程瑞斌 湖北省咸寧市中心醫(yī)院檢驗科 437100

血細(xì)胞分析儀具有快速、準(zhǔn)確、重復(fù)性好等特點，已被廣泛運用在臨床常規(guī)檢驗中，不僅能夠提高臨床工作效率及檢驗質(zhì)量，同時為臨床提供更多的參數(shù)和診斷指標(biāo)，更好地為臨床服務(wù)。但由于其自身檢測原理的限制，在干擾因素同時存在的情況下，導(dǎo)致檢測結(jié)果出現(xiàn)誤差時有發(fā)生，造成誤診或提供不合理的治療。為了避免這些因素對檢測結(jié)果造成影響，現(xiàn)對工作中常出現(xiàn)的影響因素進行綜合分析，以便采用相應(yīng)的處理措施保證血液分析儀檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

1 影響檢測結(jié)果的因素分析

1.1 標(biāo)本因素

1.1.1 標(biāo)本的采集和運輸。不規(guī)范的標(biāo)本采集和運輸均有可能導(dǎo)致檢驗結(jié)果不準(zhǔn)確。如是否為真空靜脈采血，采血是否順利，混勻是否及時，有沒有從進行靜脈給藥、補液、輸血的肢體末端采血；有沒有及時送檢，送檢時樣本唯一性標(biāo)志與患者信息是否一致，運輸過程中有沒有產(chǎn)生劇烈震動等。

1.1.2 血液與抗凝劑的比例?？鼓齽┡c血液的比例為1.5～2.2mg的EDTA－K2抗凝1ml的全血。如果血量過多抗凝不充分，則會出現(xiàn)不同程度的小凝塊，影響PLT和WBC的計數(shù)，同時易造成儀器的半堵孔，若未及時發(fā)現(xiàn)處理，影響后面樣本檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性；血量過少，易使細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變，分類結(jié)果不準(zhǔn)確。

1.1.3 標(biāo)本的性質(zhì)。如患冷凝集素綜合征的患者，血液中冷凝集素引起RBC在室溫條件下聚集，使RBC數(shù)減少，HCT降低，造成MCHC假性增高；高脂血癥患者的乳糜血標(biāo)本可影響透光度，高膽紅素血癥患者標(biāo)本由于膽紅素測定波長與經(jīng)溶血劑作用后的HGB測定波長較為接近，二者均可造成HGB假性增高；白血病患者的血液標(biāo)本中白細(xì)胞的膜較脆而易被破壞，導(dǎo)致WBC計數(shù)降低，這些細(xì)胞碎片也會影響分類的結(jié)果；冷球蛋白增加疾病如骨髓瘤、癌癥、白血病、巨球蛋白血癥、糖尿病等均可導(dǎo)致WBC計數(shù)假性增高。

1.1.4 抗凝劑、藥物等因素。如EDTA抗凝劑可使少數(shù)人的血小板發(fā)生凝集，從而導(dǎo)致血細(xì)胞分析儀測定的血小板數(shù)值假性減少，即EDTA依賴性假性血小板減少癥。臨床上用ATP后血小板容易發(fā)生聚集，因ATP分解，產(chǎn)生大量ADP，而ADP是一種血小板誘導(dǎo)劑，易使血小板發(fā)生聚集可影響PLT計數(shù)［1］；輸液加入脂肪乳的患者血小板會假性增高；輸入右旋糖酐，血液分析時可產(chǎn)生假性凝集，造成血小板假性降低。

1.2 儀器因素

1.2.1 儀器的計數(shù)原理。目前大多數(shù)血細(xì)胞分析儀檢測原理采用電阻抗法，根據(jù)細(xì)胞體積大小，通過微孔產(chǎn)生脈沖數(shù)計數(shù)的，儀器只識別顆粒的大小而不能識別顆粒的性質(zhì)，當(dāng)其體積高于或低于儀器設(shè)定的閾值時，往往會造成誤判。如有核紅細(xì)胞、大血小板影響WBC計數(shù)與分類，細(xì)胞碎片、小紅細(xì)胞、大血小板、血小板凝集可影響PLT計數(shù)，極少數(shù)患者RBC能抵抗溶血劑的破壞，而使WBC假性增高。

1.2.2 儀器的分類原理。血細(xì)胞分析儀對白細(xì)胞分類與常規(guī)的涂片染色分類有本質(zhì)不同，儀器只是依靠檢測細(xì)胞幾種物理特性而間接地加以計數(shù)和分類，而常規(guī)分類除細(xì)胞大小外，要根據(jù)細(xì)胞染色反應(yīng)，核的形態(tài)及染色質(zhì)的著色情況，胞質(zhì)的著色及顆粒才能確定為某種細(xì)胞。儀器不能準(zhǔn)確識別原始細(xì)胞、幼稚細(xì)胞、未成熟粒細(xì)胞、不典型淋巴細(xì)胞、NRBC等，僅作某些報警提示。在有些情況，特別是病理條件下，儀器測定結(jié)果并不可靠或難以確定，還需在顯微鏡下行復(fù)檢。1.2.3 儀器的工作環(huán)境。血細(xì)胞分析儀是一種精密的電子儀器，目前大多數(shù)儀器細(xì)胞計數(shù)設(shè)計原理為電阻抗法。采用電阻抗法進行細(xì)胞計數(shù)易受電源或其他射頻的干擾，特別是易引起血小板計數(shù)的假性增高。另外室內(nèi)溫度和濕度不符合要求對儀器檢測結(jié)果也會產(chǎn)生較大影響。

1.2.4 儀器的日常維護。規(guī)范的日常保養(yǎng)和維護是保證儀器正常運行的前提，若儀器管路不清潔可導(dǎo)致空白計數(shù)本底增高。

1.2.5 儀器的性能驗證。血液分析儀使用一段時間后測定結(jié)果往往會發(fā)生漂移，若不定期校準(zhǔn)，檢測結(jié)果會出現(xiàn)較大的偏差。

1.3 檢驗者因素 嚴(yán)格的崗前培訓(xùn)、規(guī)范的操作及應(yīng)有的責(zé)任心是保證檢測結(jié)果準(zhǔn)確性的重要條件。檢驗工作者不按正確的方法操作，缺乏經(jīng)驗或不重視儀器報警信息的復(fù)檢等都可能會給臨床提供錯誤的信息。

2 處理措施

由于各種因素的干擾，儀器檢測結(jié)果可能會出現(xiàn)各種異常情況，如檢測值過高或過低，儀器報告各參數(shù)間出現(xiàn)矛盾，結(jié)果出現(xiàn)警示符號，直方圖或散點圖出現(xiàn)與診斷明顯不符等。檢驗工作者先要仔細(xì)閱讀分析儀給出的參數(shù)、儀器報警提示、直方圖或散點圖的變化，對可能存在的血液學(xué)異?；蚣夹g(shù)性影響因素等進行初步判斷，然后結(jié)合本科室的復(fù)檢規(guī)則、標(biāo)本外觀及患者的臨床情況來決定采取何種處理措施。2.1 觀察標(biāo)本 檢查樣本的“唯一性標(biāo)志”，避免張冠李戴；若血液與抗凝劑比例不恰當(dāng)、標(biāo)本溶血、存在凝集等干擾，有必要重新采血再行檢測；高脂血癥、高膽紅素血癥患者標(biāo)本，應(yīng)離心用等量稀釋液置換血漿后混勻再行測定；若標(biāo)本出現(xiàn)冷凝集溫浴后混勻再行檢測。

2.2 重新檢測 若樣本外觀正常，重新檢測，可以觀察儀器的性能，如結(jié)果的重復(fù)性是否符合要求，有無突發(fā)因素如噪音、電壓不穩(wěn)等的干擾，另外也可排除操作不規(guī)范引起的結(jié)果異常等。

2.3 人工計數(shù) 儀器計數(shù)結(jié)果超出規(guī)定范圍、過低或過高、與鏡下估算有較大出入、儀器提示存在細(xì)胞碎片或難溶紅細(xì)胞、直方圖不規(guī)則，需進行人工血細(xì)胞計數(shù)。

2.4 涂片染色鏡檢及人工分類 通過觀察RBC、WBC及PLT形態(tài)，并估計WBC、PLT的數(shù)量，看與儀器報告是否相符，從而糾正因儀器識別能力的限制或故障造成的誤差。如見有核紅細(xì)胞則應(yīng)行顯微鏡下分類計數(shù)，報告結(jié)果時有核紅細(xì)胞應(yīng)從白細(xì)胞數(shù)中減去；見幼稚細(xì)胞應(yīng)在報告單中注明以提示臨床。觀察血小板的分布情況，如有無聚集、是散在還是成堆分布，可以幫助辨別血小板增減的性質(zhì)。鏡檢對血液分析至關(guān)重要，可以為臨床診斷提供非常重要信息，也可發(fā)現(xiàn)某些結(jié)果不準(zhǔn)確的原因，條件允許應(yīng)盡可能提高鏡檢率。

2.5 重采標(biāo)本復(fù)查 懷疑分析前因素引起的檢測結(jié)果異?；蚺c既往結(jié)果有較大波動，應(yīng)與臨床聯(lián)系，核實樣本抽取情況，必要時通知臨床重新采血復(fù)查；懷疑抗凝劑因素引起的血小板減少應(yīng)更換抗凝劑采血復(fù)查。

3 討論

3.1 嚴(yán)格的崗前培訓(xùn)，標(biāo)準(zhǔn)化的操作是確保檢測結(jié)果準(zhǔn)確的重要保障，否則再好的儀器得出的結(jié)果也會缺乏可信度。

3.2 血細(xì)胞分析儀具有快速、省時省力、重復(fù)性和穩(wěn)定較高等優(yōu)點，可提高常規(guī)工作的效率，減輕勞動強度。但由于儀器自身檢測原理的限制和多種因素對檢測結(jié)果的影響，血細(xì)胞分析儀只能作為初篩手段，對可疑或異常結(jié)果仍需要顯微鏡復(fù)檢［2］。

3.3 儀器的工作環(huán)境是保證儀器正常運行的先決條件，儀器的使用應(yīng)遠(yuǎn)離強的電磁場，有穩(wěn)壓的電源，儀器的外殼有良好的接地。良好的工作環(huán)境還要求實驗室內(nèi)保持清潔無塵，室溫應(yīng)控制在18～30℃之間，相對濕度小于80%。

3.4 定期校準(zhǔn)是保證結(jié)果準(zhǔn)確性的重要環(huán)節(jié)，每日的隨機質(zhì)控是了解儀器是否處于正常工作狀態(tài)的有效手段。

3.5 血細(xì)胞形態(tài)學(xué)是診斷血液系統(tǒng)疾病的重要手段之一［3］。對于臨床診斷懷疑血液病、白細(xì)胞過高或過低、三系細(xì)胞減少的病例，儀器報警提示有原始細(xì)胞、幼稚細(xì)胞、異形細(xì)胞的標(biāo)本，應(yīng)涂片染色鏡檢觀察細(xì)胞形態(tài)，避免造成血液病漏診。

3.6 血小板計數(shù)的準(zhǔn)確性是臨床診斷和治療血小板減少癥的重要指標(biāo)。多種因素可引起血小板假性減少，假性血小板減少給臨床造成很大的困擾。血小板聚集是引起假性血小板減少的重要原因之一［4］，顯微鏡觀察是確認(rèn)血小板聚集唯一的方法，故對血小板減少的標(biāo)本，需涂片鏡檢觀察是否有血小板聚集現(xiàn)象以確保檢驗結(jié)果的可靠性。

總之，血細(xì)胞分析儀只能作為初篩手段，檢驗人員在審核結(jié)果時特別是儀器出現(xiàn)異常報警時，應(yīng)綜合考慮儀器檢測的各種影響因素，以便采取正確的處理措施。只有這樣才能為臨床醫(yī)療提供可靠、真實的實驗數(shù)據(jù)，更好地為臨床服務(wù)。

［1］ 李永紅，鐘步云.血細(xì)胞分析儀測血小板結(jié)果偏低的原因及糾正方法〔J〕.臨床檢驗雜志，2001，9（2）：112－113.

［2］ 彭黎明，邱廣斌，趙威，等.全自動血細(xì)胞計數(shù)和白細(xì)胞分類計數(shù)的復(fù)檢規(guī)則〔J〕.中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2007，30（4）：377－379.

［3］ 劉厚麗，姜茹，矯秀.血細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗的經(jīng)驗體會〔J〕.醫(yī)學(xué)檢驗與臨床，2000，21（1）：127.

［4］ 羅春麗.臨床檢驗〔M〕.北京：人民衛(wèi)生出版社，1997：22.