mRNA levels in the rat[J].J Lipid Res，1992，33（8）：1193-1200.

[19]范亞明，張穎，王綠亞，等.水蛭和水蛭素對實(shí)驗性動脈粥樣硬化的影響及其機(jī)理研究[J].中國動脈硬化雜志，1995，3，（2，會議專輯）：157-158.

[20]王蕾，唐湘宇，郭芳，等.番茄紅素對動脈粥樣硬化兔血脂的調(diào)節(jié)作用[J].中國藥理學(xué)通報，2005，21（7）：860-863.

[21]馬亞兵，高海青，由倍安，等.葡萄籽原花青素對動脈粥樣硬化兔血脂的調(diào)節(jié)作用[J].中國藥理學(xué)通報，2004，20（3）：325-329.

Effect of adding different dosage Hirudo nipponica on the level of blood lipids in rabbits fed with high-fat diet

LUO Zhe-rong1，SU Shuang-liang2，REN Hui-jun1，WANG Hui2，ZHAO Zhi-zhuang2，LENG Xue-bing3，BAI Xiu-juan2，*
（1.College of Life Science，Northeast Agricultural University，Harbin 150030，China；2.College of Animal Science and Technology，Northeast Agricultural University，Harbin 150030，China；3.College of Chinese Medicinal Materials，Jilin Agricultural University，Changchun 130118，China）

Objective：To study the effects of different dosage Hirudo nipponica on the level of blood lipids in rabbits fed with high-fat diet.Methods：150 male meat rabbits were selected and randomly divided into five groups，control group，high serum lipid group and three different dosage Hirudo groups.Rabbits in Hirudo groups were daily fed with Hirudo（0.15，0.075，0.0375g/kg）for 40 days.The blood samples were drawn from heart just before the experiment and the 20th day，40th day of the experiment.The blood lipids level in serum included total cholesterol（TC），triglyceride（TG），high density lipoprotein（HDL-C），low density lipoprotein（LDL-C）.Results：The body weight of rabbits in each groups was increasing during the test period，but no significant was observed between each groups（p＞0.05）.The blood lipids in high serum lipid group was abnormal，compared with control group，the levels of TC，TG，LDL-C in high serum lipid group were significantly increased（p＜0.01），the level of HDL-C was higher（p＞0.05）.Compared with high serum lipid group，the level of TC，TG，LDL-C in three Hirudo groups were significant decreased（p＜0.01），while no significant differences（p＞0.05）were observed between the three Hirudo groups.Compared with high serum lipid group，the level of HDL-C in Hirudo group had no significant differences（p＞0.05）.Conclusion：Hirudo could regulate the blood lipid and prevent the formation of hyperlipidmia，and the lower level Hirudo（0.0375g/kg）could significantly decrease blood lipids.

Hirudo nipponica；high-fat diet；blood lipids；rabbit

TS201.1

A

1002-0306（2014）14-0359-04

10.13386/j.issn1002-0306.2014.14.071

2013－11－25 *通訊聯(lián)系人

羅哲容（1988-），女，碩士研究生，研究方向：動物學(xué)經(jīng)濟(jì)動物方向。