胡 浩，董 捷，張紅城，曾曉雄*

（1.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科技學(xué)院，江蘇 南京 210095；2.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蜜蜂研究所，農(nóng)業(yè)部農(nóng)產(chǎn)品加工中心蜂產(chǎn)品加工分中心，北京 100093）

工蜂采集蜂膠的行為觀(guān)察及膠源植物的研究

胡 浩1,2，董 捷2，張紅城2，曾曉雄1,*

（1.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科技學(xué)院，江蘇 南京 210095；2.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蜜蜂研究所，農(nóng)業(yè)部農(nóng)產(chǎn)品加工中心蜂產(chǎn)品加工分中心，北京 100093）

蜂膠中大約50%成分來(lái)自植物樹(shù)脂，不同地區(qū)的蜂膠具有不同的植物來(lái)源。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)工蜂采集蜂膠的行為進(jìn)行觀(guān)察，并運(yùn)用高效液相色譜法（high performance liquid chromatography，HPLC）對(duì)加拿大楊樹(shù)芽的樹(shù)脂（簡(jiǎn)稱(chēng)加楊芽脂）、采膠工蜂后足上的樹(shù)脂和蜂箱中蜂膠的多酚類(lèi)成分進(jìn)行分析。結(jié)果表明：加楊芽脂、工蜂后足上的樹(shù)脂和蜂膠不僅在物理狀態(tài)上非常接近，而且在化學(xué)成分及其相對(duì)含量上也很相似。因此，中國(guó)蜂膠的膠源植物是黑楊派中歐洲黑楊以及它的雜交品種——加拿大楊。

高效液相色譜；蜂膠；膠源植物；加拿大楊芽脂

蜂膠是工蜂采集植物組織分泌的樹(shù)脂，并混合蜂蠟、花粉和自身分泌物等物質(zhì)，最終得到的一種具有特殊氣味的黏性混合物[1]。蜂膠的化學(xué)成分復(fù)雜，并具有多種生物學(xué)活性[2]，如抗氧化[3]、抗癌[4]、抗血糖[5]、抗菌[6]等。蜜蜂用蜂膠填補(bǔ)蜂箱的縫隙來(lái)加固蜂箱以及涂抹在蜂箱表面來(lái)抑菌，從而提高整個(gè)蜂群抵抗病原微生物的能力[2,7]。不同氣候條件下生長(zhǎng)的產(chǎn)膠植物不同，蜜蜂采集蜂膠的植物來(lái)源也不一樣[8-11]。不同的膠源植物導(dǎo)致了蜂膠的化學(xué)成分存在差異，從而最終影響到蜂膠的生物學(xué)活性[12]。目前研究報(bào)道北半球溫帶地區(qū)的蜂膠屬于楊樹(shù)型，其植物來(lái)源是楊屬中的黑楊派楊樹(shù)；黑楊派又分為歐洲黑楊和美洲黑楊兩個(gè)種，以歐洲黑楊作為蜂膠的膠源植物最為常見(jiàn)[13]。我國(guó)飼養(yǎng)的采膠蜜蜂主要是意大利蜜蜂（Apis mellifera），其在歐洲采集歐洲黑楊的樹(shù)脂生產(chǎn)蜂膠[14]。原產(chǎn)于我國(guó)本土的黑楊很少，僅在阿爾泰地區(qū)有歐洲黑楊的天然林分布，及新疆地區(qū)生長(zhǎng)著美洲黑楊的一個(gè)小種[15]，但我國(guó)引種的黑楊派間雜交品種，如加拿大楊（簡(jiǎn)稱(chēng)加楊）、健楊、72楊等分布很廣泛[16]。我國(guó)楊樹(shù)人工林70%以上都是黑楊派雜交樹(shù)種[16]。我國(guó)的楊樹(shù)資源非常豐富，從新疆到東部沿海，從黑龍江、內(nèi)蒙古到長(zhǎng)江流域均有分布，現(xiàn)已成為世界上楊樹(shù)人工林面積最大的國(guó)家。目前，雖然普遍認(rèn)為我國(guó)的蜂膠屬于楊樹(shù)型[17-18]，但關(guān)于工蜂采集蜂膠的一系列過(guò)程以及具體采自何種楊樹(shù)，至今尚無(wú)詳細(xì)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀(guān)察在北京香山地區(qū)意大利蜜蜂的工蜂采集蜂膠的行為，以及采用高效液相色譜法（high performance liquid chromatography，HPLC）分析蜂膠、采膠工蜂后足上的樹(shù)脂和加拿大楊樹(shù)芽的樹(shù)脂（簡(jiǎn)稱(chēng)加楊芽脂）的多酚類(lèi)成分，來(lái)研究蜂膠的植物來(lái)源。從而為建立中國(guó)蜂膠化學(xué)成分的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供相應(yīng)的依據(jù)，具有重要的實(shí)際意義。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

加楊芽脂：在北京植物園內(nèi)采集分泌芽脂的新鮮加拿大樹(shù)芽，置于-80 ℃冰箱中1 h，取出置于密封袋中輕輕敲打，脫落下來(lái)的紅色物質(zhì)即為加楊芽脂，置于-20 ℃中貯存；采膠工蜂后足上的樹(shù)脂 用鑷子在從蜂箱中捕獲的采膠工蜂的后足上刮取，置于-20 ℃中貯存；蜂膠：用刮刀刮自于飼養(yǎng)在中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蜜蜂研究所（北京植物園，香山）內(nèi)的蜜蜂蜂箱中，并置于-20 ℃中貯存。

甲醇（CR） 美國(guó)Fisher公司；乙醇 北京試劑公司；乙酸（色譜級(jí)） 西隴化工股份有限公司；實(shí)驗(yàn)中所用的標(biāo)品均購(gòu)自Sigma-Aldrich公司。

1.2 儀器與設(shè)備

Milli-Q Intergral純水/超純水一體化系統(tǒng) 美國(guó)Merk Millipore公司；AL204型分析天平 梅特勒-托利多（上海）儀器有限公司；KQ-50DB型數(shù)控超聲波清洗器 昆山市超聲儀器有限公司；TDL-5 型低速離心機(jī)上海安亭科學(xué)儀器廠(chǎng)；微量移液器 德國(guó)Eppendorf公司；HZS-H型水浴搖床 哈爾濱市東明醫(yī)療儀器廠(chǎng)；LC-6AD高效液相色譜儀（配有二極管陣列紫外檢測(cè)器(PDA)、SIL-自動(dòng)進(jìn)樣器、CTO-10A柱溫箱、LCsolution數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)） 日本島津公司；SONY DSC-T900相機(jī) 日本Sony公司。

1.3 方法

1.3.1 蜜蜂采集蜂膠行為的觀(guān)察

本實(shí)驗(yàn)于2013年6月1日—7月31日期間對(duì)飼養(yǎng)在中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蜜蜂研究所內(nèi)的6箱蜜蜂進(jìn)行觀(guān)察，并用照相機(jī)記錄工蜂采集樹(shù)脂及其攜帶樹(shù)脂回巢后在蜂箱中的行為。期間內(nèi)每周檢查3次蜂箱，每次觀(guān)察的時(shí)間段分布在上午9時(shí)至下午18時(shí)之間。如在蜂箱中發(fā)現(xiàn)有攜帶樹(shù)脂的蜜蜂，則進(jìn)行觀(guān)察記錄，并收集粘在工蜂的后足上的樹(shù)脂樣品。此外，在北京植物園中分別采集新鮮的毛白楊（Populus tomentosa Carr）、河北楊（Populus hopeiensis Huet Chow）、小葉楊（Populus simonii Carr）、鉆天楊（Populus nigra varitalica）、加拿大楊（Populus canadensis Moench）的樹(shù)芽，插在距離蜂箱周?chē)? m的空地上，連續(xù)10 d對(duì)工蜂采集蜂膠的行為進(jìn)行觀(guān)察（每天必須是新鮮采集的樹(shù)芽）。

1.3.2 蜂膠、采膠工蜂后足上的樹(shù)脂和加楊芽脂的處理

準(zhǔn)確稱(chēng)取0.5 g蜂膠、采膠工蜂后足上的樹(shù)脂和加楊芽脂于10 mL的容量瓶中，用75%乙醇溶液定容到10 mL。超聲3 h，功率100 W，溫度25℃。超聲完后，在40 ℃、100 r/min水浴搖床中提取12 h。離心收集提取液，0.22 μm微孔膜過(guò)濾，待用；上樣前稀釋6 倍。

1.3.3 HPLC色譜條件

HPLC條件：Shim-Pack PREP-ODS（250 mm× 4.6 mm，5 μm）色譜柱；柱溫箱溫度35 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)280 nm；進(jìn)樣量10 μL；流動(dòng)相：B相 甲醇（0.1%乙酸），A相 水（0.1%乙酸），梯度洗脫程序如下：0～25 min，22%～36% B；25～55 min，36%～52% B；55～90 min，52%～63% B；90～115 min，63%～70% B；115～135 min，70%～75% B；135～150 min，75%～80% B；流速為1 mL/min。

2 結(jié)果與分析

2.1 工蜂采集蜂膠行為的觀(guān)察

蜜蜂具有3對(duì)足，分別是前足、中足和后足，它們的大小和形狀都不一樣，最具特色的是前足上的凈角器及工蜂后足上的花粉采集器和花粉框[19]。花粉框是用來(lái)承載花粉的，但也用來(lái)運(yùn)輸蜂膠。目前已經(jīng)報(bào)道蜂膠是工蜂用上顎從植物組織上采集下來(lái)，在裝入花粉框中時(shí)，并不使用花粉鉗，而是使用前足和中足把樹(shù)脂收集起來(lái)，直接放在后足花粉框內(nèi)[19-20]。

圖1 工蜂采集蜂膠行為的觀(guān)察Fig.1 Photographs of resin-collecting activity of worker bees

圖1為記錄工蜂采集蜂膠行為的照片。觀(guān)察表明工蜂采集蜂膠并不像采蜜和花粉那樣每天都會(huì)大量采集，而是間隔一段時(shí)間采集一次。同時(shí)還發(fā)現(xiàn)，對(duì)于本實(shí)驗(yàn)所用的5種楊樹(shù)樹(shù)芽中，工蜂只采集加楊樹(shù)芽分泌的樹(shù)脂作為其蜂膠的植物來(lái)源。加楊是黑楊派中歐洲黑楊和美洲黑楊的雜交品種，其具有和歐洲黑楊樹(shù)脂成分相近的樹(shù)脂，同時(shí)加楊能在樹(shù)芽上分泌大量的樹(shù)脂，而其他楊樹(shù)分泌樹(shù)脂的量和化學(xué)成分都具有很大差異[21]。此外，加楊在我國(guó)分布范圍很廣，其他種類(lèi)的楊樹(shù)則分布則相對(duì)集中[15]。因此，引進(jìn)我國(guó)的蜜蜂在長(zhǎng)期進(jìn)化過(guò)程中選擇加楊替代歐洲黑楊作為新的膠源植物，并不會(huì)隨意選擇其他楊樹(shù)來(lái)替代加楊作為膠源植物[22]。

通過(guò)觀(guān)察發(fā)現(xiàn)，工蜂首先找到表面分泌有樹(shù)脂的加楊樹(shù)芽，然后通過(guò)口器上顎咬住并來(lái)回撕扯得到樹(shù)脂，通過(guò)前足、中足把樹(shù)脂最終傳遞到放入后足的花粉框中（圖1a）。從圖1b可以明顯地看到，采集蜂膠的工蜂返回蜂巢時(shí)，在其兩只后足上有液態(tài)的紅色物質(zhì)。從外觀(guān)上可以判斷此物質(zhì)不是花蜜或花粉，只可能是樹(shù)脂。因?yàn)槊鄯洳杉凼峭ㄟ^(guò)吸食到胃部來(lái)運(yùn)輸?shù)?，花蜜不可能出現(xiàn)在后足上；蜜蜂采集花粉雖然也是由后足上的花粉框運(yùn)輸，但其是顆粒的并成團(tuán)狀，此物質(zhì)是液態(tài)的，而且具有很大的黏性，所以也不是花粉。圖1c中心處的工蜂（箭頭指出）正在用后足前后擺動(dòng)來(lái)卸掉后足上的樹(shù)脂。通過(guò)觀(guān)察發(fā)現(xiàn)，采集蜂膠的工蜂回巢后，會(huì)在蜂脾上反復(fù)地來(lái)回走動(dòng)。一方面工蜂在尋找到合適的位置，用前足把身體固定在蜂脾上，采用后足來(lái)回?cái)[動(dòng)磨蹭并和腹部產(chǎn)生一些摩擦，靠自身的力量卸下樹(shù)脂。其次是利用走動(dòng)，通過(guò)部分卸下來(lái)的粘在蜂脾上的樹(shù)脂，拉扯下一部分仍粘在后足上的樹(shù)脂，這也解釋了在蜂脾上梁上為什么會(huì)散落很多一滴滴的紅色樹(shù)脂。最后，采膠工蜂通過(guò)來(lái)回走動(dòng)，引起蜂脾上其他工蜂的注意，從而其他工蜂會(huì)聚集在其周?chē)?，用上顎咬住其后足上的樹(shù)脂，并拉扯下來(lái)，由于樹(shù)脂黏性很大，此時(shí)常會(huì)被拉成一條很細(xì)長(zhǎng)的絲。通過(guò)以上3種方式，工蜂最終能完全卸下后足上的樹(shù)脂，但整個(gè)過(guò)程是很耗時(shí)費(fèi)力的。從圖1d可以看出，最終散落在蜂脾及蜂脾上梁的樹(shù)脂，再由工蜂用上顎運(yùn)輸，并與蜂蠟、花粉和自身的分泌物混合一起制成蜂膠涂抹在蜂箱內(nèi)壁上及空隙處。蜂膠具有很大的黏附力，蜂箱上的覆布會(huì)被緊緊地黏在蜂箱上。

在兩個(gè)月的觀(guān)察中發(fā)現(xiàn)，雨后蜂箱中的蜂膠會(huì)明顯增多，而且一般在雨后次日容易觀(guān)察到蜜蜂的采膠行為（圖1中照片拍攝于雨后次日上午）。這可能是因?yàn)橛旰蠓湎渲械目p隙會(huì)增大、增多，造成蜂箱滲水；此外，雨后蜂箱也較潮濕，容易染菌。因此工蜂在雨后次日采膠比較多，可能與其生活習(xí)性有關(guān)。另一方面，也可能和加楊樹(shù)芽分泌樹(shù)脂的生理習(xí)性有關(guān)[16]，雨后加楊芽脂的分泌量會(huì)增加，且比晴朗天氣時(shí)的黏性要小，利于工蜂采膠。

圖2是在北京植物園內(nèi)采集的分泌樹(shù)脂的新鮮加楊樹(shù)芽。楊樹(shù)的樹(shù)脂是由特定組織分泌的，屬于構(gòu)成型樹(shù)脂[22]。大多數(shù)楊樹(shù)樹(shù)脂由楊樹(shù)托葉中的表皮細(xì)胞分泌出來(lái)，并貯存在表皮細(xì)胞與托葉表面上包裹著一層角質(zhì)層間的空間內(nèi)；當(dāng)分泌達(dá)到一定量的時(shí)候，角質(zhì)層會(huì)破裂，表皮細(xì)胞分泌的樹(shù)脂就會(huì)流出到樹(shù)芽的表面[22]。加楊樹(shù)分泌樹(shù)脂的過(guò)程屬于這種類(lèi)型。加楊芽脂富含酚酸和黃酮類(lèi)物質(zhì)[23]，屬于酚類(lèi)樹(shù)脂，其大部分化學(xué)成分是非揮發(fā)性的，具有保護(hù)加楊的嫩芽和幼葉避免受到害蟲(chóng)的啃食及抑制水分快速揮發(fā)等生理作用[22]。通過(guò)對(duì)加楊樹(shù)芽分泌樹(shù)脂的觀(guān)察，發(fā)現(xiàn)每年的5—8月加楊樹(shù)上新生的嫩芽表面會(huì)包裹著大量液滴狀的紅色樹(shù)脂。在圖2可明顯看出，綠色加楊樹(shù)芽的表面上粘有一滴紅色的樹(shù)脂。加楊芽上的樹(shù)脂與圖1b中采膠工蜂后腿上攜帶的樹(shù)脂在顏色和狀態(tài)上都很相似，也都具有很強(qiáng)的黏性。此外二者還都具有相似的芬香氣味。因此從物理性質(zhì)上觀(guān)察，工蜂后足上的樹(shù)脂很可能是來(lái)自加楊芽脂。

圖2 加楊樹(shù)芽分泌的樹(shù)脂F(xiàn)ig.2 Photograph of bud resin secreted by Populus canadensis Moench

2.2 加楊芽脂、工蜂后足上的樹(shù)脂和蜂膠的HPLC圖譜

圖3 混合標(biāo)準(zhǔn)品（a）、加楊芽脂（b）、工蜂后足樹(shù)脂（c）和蜂膠（d）的HPPLLCC圖譜Fig.3 Chromatograms of standard mixture (a), ethanol extracts from bud resin of Populus canadensis Moench (b) and resin collected from honeybee hind legs (c) and propolis (d)

由圖3可知，加楊芽脂、工蜂后足樹(shù)脂和蜂膠中都富含酚酸、黃酮和相應(yīng)的酯類(lèi)[23-25]。除蜂膠中短葉松素-3-乙酸酯的峰（76 min）較后足上的樹(shù)脂和加楊芽脂中的高外，三者的圖譜非常接近，無(wú)論是在化學(xué)物質(zhì)的種類(lèi)，還是在各物質(zhì)間的相對(duì)含量上。使用《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)A版軟件》計(jì)算三者間的相似度，得到加楊芽脂與工蜂后足上的樹(shù)脂的相似度為0.977，蜂膠與加楊芽脂為0.896，蜂膠與工蜂后足上的樹(shù)脂為0.911，三者之間的相似度都比較高。加楊芽脂與工蜂后足上的樹(shù)脂的相似度非常高（0.977），說(shuō)明二者的化學(xué)成分非常接近，基本上是同一種物質(zhì)，表明工蜂采集的就是加楊芽脂。蜂膠與工蜂后足上的樹(shù)脂的相似度（0.911）比蜂膠與加楊芽脂的（0.896）要高，這說(shuō)明工蜂后足上的樹(shù)脂比加楊芽脂在化學(xué)組分上更接近蜂膠。從上面研究可以發(fā)現(xiàn)，工蜂采集蜂膠的過(guò)程是由加楊芽脂到工蜂后足上的樹(shù)脂，再到蜂箱中的蜂膠。在這個(gè)過(guò)程中，可能是工蜂在采集加楊芽脂的時(shí)候就混入了少量的其他物質(zhì)，才導(dǎo)致了采膠工蜂后足上的樹(shù)脂與蜂膠的成分更為接近。因此，從三者的HPLC圖譜可以判斷，工蜂是采集加楊芽脂作為蜂膠。但要更詳細(xì)地說(shuō)明三者之間相似度的關(guān)系，則需要建立相應(yīng)的指紋圖譜。本課題組目前已經(jīng)完成了中國(guó)蜂膠指紋圖譜；由于工蜂采集蜂膠及加楊分泌樹(shù)脂具有季節(jié)性，工蜂后足樹(shù)脂和加楊芽脂的指紋圖譜正在完善中。

2.3 加楊芽脂、工蜂后足上的樹(shù)脂和蜂膠醇提物中多酚類(lèi)成分的定量

通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)品建立標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，對(duì)加楊芽脂、工蜂后足上的樹(shù)脂和蜂膠醇提物的成分進(jìn)行定量分析。從表1可以看出，三者的醇提物在多酚成分種類(lèi)及含量上都很接近，其中主要成分包括3,4-二甲氧基肉桂酸、松鼠素、短葉松素-3-乙酸酯和柯因等物質(zhì)，這些基本是楊樹(shù)型蜂膠的特征成分[12,19]。加楊芽脂的總酚酸和總黃酮含量分別是153.63 mg/g和154.84 mg/g，與采膠工蜂后足上的樹(shù)脂的總酚酸含量（169.39 mg/g）和總黃酮的含量（157.45 mg/g）很接近，并且二者的多酚類(lèi)成分種類(lèi)也非常接近。蜂膠中的總酚酸和總黃酮分別是95.43 mg/g和123.82 mg/g，比加楊芽脂和工蜂后足樹(shù)脂的總酚酸和總黃酮都要低，但所含的物質(zhì)種類(lèi)和各物質(zhì)含量之間的比例與它們中的都很接近。然而在單個(gè)成分含量比較中，加楊芽脂和后足上樹(shù)脂中的短葉松素-3-乙酸酯相對(duì)于松屬素的含量比大約都為1∶1，蜂膠中的短葉松素-3-乙酸酯相對(duì)于松屬素的含量比大約為2∶1，蜂膠中的短葉松素-3-乙酸酯的含量有所增加。此外，前二者中的5-甲氧基短葉松素和短葉松素與松屬素的含量比大約都為2∶1∶4，而蜂膠中的則為1∶1∶4，說(shuō)明蜂膠中的5-甲氧基短葉松素的含量有所下降。推測(cè)蜂膠中短葉松素-3-乙酸酯含量的增高可能是由于蜂膠在貯存過(guò)程中部分5-甲氧基短葉松素發(fā)生了一系列的反應(yīng)，生成短葉松素-3-乙酸酯。但其中具體是怎樣的過(guò)程，以及是否還存在其他物質(zhì)對(duì)短葉松素-3-乙酸酯含量的增高有所貢獻(xiàn)，則需進(jìn)一步研究。

表1 加楊芽脂、工蜂后足樹(shù)脂和蜂膠醇提物中多酚類(lèi)化合物的含量Table 1 Polyphenolic contents of ethanol extracts from bud resin of Populus canadensis Moench and resin collected from honeybee hind legs and propoliiss mg/g

蜂膠中約含55%的樹(shù)脂、30%的蜂蠟、10%的揮發(fā)性油和5%的花粉等物質(zhì)[1]。由表1可知，蜂膠與加楊芽脂及后足上樹(shù)脂的總酚酸和總黃酮含量的比例大概分別為3∶5∶5和4∶5∶5。通過(guò)換算得到蜂膠中的總酚酸約占加楊芽脂或后足上樹(shù)脂總酚酸的60%，約占總黃酮的80%。這樣的比例與蜂膠中含有55%的樹(shù)脂的結(jié)論的比較接近，說(shuō)明蜂膠是蜜蜂在采回蜂巢的樹(shù)脂中添加了大約一半的其他物質(zhì)所制得的。此外，蜂膠中總酚酸與總黃酮的含量比例大約為3∶4，而加楊芽脂和工蜂后足上的樹(shù)脂中的含量比為1∶1，大體接近；但蜂膠中總黃酮相對(duì)總酚酸較多，這可能是因?yàn)槊鄯湓诜淠z中添加了富含黃酮類(lèi)的物質(zhì)或蜂膠在蜂箱的貯藏過(guò)程中物質(zhì)發(fā)生了某些變化所造成的。雖然蜂膠、加楊芽脂和后足上樹(shù)脂中的各個(gè)化學(xué)組分的含量存在一定差異，但三者的化學(xué)組分在整體上還是非常相似的。因此從多酚類(lèi)成分的含量上，也可推斷出工蜂是采集加拿大楊樹(shù)芽分泌的芽脂作為蜂膠的植物來(lái)源。

總之，加拿大楊是黑楊派中歐洲黑楊和美洲黑楊的雜交品種，其具有和歐洲黑楊樹(shù)脂成分相近的樹(shù)脂，同時(shí)加楊能在樹(shù)芽上分泌大量的樹(shù)脂，而與其他楊樹(shù)分泌樹(shù)脂的量和化學(xué)成分相比，都具有很大差異[23]。此外，加楊在我國(guó)分布范圍很廣，其他種類(lèi)的楊樹(shù)則分布則相對(duì)集中[16]。因此可以認(rèn)為引進(jìn)我國(guó)的意大利蜜蜂，在長(zhǎng)期進(jìn)化過(guò)程中有目的地選擇加楊替代歐洲黑楊作為新的膠源植物，而不會(huì)隨意地選擇其他楊樹(shù)作為膠源植物[25]。

3 結(jié) 論

通過(guò)對(duì)飼養(yǎng)在北京香山地區(qū)蜂箱中工蜂采集蜂膠的行為，進(jìn)行觀(guān)察。發(fā)現(xiàn)了工蜂用口器采集加楊芽脂、在后足花粉框中攜帶樹(shù)脂以及在蜂箱中卸下后足上樹(shù)脂的過(guò)程。再通過(guò)HPLC對(duì)加楊芽脂、采膠工蜂后足上的樹(shù)脂和蜂膠的化學(xué)成分進(jìn)行分析并定量，發(fā)現(xiàn)三者在多酚類(lèi)成分組成和含量上也基本一致。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，中國(guó)蜂膠的膠源植物是黑楊派中歐洲黑楊以及它的雜交品種——加拿大楊樹(shù)。

[1] 董捷, 張紅城, 尹策, 等. 蜂膠研究的最新進(jìn)展[J]. 食品科學(xué), 2007, 28(9): 637-642.

[2] 羅照明, 張紅城. 中國(guó)蜂膠化學(xué)成分及其生物活性的研究[J]. 中國(guó)蜂業(yè), 2012, 63(2): 55-62.

[3] AHN M R, KUMAZAWA S, USUI Y, et al. Antioxidant, activity and constituents of propolis collected in various areas of China[J]. Food Chemistry, 2007, 101(4): 1383-1392.

[4] CHEN C N, HSIAO C J, LEE S S, et al. Chemical modification and anticancer effect of prenylated flavanones from Taiwanese propolis[J]. Natural Product Report, 2011, 26: 116-124.

[5] 王愛(ài)霞, 繆曉青. 蜂膠的降血糖作用研究現(xiàn)狀[J]. 中國(guó)蜂業(yè), 2010, 61(5): 31-33.

[6] MOHAMMADZADEH S, SHARIATPANAHI M, HAMEDI M, et al. Chemical composition, oral toxicity and antimicrobial activity of Iranian propolis[J]. Food Chemistry, 2007, 103(4): 1097-1103.

[7] 王勇. 蜜蜂生生不息近億年的奧秘[J]. 中國(guó)蜂業(yè), 2006, 57(增刊1): 12.

[8] 周夢(mèng)瑤, 徐瑞晗, 黃薇, 等. 世界主要蜂膠的植物源及多酚類(lèi)化合物的研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)蜂業(yè), 2010, 61(3): 5-10.

[9] ALIBONI A, ANDREA A, MASSANISSO P. Propolis specimens from different locations of central Italy: chemical profiling and gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS) quantitative analysis of the allergenic esters benzyl cinnamate and benzyl salicylate[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2010, 59(1): 282-288.

[10] KUMAZAWA S, YONEDA M, SHIBATA I, et al. Direct evidence for the plant origin of Brazilian propolis by the observation of honeybee behavior and phytochemical analysis[J]. Chemical & Pharmaceutical Bulletin, 2003, 51(6): 740-742.

[11] SHIMOMURA K, INUI S, SUGIYAMA Y, et al. Identification of the plant origin of propolis from Jeju Island, Korea, by observation of honeybee behavior and phytochemical analysis[J]. Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry, 2012, 76(11): 2135-2138.

[12] SFORCIN J M. Propolis and the immune system: a review[J]. Journal of Ethnopharmacology, 2007, 113(1): 1-14.

[13] BANKOVA V S, de CASTRO S L, MARCUCCI M C. Propolis: recent advances in chemistry and plant origin[J]. Apidologie, 2000, 31: 3-15.

[14] BANKOVA V, DJULGEROV A, POPOV S, et al. Propolis produced in Bulgaria and Mongolia: phenolic compounds and plant origin[J]. Apidologie, 1992, 23: 79-85.

[15] 李潔. 楊樹(shù)栽培與逆境生理[M]. 北京: 中國(guó)林業(yè)出版社, 2010: 22-45.

[16] 張文國(guó), 張旭東, 黃玲玲. 我國(guó)楊樹(shù)生理狀態(tài)研究進(jìn)展[J]. 世界林業(yè)研究, 2010, 23(1): 50-55.

[17] 羅照明. 中國(guó)蜂膠中多酚類(lèi)化合物的研究[D]. 北京: 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院, 2013: 8-69.

[18] USIA T，BANSKOTA A H, TEZUKA Y, et a1. Constituents of Chinese propolis and their antiproliferative activities[J]. Journal of Natural Products, 2002, 65(5): 673-676.

[19] 郎斯特羅(美). 蜂箱與蜜蜂[M]. 陳劍星, 譯. 北京: 中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社, 1981: 35-72.

[20] KUMAZAWA S, NAKAMURA J, MURASE M, et al. Plant origin of Okinawan propolis: honeybee behavior observation and phytochemical analysis[J]. Naturwissenschaften, 2008, 95(8): 781-786.

[21] IGOR J, JOSIP M. Volatile compounds from leaf-buds of Populus nigra L. (Salicaceae)[J]. Phytochemistry, 2003, 63: 109-113.

[22] LANGENHEIM J H. Plant resins: chemistry, evolution, ecology, and ethnobotany[M]. Portland: Timber Press. 2003: 328-386

[23] 范文, 伊愛(ài)琴, 陳媛梅. 楊樹(shù)芽和芽膠中化學(xué)成分的分析[J]. 林業(yè)科技開(kāi)發(fā), 2009, 23(1): 32-35.

[24] 胡浩, 羅照明, 張紅城. 中國(guó)蜂膠化學(xué)成分的研究[C]//2013年全國(guó)蜂產(chǎn)品市場(chǎng)信息交流會(huì)暨中國(guó)(浦東)蜂業(yè)博覽會(huì)論文集. 上海: 中國(guó)養(yǎng)蜂學(xué)會(huì), 2013: 250-258.

[25] 胡浩, 張紅城. 中國(guó)蜂膠膠源植物的研究進(jìn)展[C]//第十屆海峽兩岸蜜蜂與蜂產(chǎn)品學(xué)術(shù)研討會(huì)暨首屆全國(guó)蜂產(chǎn)業(yè)高峰論壇論文集. 揚(yáng)州: 中國(guó)養(yǎng)蜂學(xué)會(huì), 2013: 144-147.

Behavior Observation of Worker Bees Collecting Propolis and Plant Origin of Propolis

HU Hao1,2, DONG Jie2, ZHANG Hong-cheng2, ZENG Xiao-xiong1,*
(1. College of Food Science and Technology, Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095, China; 2. National R&D C entre for Bee Product Processing, Bee Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100093, China)

Propolis is generally made up of 50% plant resins, and its variety depends on plant origins in the location where honeybees collecte propolis. In this study, it was observed that honeybee workers collected resin from the bud of Populus canadensis Moench, carried the red resin with their hind legs and then removed the pieces of red resin inside the hive. Furthermore, the bud resin of Populus canadensis Moench, resinous substance collected from honeybees’ hind legs and propolis in bee houses were extracted separately with aqueous ethanol solvent for the analysis of polyphenolic components via high performance liquid chromatography (HPLC). The resu lts suggested that their similarity displayed not only in physical properties but also chemical components as well as relative content of each component. Thus, the plant origin of Chinese propolis can be Populus canadensis Moencha, a hybrid variety of Populus nigra L.

high performance liquid chromatography; propolis; plant origin; bud resin of Populus canadensis Moench

S896

A

1002-6630（2014）15-0054-05

10.7506/spkx1002-6630-201415011

2013-10-07

國(guó)家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)（蜂）產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專(zhuān)項(xiàng)（CARS-45-KXJ18）；“十二五”國(guó)家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目（2011BAD33B04）

胡浩（1990—），男，碩士研究生，研究方向?yàn)槭称飞锛夹g(shù)。E-mail：huhaogogo@gmail.com

*通信作者：曾曉雄（1964—），男，教授，博士，研究方向?yàn)槭称飞锛夹g(shù)。E-mail：zengxx@njau.edu.cn