姚　剛，張彥君，李勝偉

(1.湖北科技學(xué)院藥學(xué)院，湖北 咸寧 437100；2.重慶萊美藥業(yè)股份有限公司，重慶 401336)

雜質(zhì)的研究是藥物研發(fā)的一項(xiàng)重要內(nèi)容，有時(shí)藥物雜質(zhì)會(huì)引起藥物不良反應(yīng)[1]，隨著時(shí)代的進(jìn)步、科技水平的提高，人們對(duì)藥品上市前必須進(jìn)行質(zhì)量、安全性和效能科學(xué)評(píng)價(jià)的重要性有了更加充分的認(rèn)識(shí)，而藥物雜質(zhì)與藥品質(zhì)量、安全性及效能密切相關(guān)，藥物雜質(zhì)研究在藥物開發(fā)中的重要性越來(lái)越受到重視。對(duì)雜質(zhì)進(jìn)行系統(tǒng)化的研究并將其控制在安全合理的限度范圍內(nèi)將直接關(guān)系到藥物的質(zhì)量和安全性。非布索坦[化合物Ⅲ，2-(3-氰基-4-異丁氧苯基-苯基)-4-甲基-5-噻唑甲酸，F(xiàn)B]為新一代黃嘌呤氧化酶抑制劑，是臨床上用于治療高尿酸癥的痛風(fēng)藥物[2]。其主要合成路線為：

作者分析了非布索坦合成過(guò)程中可能產(chǎn)生的雜質(zhì)，并用化學(xué)合成方法制備了主要雜質(zhì)，對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行了表征。

1　非布索坦雜質(zhì)的產(chǎn)生分析

由化合物Ⅰ合成化合物Ⅱ的過(guò)程為：化合物Ⅰ反應(yīng)生成醛肟(化合物Ⅳ)，化合物Ⅳ脫水之后轉(zhuǎn)化為化合物Ⅱ。主要反應(yīng)如下：

而化合物Ⅱ轉(zhuǎn)化為化合物Ⅲ主要是在乙醇溶劑中加入NaOH水解，然后再用HCl調(diào)pH值，最終得到化合物Ⅲ。

分析以上的合成路線，可以認(rèn)為產(chǎn)物中可能存在未反應(yīng)完全的化合物Ⅰ(雜質(zhì)A)、Ⅱ(雜質(zhì)B)、Ⅳ(雜質(zhì)F)，及化合物Ⅰ、Ⅳ在最后一步水解的過(guò)程中產(chǎn)生的水解產(chǎn)物(雜質(zhì)E、D)。而化合物Ⅲ即非布索坦苯環(huán)上的氰基在堿性條件下也可能發(fā)生水解生成水解產(chǎn)物(雜質(zhì)C)。其中化合物Ⅰ即雜質(zhì)A為起始原料，化合物Ⅱ即雜質(zhì)B為合成非布索坦中間體，故只需取樣送檢即可。而化合物Ⅳ的水解產(chǎn)物即雜質(zhì)D已有學(xué)者進(jìn)行過(guò)研究并確認(rèn)其結(jié)構(gòu)[3]。作者主要對(duì)化合物Ⅲ的堿性水解產(chǎn)物即雜質(zhì)C(FBZC)、化合物Ⅰ的水解產(chǎn)物即雜質(zhì)E(FBZE)及未反應(yīng)完全的化合物Ⅳ即雜質(zhì)F(FBZF)進(jìn)行研究，其結(jié)構(gòu)見表1。

表1　非布索坦的3種雜質(zhì)結(jié)構(gòu)

2　實(shí)驗(yàn)

2.1　試劑與儀器

無(wú)水乙醇、四氫呋喃、乙酸乙酯、氫氧化鈉、濃鹽酸，分析純，成都科龍化工試劑廠；鹽酸羥胺，分析純，天津光復(fù)科技發(fā)展有限公司。

DLSB-10/30型低溫冷卻液循環(huán)泵、SHB-Ⅲ型循環(huán)水式多用真空泵，鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司；R201 D-Ⅱ型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(2L)、SD-142型恒速攪拌器，上海申順生物科技有限公司；ZF-1型三用紫外儀，上海精科實(shí)業(yè)有限公司；GF254型薄層層析硅膠板，青島海洋化工廠。

2.2　方法

2.2.12-(3-羧基-4-異丁氧基-苯基)-4-甲基-5-噻唑甲酸(FBZC)的合成[4-10]

在500 mL反應(yīng)瓶中投入Fe-In26.0 g、C2H5OH 60 mL，滴加5 mol·L-1NaOH溶液36 mL， 加熱回流至60 ℃溶液澄清，回流反應(yīng)100 h，滴加0.5 mol·L-1鹽酸溶液360 mL，有晶體析出，滴加完畢，降溫析晶2 h，抽濾，用無(wú)水乙醇洗滌晶體，減壓干燥4 h，取樣送檢。

2.2.22-(3-甲酰基-4-異丁氧基-苯基)-4-甲基-5-噻唑甲酸 (FBZE)的合成[4-10]

在500 mL 反應(yīng)瓶中投入Fe-In410 g、無(wú)水乙醇150 mL、5 mol·L-1NaOH溶液8.7 mL，升溫至55 ℃時(shí)溶液澄清，反應(yīng)一定時(shí)間，加純化水150 mL，加EA150 mL，加1 mol·L-1鹽酸溶液40 mL至pH=2左右，靜置，溶液分層，萃取，分別用純化水洗滌有機(jī)相，用EA洗滌水相，合并有機(jī)相轉(zhuǎn)至單口瓶中旋干，取樣送檢。

2.2.32-(3-羥基亞胺甲基-4-異丁氧苯基)-4-甲基-5-噻唑甲酸乙酯 (FBZF)的合成[4-10]

在500 mL反應(yīng)瓶中投入化合物Ⅰ 10 g、THF 300 mL，攪拌溶解至澄清，加純化水30 mL、NH2OH·HCl 3 g，加熱至36 ℃反應(yīng)45 min，取樣點(diǎn)板，化合物Ⅰ斑點(diǎn)消失時(shí)反應(yīng)完全。溶液略顯混濁，滴加純化水500 mL，滴加完畢未見有大量晶體析出，降溫析晶2 h，抽濾，用100 mL純化水洗滌晶體，減壓干燥8 h，取樣送檢。

3　結(jié)果與討論

3.1　FBZC的HPLC圖譜和MS圖譜(圖1、圖2)

圖1　FBZC的HPLC圖譜

圖2　FBZC的MS圖譜

3.2　FBZE的HPLC圖譜和MS圖譜(圖3、圖4)

圖3　FBZE的HPLC圖譜

3.4　討論

(1)將制備雜質(zhì)與非布索坦產(chǎn)品分別進(jìn)行HPLC

圖4　FBZE的MS圖譜

3.3　FBZF的HPLC圖譜和MS圖譜(圖5、圖6)

圖5　FBZF的HPLC圖譜

圖6　FBZF的MS圖譜

分析，F(xiàn)BZC的保留時(shí)間為14.072 min，F(xiàn)BZE的保留時(shí)間為9.485 min，F(xiàn)BZF的保留時(shí)間為26.219 min，與非布索坦產(chǎn)品中雜質(zhì)峰的保留時(shí)間基本吻合(圖7)。通過(guò)MS對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行確認(rèn)，確定FBZC為2-(3-羧基-4-異丁氧基-苯基)-4-甲基-5-噻唑甲酸； FBZE為2-(3-甲?；?4-異丁氧基-苯基)-4-甲基-5-噻唑甲酸；FBZF為2-(3-羥基亞胺甲基-4-異丁氧苯基)-4-甲基-5-噻唑甲酸乙酯。

圖7　FB的HPLC圖譜

(2)在FBZC的制備過(guò)程中，由于氰基在堿性條件下的水解較為緩慢，條件也比較苛刻，反應(yīng)過(guò)程中無(wú)水乙醇會(huì)有所損耗，可能會(huì)導(dǎo)致原料析出，影響反應(yīng)，故每隔12 h左右補(bǔ)加一定量的無(wú)水乙醇。由于FBZC由非布索坦水解所致,與非布索坦的結(jié)構(gòu)很相似，很難用精制的方法除去。因此，必須嚴(yán)格控制水解的溫度及酸堿的量，有效減少非布索坦的水解，從而減少FBZC的含量。

(3)FBZE是起始原料的水解產(chǎn)物，F(xiàn)BZF是制備中間體時(shí)未反應(yīng)完全的醛肟，故只需在制備中間體的過(guò)程中進(jìn)行重結(jié)晶即可有效地減少起始原料及醛肟的含量，從而減少FBZE、FBZF的含量，制備得到質(zhì)量?jī)?yōu)良的非布索坦。

4　結(jié)論

為研究非布索坦主要雜質(zhì)的產(chǎn)生原因及結(jié)構(gòu)，對(duì)非布索坦合成路線進(jìn)行了分析，用化學(xué)合成的方法制備得到在合成過(guò)程中可能產(chǎn)生的主要雜質(zhì)：2-(3-羧基-4-異丁氧基-苯基)-4-甲基-5-噻唑甲酸(FBZC)、2-(3-甲酰基-4-異丁氧基-苯基)-4-甲基-5-噻唑甲酸(FBZE)、2-(3-羥基亞胺甲基-4-異丁氧苯基)-4-甲基-5-噻唑甲酸乙酯(FBZF)，其結(jié)構(gòu)經(jīng)HPLC和MS得到了確認(rèn)。

參考文獻(xiàn)：

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