張海軍 黃民鳳, 2 羅智勇 鄭雪平 夏志蘭,2**

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十個(gè)杏鮑菇菌株栽培試驗(yàn)與子實(shí)體的營(yíng)養(yǎng)成分分析*

張海軍1，2黃民鳳1, 2羅智勇1鄭雪平3夏志蘭1,2**

（1.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝園林學(xué)院，長(zhǎng)沙 410128；2.國(guó)家中醫(yī)藥管理局亞健康干預(yù)技術(shù)實(shí)驗(yàn)室，長(zhǎng)沙 410128；3.北京市正興隆生物科技有限公司，北京 102211）

通過(guò)對(duì)10個(gè)杏鮑菇菌株進(jìn)行出菇試驗(yàn)，觀察生長(zhǎng)情況、農(nóng)藝性狀，測(cè)算生物轉(zhuǎn)化率和營(yíng)養(yǎng)成分含量，篩選出優(yōu)勢(shì)菌株3號(hào)“佳豐”和4號(hào)“ZX00-1”，這兩個(gè)菌株菌絲長(zhǎng)勢(shì)、生物轉(zhuǎn)化率均優(yōu)于其他菌株，且營(yíng)養(yǎng)成分含量高，具有較高藥用價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。

杏鮑菇；農(nóng)藝性狀；生物轉(zhuǎn)化率；生物學(xué)特征；營(yíng)養(yǎng)成分

杏鮑菇（）又名刺芹側(cè)耳，隸屬傘菌目、側(cè)耳科、側(cè)耳屬[1]。中醫(yī)認(rèn)為，杏鮑菇有益氣、殺蟲(chóng)和美容作用，可促進(jìn)人體對(duì)脂類物質(zhì)的消化吸收和膽固醇的溶解，對(duì)腫瘤也有一定的預(yù)防和抑制作用[2]。杏鮑菇含有利尿、健脾胃、助消化的酶類，有強(qiáng)身、滋補(bǔ)、增強(qiáng)免疫力的功能[3]。其含有的大量寡糖，可與胃腸中的雙歧桿菌一起作用，具有很好的促進(jìn)消化、吸收的功能，是老年人和心血管疾病與肥胖癥患者理想的營(yíng)養(yǎng)保健食品。

杏鮑菇質(zhì)地脆嫩，營(yíng)養(yǎng)豐富，與香菇、銀耳和黑木耳相比，蛋白質(zhì)含量和灰分含量較高，甘露醇、游離氨基酸含量豐富，而脂肪含量和總糖含量較低[4]。林衍銓等人分析杏鮑菇子實(shí)體蛋白質(zhì)的含量、氨基酸組成，得出杏鮑菇含有17種氨基酸（未測(cè)色氨酸），其中7種是人體必需氨基酸，占氨基酸總量的42%以上，符合世界衛(wèi)生組織（WHO）提出的蛋白模式必需氨基酸（E％）總量應(yīng)達(dá)到40％左右的要求，具有很高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值[5]。

本試驗(yàn)通過(guò)對(duì)收集的10個(gè)杏鮑菇菌株進(jìn)行菌絲培養(yǎng)，觀察測(cè)定各菌株的菌絲長(zhǎng)勢(shì)及所做的出菇實(shí)驗(yàn)，分析各菌株子實(shí)體的生物轉(zhuǎn)化率、營(yíng)養(yǎng)成分的含量，挑選出最具藥用和生產(chǎn)價(jià)值的優(yōu)勢(shì)杏鮑菇菌株。

1 材料和方法

1.1 菌株來(lái)源 10個(gè)杏鮑菇菌株（表1）均由湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)食用菌研究所和國(guó)家中醫(yī)藥管理局亞健康干預(yù)技術(shù)實(shí)驗(yàn)室提供。

1.2 培養(yǎng)基配方 母種PDA培養(yǎng)基（加富）：葡萄糖20 g，馬鈴薯200 g，瓊脂粉20 g，蛋白胨2 g，MgSO40.5 g，KH2PO41 g，蒸餾水1 000 mL，pH 6.5～7.0。液體菌種培養(yǎng)基：葡萄糖20 g。馬鈴薯200 g，蛋白胨2 g，MgSO40.5 g，KH2PO41 g，蒸餾水1 000 mL，pH 6.5～7.0。栽培種培養(yǎng)基：木屑30%，玉米芯30%，麥麩18%，棉籽殼14%，豆粕6%，輕質(zhì)碳酸鈣1%，石灰1%，含水量62%～63%，pH 6～7。

1.3 主要儀器設(shè)備 UV-1800分光光度儀、冰箱、電熱爐、搖床、電子天平、恒溫水浴鍋、YXQS46280型高壓蒸汽滅菌鍋、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器、凱氏定氮儀、超凈工作臺(tái)、低溫控制空調(diào)、增濕儀、離心機(jī)、干燥箱。

1.4 試驗(yàn)方法

（1）菌種擴(kuò)繁。對(duì)杏鮑菇菌種進(jìn)行擴(kuò)繁，將擴(kuò)繁的試管種放入20～25 ℃培養(yǎng)室中黑暗培養(yǎng)，空氣相對(duì)濕度控制在60%左右。每天觀察菌絲生長(zhǎng)狀態(tài)，記錄其生長(zhǎng)速率。

（2）接種與菌絲培養(yǎng)。按照栽培種培養(yǎng)基配方制備菌瓶，于121 ℃高壓蒸汽滅菌3 h。菌料溫度降到26 ℃以下時(shí)在超凈工作臺(tái)接種，將不同菌株的液體菌種依次轉(zhuǎn)接到菌瓶中。平均每個(gè)菌瓶裝料870 g，每個(gè)菌株30瓶重復(fù)?？刂婆囵B(yǎng)室溫度在20～23 ℃，濕度在60%～66%，黑暗培養(yǎng)。2～3天后開(kāi)始檢查菌絲生長(zhǎng)情況，及時(shí)清理污染的菌瓶。當(dāng)菌絲封住料面并吃料2 cm左右時(shí)，每3天檢查1次，并進(jìn)行通風(fēng)換氣，空氣濕度低于50%時(shí)，通過(guò)增濕儀補(bǔ)充空氣濕度。測(cè)量記錄各杏鮑菇菌株的菌絲生長(zhǎng)速率、生長(zhǎng)勢(shì)、污染率及滿瓶時(shí)間。

（3）出菇管理及采收。菌絲滿瓶后，經(jīng)6～10天后熟再進(jìn)行搔菌，搔菌后控制溫度18～20 ℃，濕度80%～85%。當(dāng)菌絲恢復(fù)生長(zhǎng)出現(xiàn)透明或黃色水珠時(shí)，表明已達(dá)到生理成熟，要進(jìn)行溫差、光照刺激處理。控制溫度12～15 ℃，光照500～800 lx，濕度85％～90％，CO2濃度1 000 mL/m3（ppm）以下，約7～10天形成菇蕾。菇蕾長(zhǎng)3 cm左右時(shí)進(jìn)行疏蕾，一般每瓶留1～2個(gè)菇蕾。疏蕾后控制溫度15～18 ℃，空氣相對(duì)濕度85%～90%，CO2濃度2 000～4 000 mL/m3。每天通風(fēng)情況根據(jù)菇型來(lái)決定，試驗(yàn)只觀察記錄各菌株第一潮菇從現(xiàn)蕾到采摘的相關(guān)情況。從接種到第一潮菇采收需50～60天。采收以菌蓋基本展開(kāi)且菌蓋邊緣不上翹、菌蓋中心不下凹為標(biāo)準(zhǔn)。

（4）計(jì)算生物轉(zhuǎn)化率。子實(shí)體采收后，立即稱量鮮重，每個(gè)菌株30袋，計(jì)算其平均值。生物轉(zhuǎn)化率/% = 子實(shí)體鮮重/培養(yǎng)料濕重×100。

（5）營(yíng)養(yǎng)成分含量測(cè)定。粗多糖含量測(cè)定：把杏鮑菇子實(shí)體切片，在70 ℃下烘12 h至恒重，粉碎過(guò)40目篩，得子實(shí)體干粉。采用熱水浸提、乙醇沉淀法提取多糖：稱取子實(shí)體干粉1 g，按照料液比1∶20加入蒸餾水，90 ℃恒溫水浴浸提3 h，3 000 r/min離心15 min，合并上清液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器對(duì)上清液進(jìn)行蒸發(fā)濃縮至原體積的1/4，加入3倍體積的90%乙醇沉淀24 h，6 000 r/min離心5 min，得白色沉淀物，真空干燥得到杏鮑菇粗多糖粉末，重復(fù)3次。粗多糖得率/% = 多糖總重/杏鮑菇子實(shí)體干重×100。

游離氨基酸含量測(cè)定：把杏鮑菇子實(shí)體切成碎片，在70 ℃下烘12 h至恒重，粉碎過(guò)40目篩，得子實(shí)體干粉。加入5 mL乙酸鋅溶液和5 mL亞鐵氰化鉀溶液，搖勻，定容至刻度，靜止沉淀后，過(guò)濾，濾液備用。分別精確移取過(guò)濾后濾液1.0 mL注入25 mL的容量瓶中，加入0.5 mL的pH 8.0的索倫遜緩沖液和0.5 mL的2%茚三酮溶液，在沸水浴中加熱15 min，靜置10 min，冷卻至室溫后，用蒸餾水定容到25 mL，混勻。以空白試劑做對(duì)照，于波長(zhǎng)570 nm處測(cè)定吸光度。

蛋白質(zhì)含量測(cè)定：把杏鮑菇子實(shí)體切成碎片，在70 ℃下烘12 h至恒重，粉碎過(guò)40目篩，得子實(shí)體干粉。準(zhǔn)確稱取已干燥的子實(shí)體試樣0.2 g（精確至0.001 g）于消解罐中，加入濃硫酸5 mL和雙氧水1.5 mL，輕搖，靜置2 min旋緊密封蓋，于0.6 MPa壓力下消解3 min，同時(shí)做空白試驗(yàn)。消解完畢，取出消解罐冷卻后，將消解液置于50 mL容量瓶中，定容，搖勻。取10 mL經(jīng)消化的樣品溶液進(jìn)行蒸餾，加入10 mL 40%的氫氧化鈉溶液，使蒸餾器內(nèi)的溶液變?yōu)樽厣珵橹埂ｐs出液用0.100 mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，吸收液顏色由藍(lán)色變?yōu)樽霞t色為滴定終點(diǎn)，計(jì)算蛋白質(zhì)含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 菌絲生長(zhǎng)速率 采用劃線法，每5天測(cè)量一次菌絲長(zhǎng)度，以總長(zhǎng)度除以天數(shù)，為菌絲生長(zhǎng)速率，重復(fù)3次，取平均值。

從表1可以看出，10號(hào)菌株的菌絲長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)，其次為菌株2、3、4、5、6、9號(hào)；菌絲滿瓶時(shí)間4、9、10號(hào)菌株較快，為24天。綜合分析，10號(hào)菌株菌絲長(zhǎng)勢(shì)較好。

表1 各杏鮑菇菌株的菌絲生長(zhǎng)情況及子實(shí)體生物轉(zhuǎn)化率

注：＋＋＋＋表示菌絲體生長(zhǎng)勢(shì)最強(qiáng)，＋＋＋表示菌絲體生長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)，＋＋表示菌絲體生長(zhǎng)勢(shì)一般。

2.2 生物轉(zhuǎn)化率 菌株1、3、4、8、10號(hào)的生物轉(zhuǎn)化率高，達(dá)到40%以上（表1）。特別是3號(hào)，轉(zhuǎn)化率高達(dá)49.4%，可作為優(yōu)質(zhì)杏鮑菇菌株，投入大規(guī)模生產(chǎn)，以獲得較大效益。

2.3 營(yíng)養(yǎng)成分含量 各菌株子實(shí)體營(yíng)養(yǎng)成分含量分析結(jié)果（表2）表明，3、4號(hào)菌株的粗多糖、游離氨基酸和蛋白質(zhì)含量較高，其次是菌株1、8、10號(hào)。綜合分析，4號(hào)菌株子實(shí)體的營(yíng)養(yǎng)成分含量較高，每100 g干品含粗多糖5.002 g，游離氨基酸2.758 g，蛋白質(zhì)21.713 g，最適合作為藥用型菌株栽培。

表2 各杏鮑菇菌株子實(shí)體的營(yíng)養(yǎng)成分含量（g）

3 小結(jié)與討論

通過(guò)比較10個(gè)杏鮑菇菌株的菌絲長(zhǎng)勢(shì)、子實(shí)體農(nóng)藝性狀及營(yíng)養(yǎng)成分，發(fā)現(xiàn)3號(hào)和4號(hào)的長(zhǎng)勢(shì)好，生物轉(zhuǎn)化率高，粗多糖、游離氨基酸以及蛋白質(zhì)含量高。而兩者中，4號(hào)的菌絲長(zhǎng)勢(shì)和營(yíng)養(yǎng)成分優(yōu)于3號(hào)，但產(chǎn)量次于3號(hào)。綜合考慮，3號(hào)杏鮑菇菌株較適合用于工廠化生產(chǎn)，經(jīng)濟(jì)效益高；4號(hào)菌株藥用價(jià)值高、品質(zhì)好。

為進(jìn)一步提升杏鮑菇品質(zhì)、縮短生產(chǎn)周期、提高生產(chǎn)效率，今后的研究重點(diǎn)應(yīng)集中在以下幾個(gè)方面：①利用分子生物學(xué)和微生物學(xué)手段，通過(guò)細(xì)胞和基因研究，探索杏鮑菇菌絲扭結(jié)成菇、有性孢子兩兩融合的過(guò)程等關(guān)鍵環(huán)節(jié)，全面了解杏鮑菇的生理生長(zhǎng)過(guò)程；②收集更多國(guó)內(nèi)外的主栽杏鮑菇菌株及野生菌株，開(kāi)發(fā)相關(guān)菌種SSR、AFLP、SNP等分子標(biāo)記技術(shù)，進(jìn)行 DNA指紋圖譜分析，建立多個(gè)遺傳背景差異顯著且具備優(yōu)良品質(zhì)的核心種質(zhì)資源庫(kù)，完善杏鮑菇新品種選育理論與技術(shù)體系；③研究杏鮑菇不同生長(zhǎng)時(shí)期對(duì)環(huán)境要求變化的規(guī)律，為大規(guī)模工廠化生產(chǎn)提供參考依據(jù)。

[1] 黃年來(lái). 一種市場(chǎng)前景看好的珍稀食用菌一杏鮑菇[J].中國(guó)食用菌, 1998, 17(6): 3～4.

[2] 郭美英. 杏鮑菇的特性與栽培技術(shù)研究[J]．食用菌，1998, 20(5): 11～12.

[3] 陳士瑜．側(cè)耳類栽培新技術(shù)[M]．上海: 上?？茖W(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社, 2005: 19~20.

[4] MO H Z, XU Z Q, YAN M C, et a1．biological activities analysis and antibacterial activity of the indigenous pleurotus eryngii [J]．Agro Food Industry Hi Tech, 2005, 16(6): 16～18.

[5] 馬桂珍, 周超, 王增池. 對(duì)食用菌菌種業(yè)健康發(fā)展的思考[J]. 北方園藝, 2010 (3): 213～215.

杏鮑菇新品種選育及工廠化高效生產(chǎn)關(guān)鍵技術(shù)集成與示范。項(xiàng)目編號(hào)： 2012BAD16B022

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2095-0934（2014）01-038-03