朱黎霞 張英豐

1.南方醫(yī)科大學(xué)珠江醫(yī)院中醫(yī)科，廣東廣州510282；2.廣州中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，廣東廣州510006

不同配比黃芪丹參對(duì)氣虛血瘀證模型大鼠血液流變學(xué)及TXB2、6-keto-PGF1α影響的研究

朱黎霞1張英豐2▲

1.南方醫(yī)科大學(xué)珠江醫(yī)院中醫(yī)科，廣東廣州510282；2.廣州中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，廣東廣州510006

目的探討黃芪丹參不同配比對(duì)氣虛血瘀證大鼠血液流變學(xué)及血栓素B2（TXB2）、6-酮前列腺素F1α（6-keto-PGF1α）的影響。方法將SD大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組和黃芪丹參不同配比組，每組各10只。黃芪、丹參的總給藥量均為原藥材15 g/kg，黃芪、丹參比例分別為5∶1、3∶1、1∶1、1∶3、1∶5。采用饑餓、游泳加皮下注射腎上腺素的方法復(fù)制氣虛血瘀證大鼠模型，各組大鼠給予不同配比的水煎液凍干物，測(cè)定血液流變學(xué)指標(biāo)和TXB2、6-keto-PGF1α含量。結(jié)果氣虛血瘀模型組血流變參數(shù)和TXB2顯著升高，6-keto-PGF1α顯著降低，與正常組比較差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），模型復(fù)制成功。黃芪丹參3∶1、1∶1、1∶3、1∶5配比組可改善血瘀狀態(tài)，使升高的TXB2水平降低，提升6-keto-PGF1α及6-keto-PGF1α/TXB2比值，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。結(jié)論黃芪丹參對(duì)大鼠氣虛血瘀證確有療效，其中1∶3配比組效果最佳。

丹參黃芪藥對(duì)；氣虛血瘀證；血液流變學(xué)；配比研究

證是中醫(yī)特有概念，辨證論治是中醫(yī)特色，氣虛血瘀證是中醫(yī)臨床常見證型之一，益氣活血是行之有效的治法，黃芪、丹參是常見的藥對(duì)組合。本文構(gòu)建了氣虛血瘀證大鼠模型，探討不同配比對(duì)氣虛血瘀證大鼠模型血液流變學(xué)及血栓素B2（TXB2）、6-酮前列腺素F1α（6-keto-PGF1α）、6-keto-PGF1α/TXB2比值的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器LG-R-80B型血液黏度儀（北京中勤世帝科學(xué)儀器有限公司），Anke TDL-40B（上海安亭科學(xué)儀器廠）；LGJ-10C真空冷凍干燥機(jī)（鄭州南北儀器設(shè)備有限公司）。

1.1.2 試劑鹽酸腎上腺素注射液（上海禾豐制藥有限公司），TXB2、6-keto-PGF1α試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。

1.1.3 藥物黃芪、丹參飲片購自廣州致信藥業(yè)，經(jīng)鑒定黃芪為豆科植物膜莢黃芪Astralusmembranaceus（Fish.）Bge.的干燥根，丹參為Radix Salviae Miltiorrhiae的干燥根莖。水煎液凍干物的制備：黃芪丹參藥材按5∶1、3∶1、1∶1、1∶3、1∶5比例混合，總量均為5 kg。加水煎煮2次，加水量分別為10、8倍，時(shí)間依次為30、20min，煎好后過濾并壓榨藥渣。將水煎液和壓榨液合并，靜置、離心，60℃下減壓濃縮得一定密度的浸膏，并于-40℃下冷凍干燥。

1.1.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康雄性SD大鼠，清潔級(jí)，體重（200±10）g，廣州中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，許可證號(hào)SCXK2008-0020。

1.2 方法

1.2.1 分組大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組和黃芪丹參5∶1、3∶1、1∶1、1∶3、1∶5組，每組各10只。

1.2.2 氣虛血瘀證大鼠模型制備根據(jù)中醫(yī)“勞則氣耗”理論，結(jié)合“冷凝激怒”模擬血瘀狀態(tài)，在文獻(xiàn)方法[1-5]的基礎(chǔ)上加以改進(jìn)。除正常組動(dòng)物外，所有大鼠早上給予一半飼料，晚間再給予一半飼料（每天總量40 g/kg，每天總攝食量控制在正常值的1/2左右），時(shí)間維持1周，除正常組動(dòng)物外，第8天開始在限制食量的基礎(chǔ)上，放入（20±2）℃左右水中游泳，當(dāng)每組50%的大鼠出現(xiàn)自然沉降時(shí)停止游泳，連續(xù)18 d。除空白正常組動(dòng)物外，第16天開始每只大鼠在游泳前皮下注射腎上腺素0.4 mL/kg于10℃水中游泳，共10 d。根據(jù)動(dòng)物精神狀態(tài)、毛發(fā)變化、體重等一般情況，結(jié)合血液流變學(xué)改善判斷模型是否成功。

1.2.3 給藥劑量根據(jù)人與實(shí)驗(yàn)大鼠的體表面積折算法計(jì)算給藥量。實(shí)驗(yàn)第2周開始，除正常組及模型組大鼠外，每只大鼠均灌胃給予凍干物（相當(dāng)于原藥材15 g/kg），每天1次，給藥持續(xù)到造模結(jié)束后第7天。正常組及模型組灌服同體積生理鹽水。

1.2.4 血液流變學(xué)及TXB2、6-keto-PGF1α的檢測(cè)末次給藥后1 h腹主動(dòng)脈取血于肝素鋰抗凝管內(nèi)，3000 r/min×30 min取上層血漿。在全自動(dòng)血液流變儀上由專人檢測(cè)，檢測(cè)指標(biāo)包括高（200 s-1）、中（100 s-1、50 s-1）、低（1 s-1）切變速率下的全血黏度，并測(cè)定切變速率為50 s-1下的血漿黏度[6]。按照試劑盒說明書測(cè)定血漿TXB2、6-keto-PGF1α含量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 18.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，正態(tài)分布計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組間比較采用方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 黃芪丹參配伍對(duì)血液流變學(xué)的影響

結(jié)果顯示：造模后模型組與正常組比較，高、中、低切變率、血漿黏度急遽升高，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。大鼠分別給予不同配比的丹參黃芪后，3∶1、1∶1、1∶3、1∶5配比組高、中、低切變率、血漿黏度和模型組比較顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）。從變化趨勢(shì)看，隨著黃芪比例降低，降低血黏度效果越好，但黃芪丹參比例低于1∶3時(shí)反而療效降低。見表1。

表1 黃芪丹參不同配比對(duì)氣虛血瘀證大鼠血液流變學(xué)的影響（mPa·s，±s，n=10）

表1 黃芪丹參不同配比對(duì)氣虛血瘀證大鼠血液流變學(xué)的影響（mPa·s，±s，n=10）

注：與正常組比較，**P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01

組別血漿黏度50 s-1全血黏度200 s-1100 s-150 s-11 s-1正常組模型組5∶1組3∶1組1∶1組1∶3組1∶5組4.09±0.12 4.78±0.27**4.63±0.16 4.39±0.28##4.36±0.14##4.27±0.11##4.31±0.29##4.62±0.18 5.35±0.13**5.18±0.28 5.09±0.19#4.92±0.25##4.85±0.32##5.06±0.41##5.26±0.15 5.91±0.38**5.79±0.24 5.70±0.33#5.64±0.25##5.38±0.37##5.51±0.41##23.54±1.57 28.66±4.66**27.12±2.94 26.39±1.87#25.46±2.64#24.98±1.55##25.22±1.69##1.62±0.14 2.23±0.18**2.11±0.24 2.01±0.21##1.97±0.17##1.81±0.13##1.91±0.25##

2.2 黃芪丹參配伍對(duì)TXB2、6-keto-PGF1α的影響

結(jié)果顯示：造模后模型組與正常組比較，血栓素TXB2急劇升高、6-keto-PGF1α水平降低，6-keto-PGF1α/TXB2比值降低，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。大鼠分別給予不同配比的丹參黃芪后，3∶1、1∶1、1∶3、1∶5組可使升高的TXB2水平降低，提高6-keto-PGF1α及6-keto-PGF1α/TXB2比值，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。黃芪丹參比例1∶3時(shí)效果最佳。見表2。

表2 黃芪丹參不同配比對(duì)氣虛血瘀證大鼠TXB2、6-keto-PGF1α的影響（pg/mL，±s，n=10）

表2 黃芪丹參不同配比對(duì)氣虛血瘀證大鼠TXB2、6-keto-PGF1α的影響（pg/mL，±s，n=10）

注：與正常組比較，**P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01；TXB2：血栓素B2；6-keto-PGF1α：6-酮前列腺素F1α

組別TXB2（pg/mL）6-keto-PGF1α（pg/mL）6-keto-PGF1α/TXB2正常組模型組5∶1組3∶1組1∶1組1∶3組1∶5組437.75±35.97 631.36±32.65**592.66±54.80 557.39±28.37##501.79±41.22##467.52±35.41##475.04±32.29##515.76±43.51 308.28±21.22**336.94±32.11 423.23±31.04##443.78±29.11##470.47±45.11##447.99±48.86##1.18±0.06 0.49±0.05**0.57±0.07#0.76±0.05##0.89±0.09##1.01±0.08##0.94±0.08##

3 討論

中藥復(fù)方是多成分混合體，作為外源性物質(zhì)進(jìn)入機(jī)體必然對(duì)內(nèi)環(huán)境產(chǎn)生擾動(dòng)，具有整體性和相互性原則。中藥組成的“數(shù)、量、相對(duì)比例”決定了復(fù)方功效，中藥復(fù)方配伍成為當(dāng)前研究的熱點(diǎn)。中醫(yī)藥臨床實(shí)踐中，常將功效相近或相輔相成的兩味藥物相對(duì)固定配伍使用，稱為藥對(duì)，成為方劑配伍的基本組成形式之一。藥對(duì)因其組方簡(jiǎn)單，療效確切，臨床應(yīng)用廣泛，易于入手研究，以其為研究對(duì)象具有可行性和可操作性。黃芪味甘、微溫，歸脾、肺經(jīng)，為補(bǔ)氣要藥。丹參味苦、微寒，歸心、肝經(jīng)為活血主藥。丹參、黃芪則為臨床常用的藥對(duì)組合，丹參活血，黃芪補(bǔ)氣，對(duì)于氣虛血瘀證具有良好療效。楊振等[7]報(bào)道丹參黃芪提取物可改善心腦血管功能、降低血脂。

氣虛血瘀證是臨床諸多疾病常見的中醫(yī)證候之一，尤其是在心腦血管疾病中常見。由于氣虛運(yùn)血無力，血行瘀滯而表現(xiàn)的癥候，常由病久氣虛，漸致瘀血內(nèi)停而引起。尤其在心腦血管疾病中常見。隨著生活方式的轉(zhuǎn)變加上工作節(jié)奏的加快，氣虛血瘀證在臨床上多見。中醫(yī)認(rèn)為“氣為血帥、血為氣母”、“氣行則血行、氣滯則血瘀”，氣、血之間相互依存、相互促進(jìn)，在氣虛血瘀型中互為因果，中醫(yī)認(rèn)為黃芪補(bǔ)氣，丹參活血，丹參黃芪配伍對(duì)氣虛血瘀證的高“濃、黏、凝、聚”狀態(tài)有顯著改善，在所選定的各個(gè)配比組均可以改善血瘀狀態(tài)，隨著丹參比例增加而效果越顯著，但在1∶5時(shí)效果反而比1∶3有所降低，說明補(bǔ)氣對(duì)改善血瘀狀態(tài)必不可少，且比例非常關(guān)鍵。

氣虛血瘀證模型復(fù)制方法較多，如苗蘭等[8]采用睡眠剝奪法加高脂高糖飼料復(fù)制。本文根據(jù)中醫(yī)“饑則損氣”、“勞則耗氣”、“肥甘厚味傷脾”等理論，采用饑餓、勞累、加腎上腺素等模擬情志刺激等多重因素復(fù)制氣虛血瘀型大鼠模型。造模后大鼠精神狀態(tài)、皮毛光潔度、體重等均發(fā)生明顯改變，出現(xiàn)精神萎靡、身體消瘦、毛發(fā)萎黃、舌質(zhì)瘀斑等癥狀。高、中、低切邊速率下血黏度顯著升高。本方法復(fù)制氣虛血瘀證大鼠模型成功、可靠。

血栓素A2（TXA2）和前列環(huán)素（PGI2）的平衡對(duì)于維持血液流動(dòng)性和血管內(nèi)皮正常功能極為重要，在血瘀狀態(tài)下PGI2合成減少，TXA2合成增多，PGI2/TXA2的平衡被破壞。由于PGI2、TXA2均不穩(wěn)定，可用其代謝產(chǎn)物TXB2、6-keto-PGF1α及其6-keto-PGF1α/TXB2來反映藥物的治療狀況[9]。本實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，模型組TXB2顯著增加、6-keto-PGF1α顯著降低，6-keto-PGF1α/ TXB2明顯低于正常組，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。丹參是中醫(yī)“活血化瘀”要藥，藥效物質(zhì)基礎(chǔ)清新，療效確切，確能改善血瘀證大鼠血瘀狀態(tài)，對(duì)6-keto-PGF1α、TXB2有顯著影響[10]。經(jīng)給予不同配比的黃芪丹參提取物后給藥組相比模型組TXB2顯著降低、6-keto-PGF1α顯著增加，6-keto-PGF1α/TXB2顯著增加，其中1∶3比例效果最佳，與柳潤(rùn)輝等[11]組分配伍研究結(jié)果較為接近。

在中藥配比研究中，藥物的處理方法非常重要，要求不僅能夠最大程度保留活性成分，也需要和傳統(tǒng)用藥方法盡量保持一致。目前常用的有水煎法、醇提法等，各有優(yōu)缺點(diǎn)。如水煎法簡(jiǎn)便易行，但對(duì)脂溶性成分浸提效率較低，且溶出雜質(zhì)較多、不利于長(zhǎng)期儲(chǔ)存。醇提法采用不同濃度乙醇獲得活性成分或有效部位，活性成分濃度提高，易于獲得理想結(jié)果，但非傳統(tǒng)處理方法。大量基礎(chǔ)研究發(fā)現(xiàn)丹參的脂溶性成分群（丹參酮ⅡA、隱丹參酮等）、水溶性成分群（丹參素、原兒茶醛、丹酚酸A、B、C、D、E等）均為活性成分群，但對(duì)光、熱、水分均不穩(wěn)定，提取過程中損耗較多。本文通過結(jié)合水煎法和冷凍干燥法獲得提取物，既繼承了傳統(tǒng)中藥處理方法的精髓，體現(xiàn)了在煎煮過程中復(fù)方成分群間復(fù)雜的相互作用，又最大程度地保持了活性成分的穩(wěn)定性，且提取物復(fù)溶性好，利于長(zhǎng)期給藥。目前采用此方法的文獻(xiàn)報(bào)道尚不多見，本研究可供類似研究借鑒。

臨床研究發(fā)現(xiàn)血瘀證患者一般血液均有“濃、黏、凝、聚”的改變，故將凝血指標(biāo)異常、血液流變學(xué)列為血瘀證實(shí)驗(yàn)室診斷標(biāo)準(zhǔn)[12]。通過本研究，發(fā)現(xiàn)黃芪丹參比例為1∶3時(shí)對(duì)氣虛血瘀證大鼠活血效果較好,通過丹參黃芪的協(xié)同增效作用改善了“濃、黏、凝、聚”的血瘀狀態(tài)。本研究主要偏重于血瘀指標(biāo)，中醫(yī)認(rèn)為“氣虛”和免疫功能密切相關(guān)，在后續(xù)研究中擬引入免疫功能試驗(yàn)，通過多指標(biāo)、多效應(yīng)的綜合平衡法進(jìn)一步評(píng)價(jià)其益氣活血的配伍機(jī)制。

[1]黃麗，雷磊.氣虛血瘀證動(dòng)物模型研究應(yīng)用現(xiàn)狀[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2007，13（11）：81-83.

[2]尹軍祥，田金洲，王永炎，等.氣虛血瘀證動(dòng)物模型制作方法與評(píng)價(jià)[J].中華中醫(yī)藥雜志，2006，21（7）：424-426.

[3]寧倫，丁成華，竇倩.氣虛血瘀證動(dòng)物模型研究概況[J].山東中醫(yī)雜志，2013，32（7）：508-510.

[4]袁穎，郭忻，金素安，等.黃芪當(dāng)歸不同配伍對(duì)氣虛血瘀證大鼠血液流變學(xué)及血清干擾素-γ、白細(xì)胞介素-4的影響[J].中國中醫(yī)藥信息雜志，2013，20（11）：44-46.

[5]榮曉鳳，李榮亨，呂霞.氣虛血瘀證大鼠NO、ET、TXB2、6-keto-PGF1α的變化及意義[J].中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，2009，15（12）：914-916.

[6]王宏，曲紹春，于曉風(fēng).血栓心脈寧片對(duì)急性血瘀模型大鼠血小板功能及血液流變學(xué)的影響[J].中國老年醫(yī)學(xué)雜志，2010，30（22）：3335-3337.

[7]楊振，鄭友蘭，洪鐵.丹參黃芪提取物對(duì)大鼠血管內(nèi)皮損傷的保護(hù)作用[J].長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，26（2）：183-184.

[8]苗蘭，劉建勛，任建勛.氣虛血瘀證模型大鼠血清蛋白質(zhì)組學(xué)初步研究[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2009，15（9）：42-46.

[9]江承平，劉福，李毅.參附注射液對(duì)腦缺血再灌注大鼠MDA、SOD、TXB2及6-keto-PGF1α的影響及意義[J].中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，41（2）：124-127.

[10]白如君，褚偉，徐潔.丹參提取液對(duì)糖尿病大鼠血漿ET、TXB2、6-keto-PGF1α的影響[J].湖北中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2006，8（3）：11-12.

[11]柳潤(rùn)輝，蘇娟，徐?？?藥對(duì)“丹參-黃芪”有效組分的最佳配伍配比研究[J].中國藥學(xué)雜志，2006，41（11）：815-817.

[12]杜金行，史載祥.血瘀證中西醫(yī)結(jié)合診療指南[C].武漢：第八次全國中西醫(yī)結(jié)合血瘀證及活血化瘀研究學(xué)術(shù)大會(huì)，2011：37.

Effect of com patibility of Astragalus Membranaceus and Salvia M iltiorrhiza in different proportionon hemorheology and contents of TXB2,6-keto-PGF1αin blood of Qi deficiency and blood stasis ratmodel

ZHU Lixia1ZHANG Yingfeng2▲
1.Department of Traditional Chinese Medicine,Zhujiang Hospital of South Medical University,Guangdong Province, Guangzhou 510282,China;2.School of Chinese Medicine,Guangzhou University of Chinese Medicine,Guangdong Province,Guangzhou 510006,China

Objective To explore the influence of the different compatibility proportion of Astragalus Membranaceus and Salvia Miltiorrhiza on Qi deficiency and blood stasis ratmodel on hemorheology and the content of TXB2and 6-keto-PGF1α.Methods The SD rats were randomly divided into normal group,model group and five compatibility groups,10 rats in each group.The Qi deficiency and blood stasis ratmodel was replicated by restricted diet,forced swimming and norepinephrine subcutaneous injecting.The ratswere orally given with different proportion of dry freezing water decoction,the proportions of Astragalus Membranaceus and Salvia Miltiorrhiza were 5∶1,3∶1,1∶1,1∶3,1∶5 respectively,and the total dosage were all 15 g/kg.The hemorheology and the content of TXB2and 6-keto-PGF1αwere determined.Results The hemorheology parameters and TXB2were significantly increased and 6-keto-PGF1αlowered in Qi deficiency,compared with normal group,the differences were statistically significant(P＜0.01),the Qi deficiency and blood stasis ratmodels were successful.The compatibility of Astragalus Membranaceus and Salvia Miltiorrhiza in proportion of 3∶1,1∶1,1∶3,1∶5 groups showed improved blood stasis state,TXB2content was decreased,6-keto-PGF1αand 6-keto-PGF1α/TXB2ratio were increased,comparingwith model group,the differenceswere statistically significant (P＜0.01).Conclusion The different proportion is effective,the ratio of1∶3 has the best effect.

Astragalus Membranaceus and Salvia Miltiorrhiza coupletmedicine;Qi deficiency and blood stasis syndrome;Hemorheology;Compatibility study

R963

A

1673-7210（2014）08（a）-0013-04

2014-04-17本文編輯：蘇暢）

國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（編號(hào)30701097）。

▲通訊作者