李 超,劉 品,曹艷姿,吉 紅,林亞秋
(1 西北農(nóng)林科技大學(xué) 動(dòng)物科技學(xué)院,陜西 楊凌 712100;2 西南民族大學(xué) 生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院,四川 成都 610041)
肝X受體(Liver X receptor,LXR)是一種轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子,屬核激素受體家族成員,其活性受到膽固醇降解產(chǎn)物氧化型膽固醇的調(diào)節(jié)[1]。有研究發(fā)現(xiàn),LXR可以調(diào)節(jié)膽固醇代謝[2]、脂肪酸合成[3]、碳水化合物代謝[4]等過程中相關(guān)基因的表達(dá)。在哺乳動(dòng)物上的研究發(fā)現(xiàn),LXR有2個(gè)亞型:LXRα和LXRβ[5]。LXRα在脂質(zhì)代謝旺盛的組織中表達(dá)豐度較高,如肝臟、脂肪組織、腸等,而LXRβ的表達(dá)較為廣泛。對幾種魚的LXR基因進(jìn)行同源性分析,結(jié)果表明,魚LXRα與脊椎動(dòng)物L(fēng)XRα序列相似性較高[6-7]。有研究確認(rèn),魚上不存在LXRβ基因,其原因可能是魚在物種進(jìn)化過程中該基因已丟失[8]。目前已在紅鰭東方鲀[9]、斑馬魚[8](Daniorerio)、虹鱒[6](Oncorhynchusmykiss)、大西洋鮭[6](Salmosalar)等魚類上克隆獲得了LXRα基因序列。
LXR具有調(diào)節(jié)組織脂質(zhì)生物合成的作用。Peet等[10]首次報(bào)道了固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白-1c(Sterol regulatory element binding protein-1c,SREBP1c)及其目的基因在LXRα基因缺失小鼠肝臟中的表達(dá)量顯著下降,其下游目的基因中的脂肪酸合酶(Fatty acid synthase,FAS)和?;o酶A去飽和酶(Stearoyl-CoA desaturase,SCD)基因均是肝臟脂肪酸合成中的關(guān)鍵基因[11]。隨后的研究表明,敲除小鼠LXR基因后不僅能降低其肝臟脂質(zhì)合成基因的表達(dá),還能降低肝脂含量及血脂含量[12-14]。另一方面,LXR激動(dòng)劑(T0901317)可顯著促進(jìn)野生型小鼠SREBP-1c、FAS和SCD-1基因的表達(dá),而對LXR缺失型小鼠相關(guān)基因的表達(dá)沒有顯著影響[12,15]。有學(xué)者研究了魚LXRα在各個(gè)組織中的表達(dá)情況及激素、營養(yǎng)素等對LXRα的調(diào)控,并評估了其在脂質(zhì)代謝中的調(diào)控作用[6,8-9,16-17]。Cruz-Garcia等[6]在大西洋鮭和虹鱒上克隆獲得了LXRα基因,并比較了其在2種魚各個(gè)組織中的表達(dá)情況,同時(shí)還研究了植物油替代魚油對大西洋鮭肝臟LXRα表達(dá)的影響。Cruz-Garcia等[17]發(fā)現(xiàn),虹鱒肌細(xì)胞中LXRα的轉(zhuǎn)錄不受腫瘤壞死因子-α(Tumor necrosis factor,TNFα)的調(diào)控,而胰島素、生長激素可上調(diào)LXRα的表達(dá)。
近年來,越來越多的研究指出,n-3 高不飽和脂肪酸(n-3 highly unsaturated fatty acid,n-3 HUFA)具有降低機(jī)體脂質(zhì)蓄積的作用。Al-Hasani等[18]指出,n-3 HUFA可以降低大鼠的白色脂肪組織含量,并抑制肥胖的發(fā)生。Madsen等[19]研究發(fā)現(xiàn),n-3 HUFA可以抑制3T3-L1脂肪細(xì)胞的脂肪酸合成,促進(jìn)脂肪酸的氧化從而降低甘油三酯的蓄積。在魚上,有學(xué)者報(bào)道了n-3 HUFA可顯著降低大西洋鮭[20]和草魚[21]的脂質(zhì)蓄積。本課題組研究證實(shí),n-3 HUFA能夠抑制草魚脂質(zhì)合成及其轉(zhuǎn)運(yùn)能力,并通過影響脂代謝相關(guān)基因的表達(dá)降低肝胰臟及腹腔脂肪的沉積[22-23]。鑒于LXRα在脂肪酸合成中的重要作用,研究n-3 HUFA對LXRα表達(dá)的影響,將有助于闡明n-3 HUFA降低機(jī)體脂肪蓄積的分子調(diào)控機(jī)制。
草魚(Ctenopharyngodonidellus)是我國特有的魚類,也是淡水養(yǎng)殖產(chǎn)量最大的魚類,隨著飼料中脂質(zhì)含量及能量水平的提高,草魚脂肪肝及腹腔脂肪組織過度發(fā)育現(xiàn)象比較嚴(yán)重。本試驗(yàn)對草魚LXRα的cDNA序列進(jìn)行了克隆,分析了其在草魚不同組織中的表達(dá)狀況,并研究了n-3 HUFA飼喂后對草魚肝胰臟組織LXRα基因表達(dá)的影響,以探討LXRα基因的功能、作用機(jī)理,為研究魚類脂肪沉積調(diào)控提供參考資料和理論依據(jù)。
SYBR?PremixExTaqTMⅡ、 RNAiso Plus總RNA提取試劑盒、pMD19-T載體 (TaKaRa公司),DEPC原液(Sigma公司),RevertAidTMFirst Strand cDNA Synthesis Kit、TaqDNA Polymerase (Fermentas公司),DNA回收試劑盒、DL2000 (天根生化科技有限公司),dNTP (Hualvyuan Biotechnology)。其余試劑均為國產(chǎn)分析純試劑。引物由上海生物工程有限公司合成。
草魚(體質(zhì)量500~800 g/尾,購自陜西楊凌康樂市場)解剖后取肝胰臟、肌肉、心臟、鰓、精巢、腎臟、腦、脾臟、腸、腹腔脂肪等組織,液氮冷凍后-80 ℃保存,用于LXRα基因克隆和組織差異表達(dá)檢測,每種組織取3份樣品進(jìn)行測定。
n-3 HUFA飼養(yǎng)試驗(yàn)用草魚幼魚購自陜西周至縣某漁場。將72尾健康且規(guī)格相近的草魚幼魚(初始體質(zhì)量(40.32 ± 4.71) g/尾),分為2組,每組3個(gè)重復(fù),飼養(yǎng)于6個(gè)水族箱 (118 cm×46 cm×60 cm) 中。配制等氮等能(粗蛋白35.4%,粗脂肪 5.2%)的2組飼料(豬油組(LO group)和魚油組(FO group) 飼料),2組飼料共有組分質(zhì)量分?jǐn)?shù)為:魚粉6%、豆粕15%、菜粕20%、棉粕20%、肉骨粉2%、次粉22.5%、血粉2%、磷酸二氫鈣1.5%、多維預(yù)混料1%、礦物質(zhì)預(yù)混料4%、膨潤土1%、氯化膽堿0.5%、Cr2O30.2%、亞油酸1%、亞麻酸1%;豬油組油脂組分質(zhì)量分?jǐn)?shù)為豬油2.4%、亞麻油 1.7% 和大豆油0.2%,魚油組油脂組分質(zhì)量分?jǐn)?shù)為魚油2.6%、亞麻油1.4%和大豆油0.3%。 豬油組和魚油組飼料中n-3 HUFA添加量理論值分別為0 和0.52%,但經(jīng)氣相色譜法測定,其n-3 HUFA實(shí)際含量分別為0.11%和0.50%。2組草魚幼魚分別投喂豬油和魚油組飼料,進(jìn)行為期95 d的飼養(yǎng)試驗(yàn),每日投喂2次(09:00,17:00),試驗(yàn)期間每天光照時(shí)間為12 h(8:00到20:00)。每天換水2次,控制水溫在(24.0±1.0) ℃,溶解氧>5 mg/L,整個(gè)飼養(yǎng)期間水質(zhì)均符合養(yǎng)殖標(biāo)準(zhǔn)。飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束后,解剖草魚取肝胰臟組織,液氮冷凍并迅速保存于-80 ℃,測定時(shí)每個(gè)處理取6個(gè)樣品進(jìn)行測定。
根據(jù)GenBank中斑馬魚LXRα基因序列 (GenBank登錄號(hào):BC092160)的保守區(qū)域,設(shè)計(jì)并合成LXRα克隆引物L(fēng)XRα 1,引物序列見表1。
表1 LXRα基因克隆及PCR檢測引物
用RNAiso Plus總RNA提取試劑盒提取草魚肝胰臟組織的總RNA,用核酸定量儀 (NANODROP 1000,Thermo公司) 測定RNA純度和濃度。取1 μg總RNA,按照Fermentas RevertAidTMFirst Strand cDNA Synthesis Kit #K1621試劑盒推薦的方法,以O(shè)ligo (dT) 為引物,合成cDNA第一鏈。
以合成的cDNA第一鏈為模板,對草魚LXRαcDNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增,PCR反應(yīng)體系為25 μL:滅菌的二蒸水16.85 μL、2.5 mmol/L dNTP Mix 2 μL、PCR buffer (NH)2SO42.5 μL、25 mmol/L MgCl21.5 μL、cDNA 1 μL、10 μmol/L 上下游引物各0.5 μL、5 U/μLTaqDNA Polymerase 0.15 μL。PCR程序:94 ℃ 預(yù)變性5 min;94 ℃ 45 s,50 ℃ 45 s,72 ℃ 60 s,38個(gè)循環(huán);72 ℃延伸10 min。RT-PCR產(chǎn)物經(jīng)10 g/L瓊脂糖凝膠電泳分離后,利用DNA回收試劑盒回收目的片段。將目的片段與pMD19-T載體連接,并轉(zhuǎn)化到DH5α菌株,篩選陽性克隆,送上海生物工程有限公司進(jìn)行測序。
采用DNAStar來編輯和組裝DNA序列,用DNAman軟件進(jìn)行序列同源性比對、系統(tǒng)進(jìn)化樹制作及推導(dǎo)蛋白質(zhì)序列校對。在ExPASy服務(wù)器上使用ProtParam軟件對草魚LXRα基因編碼蛋白的理化性質(zhì)進(jìn)行分析,利用Smart:http://smart.embl-heidelberg.de分析蛋白質(zhì)功能域。利用DNASTAR、Clustalx1.83和BioEdit等軟件對LXRα基因進(jìn)行輔助分析。
根據(jù)克隆獲得的草魚LXRα基因序列和GeneBank中草魚β-actin基因序列(GenBank登錄號(hào):DQ211096),應(yīng)用Primer Premier 5.0軟件設(shè)計(jì)特異擴(kuò)增引物L(fēng)XRα 2和β-actin 1(表1)。
用RNAiso Plus總RNA提取試劑盒提取草魚肝胰臟、肌肉、心臟、鰓、精巢、腎臟、腦、脾臟、腸、腹腔脂肪等10種組織的總RNA,核酸定量儀測定RNA純度后,取1 μg總RNA合成cDNA第一鏈。以合成的cDNA第一鏈為模板,PCR擴(kuò)增草魚LXRα基因,PCR反應(yīng)體系同1.3,PCR程序?yàn)椋?4 ℃ 預(yù)變性5 min;94 ℃ 45 s,57 ℃ 45 s,72 ℃ 60 s,38個(gè)循環(huán);72 ℃延伸10 min。采用半定量(Semi-quantitative,SQ)RT-PCR檢測LXRα基因在草魚10種組織中的表達(dá)情況。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)10 g/L瓊脂糖凝膠電泳后,在Wealtec凝膠成像系統(tǒng)拍照,鑒定其亮度和特異性,并用Dophin-1D凝膠分析軟件進(jìn)行分析。分別測定2條擴(kuò)增產(chǎn)物條帶的光密度值,計(jì)算LXRα與β-actin的光密度之比。
根據(jù)克隆得到的草魚LXRαcDNA的序列,設(shè)計(jì)并合成實(shí)時(shí)定量PCR(Real-time quantitative PCR,qRT-PCR)特異引物L(fēng)XRα 3和β-actin 2(表1)。
提取飼喂n-3 HUFA后草魚肝胰臟總RNA,反轉(zhuǎn)錄合成cDNA等一鏈備用。用CFX96 qRT-PCR檢測系統(tǒng) (Bio-Rad,USA)檢測LXRα在草魚肝胰臟組織中的表達(dá)情況,反應(yīng)體系為20 μL:10 mmol/μL的上下游引物各0.6 μL,1 μL cDNA,10 μL 2×SYBR?PremixExTaqTMⅡ S,7.8 μL滅菌水。反應(yīng)條件為:95 ℃ 10 s,95 ℃ 15 s,60 ℃ 15 s,40個(gè)循環(huán)。根據(jù)擴(kuò)增曲線得到循環(huán)閾值(Ct),計(jì)算出目標(biāo)基因LXRα相對于內(nèi)參基因β-actin的表達(dá)倍數(shù),從而制作出相對定量的圖表。
試驗(yàn)數(shù)據(jù)用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(Mean±SD)”表示;采用t檢驗(yàn)進(jìn)行顯著性分析,P<0.05為差異顯著,P<0.01為差異極顯著。
本試驗(yàn)獲得了1 230 bp的LXRαcDNA序列(圖1),其GenBank注冊號(hào)為:FJ965309,經(jīng)分析該序列編碼409個(gè)氨基酸 (圖2),預(yù)測其蛋白分子式為C2083H3343N581O611S30,分子質(zhì)量為 47 263.7 u,等電點(diǎn)(pI)為7.91,半衰期為30 h;經(jīng)BLAST比對和DNAMAN分析發(fā)現(xiàn),該蛋白質(zhì)具有哺乳動(dòng)物L(fēng)XRS的特征:包括DNA結(jié)合位點(diǎn)(DBD)、p-box,配體結(jié)合域(LBD)、激活功能-2(AF-2)區(qū)域、D-box、D區(qū)域(D region)和屬于2個(gè)鋅指結(jié)構(gòu)的8個(gè)半胱氨酸。草魚LXRα基因編碼的氨基酸序列與鯉(Cyprinuscarpio)、斑馬魚(Daniorerio)、大西洋鮭(Salmosalar)、虹鱒(Oncorhynchusmykiss)、小鼠(Musmusculus)、人(Homosapiens)、豬(Susscrofa)、雞(Gallusgallus)LXRα基因編碼的氨基酸同源性分別為100%,94.6%,89.5%,89.2%,71.9%,71.1%,70.7%和79%。草魚LXRα系統(tǒng)進(jìn)化特征如圖3所示。
圖1 草魚肝胰臟LXRα cDNA的RT-PCR結(jié)果
以β-actin基因?yàn)閮?nèi)參,采用SQ RT-PCR方法,對草魚各組織的LXRαmRNA表達(dá)情況進(jìn)行檢測,所有樣品的擴(kuò)增條帶經(jīng)Dophin DOC數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換系統(tǒng)轉(zhuǎn)換后,計(jì)算各組織樣擴(kuò)增產(chǎn)物L(fēng)XRα與β-actin的光密度比值,即得LXRα基因的相對表達(dá)豐度。由圖4可知,LXRα基因在草魚肝胰臟、肌肉、心臟、鰓、精巢、腎臟、腦、脾臟、腸、腹腔脂肪組織中均有表達(dá),其中以精巢中的表達(dá)豐度最高,在腦中表達(dá)豐度次之,在肌肉中的表達(dá)豐度最低。
圖2 草魚和其他物種LXRα氨基酸序列分析
續(xù)圖2 草魚和其他物種LXRα氨基酸序列分析
圖3 草魚與其他物種LXRα氨基酸序列的系統(tǒng)進(jìn)化樹
圖4 LXRα基因在草魚各組織中的相對表達(dá)豐度
飼喂n-3 HUFA后草魚肝胰臟LXRα基因的表達(dá)情況見圖5。
圖5 n-3 HUFA對草魚肝胰臟LXRα基因表達(dá)的影響
由圖5可以看出,飼喂n-3 HUFA可極顯著抑制草魚LXRα基因的表達(dá)水平(P<0.01)。
眾多學(xué)者研究了LXRα在魚上的作用及其調(diào)控機(jī)制[6,8-9,16-17]。本試驗(yàn)采用RT-PCR方法獲得了草魚的LXRαcDNA序列,比較了草魚LXRα與其他幾個(gè)物種的同源性關(guān)系,并分析了LXRα基因在草魚10種組織中的表達(dá)情況,最后檢測了飼喂n-3 HUFA后對草魚肝胰臟LXRα基因表達(dá)的影響。
有研究表明,紅鰭東方鲀基因組全序列中含有一個(gè)基因序列與人類LXRα的LBD區(qū)相似度達(dá)75%[9]。同時(shí),在斑馬魚上也發(fā)現(xiàn)了一個(gè)與哺乳動(dòng)物L(fēng)XRα蛋白序列相似性極高的一段序列[8]。此外,有學(xué)者比較了人、老鼠、斑馬魚和青蛙的LXRα編碼DBD、LBD序列,結(jié)果顯示,LXRα的DBD和LBD 2個(gè)蛋白區(qū)域在魚、哺乳動(dòng)物和兩棲動(dòng)物中高度保守[7]。本研究發(fā)現(xiàn),草魚的LXRα氨基酸序列與其他物種的同源性為70.7%~100%。多重序列比較表明,草魚LXRα基因同鯉魚和斑馬魚的關(guān)系較近,這與這幾個(gè)物種的分類地位相符。表明LXRα基因在不同物種間具有高度的保守性,也說明了它們在物種進(jìn)化中具有重要的生物學(xué)作用。
組織表達(dá)譜分析結(jié)果表明,LXRα在草魚肝胰臟、肌肉、心臟、鰓、精巢、腎臟、腦、脾臟、腸、腹腔脂肪等10種組織中均有表達(dá),但表達(dá)豐度存在差異,在精巢中表達(dá)豐度最高,在腦、脾、腎中的表達(dá)豐度次之,在肌肉中的表達(dá)豐度最低,這一結(jié)果與在大西洋鮭和虹鱒等魚類上的研究結(jié)果[6]存在一定的差異。Cruz-Garcia等[6]研究發(fā)現(xiàn),對大西洋鮭而言,LXRα在腸中的表達(dá)豐度最高,在腎臟中的表達(dá)豐度最低,而對于虹鱒而言LXRα在脾臟中的表達(dá)豐度最高,在肝臟中的表達(dá)豐度最低,這種差異可能是魚種類及樣品間營養(yǎng)和生理狀況的不同引起的,也可能是由于LXRα基因在不同魚中的調(diào)節(jié)模式存在差異,或與試驗(yàn)魚生長階段不同有關(guān)。在小鼠上的研究發(fā)現(xiàn),LXRα在代謝活性強(qiáng)的組織中表達(dá)豐度較高,如肝臟、脂肪、腸道[24-25]。而在人上的研究發(fā)現(xiàn),LXRα在脂質(zhì)代謝旺盛的組織,如肝臟、腎臟表達(dá)豐度較高[26]。以上結(jié)果均表明,LXRα基因在不同組織中表達(dá)豐度的差異與組織中膽固醇和脂質(zhì)代謝有較大的相關(guān)性。肝胰臟是草魚參與脂質(zhì)代謝的重要組織,而本研究中LXRα在肝胰臟中的表達(dá)豐度并非最高,這可能與試驗(yàn)魚生理狀態(tài)有關(guān)。
不飽和脂肪酸在LXRα調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝的過程中起著十分重要的作用。Bouwens等[27]研究發(fā)現(xiàn),多不飽和脂肪酸處理人外周血單核細(xì)胞后,可顯著降低LXR及其下游基因的表達(dá)。有研究發(fā)現(xiàn),共軛亞油酸可下調(diào)大鼠肝臟LXRα基因的表達(dá)[28],也可直接下調(diào)3T3-L1脂肪細(xì)胞LXRα基因的表達(dá)[29]。在人腎細(xì)胞的研究中發(fā)現(xiàn),不飽和脂肪酸可以競爭氧化固醇與LXRα的結(jié)合位點(diǎn),干擾LXRα與氧化固醇的結(jié)合,從而影響脂肪酸代謝基因的表達(dá)[30]。在魚上也發(fā)現(xiàn),用亞油酸和亞麻酸處理虹鱒脂肪細(xì)胞,可下調(diào)LXRα基因的表達(dá)水平[16]。但是,富含 n-3 HUFA的魚油日糧并未對大鼠LXRα的表達(dá)產(chǎn)生直接的抑制作用,僅對SREBP-1c及其相關(guān)基因的表達(dá)有所抑制[31]。已知LXR可與SREBP-1c基因啟動(dòng)子區(qū)LXRE結(jié)合,從而啟動(dòng)SREBP-1c的轉(zhuǎn)錄[30]。有報(bào)道指出,不飽和脂肪酸對LXR活性的抑制作用是通過下調(diào)LXR的目的基因來實(shí)現(xiàn)的[32]。還有報(bào)道指出,不飽和脂肪酸可以干擾LXR/RXR復(fù)合體結(jié)合到DNA的調(diào)控原件上,進(jìn)而影響目的基因的轉(zhuǎn)錄[33],但不影響LXRα的轉(zhuǎn)錄。n-3 HUFA是過氧化物酶體增殖物激活受體α (Peroxisome proliferater activated receptor,PPARα)的天然配體,而LXRα是PPARα的目的基因[34],因此可推測n-3 HUFA可通過PPARα途徑影響LXRα的表達(dá)。這表明,不飽和脂肪酸對LXRα的調(diào)節(jié)機(jī)制在不同動(dòng)物間可能存在差異。本試驗(yàn)前期研究結(jié)果顯示,n-3 HUFA可通過抑制草魚LXRα下游脂蛋白脂肪酶(lipoprotein lipase,LPL)基因的表達(dá)來降低草魚肝胰臟及腹腔脂肪的沉積[22-23]。而本研究中,草魚攝食n-3 HUFA后,肝胰臟LXRα的表達(dá)豐度顯著降低。n-3 HUFA是直接還是間接調(diào)控LXRα基因的表達(dá)尚需進(jìn)一步探究。
[參考文獻(xiàn)]
[1] Aranda A,Pascual A.Nuclear hormone receptors and gene expression [J].Physiological Reviews,2001,81(3):1269-1304.
[2] Steffensen K R,Gustafsson J ?.Putative metabolic effects of the liver X receptor (LXR) [J].Diabetes,2004,53(suppl 1):S36-S42.
[3] Schultz J R,Tu H,Luk A,et al.Role of LXRs in control of lipogenesis [J].Genes & Development,2000,14(22):2831-2838.
[4] Mitro N,Mak P A,Vargas L,et al.The nuclear receptor LXR is a glucose sensor [J].Nature,2006,445(7124):219-223.
[5] 吳 靜,張志文,管又飛.LXRs 在脂質(zhì)代謝中的作用 [J].生理科學(xué)進(jìn)展,2004,35(1):69-72.
Wu J,Zhang Z W,Guan Y F.Regulation of lipid metabolism by liver X-activated receptors [J].Progress in Physiological Sciences,2004,35(1):69-72.(in Chinese)
[6] Cruz-Garcia L,Minghetti M,Navarro I,et al.Molecular cloning,tissue expression and regulation of liver X Receptor (LXR) transcription factors of Atlantic salmon (Salmosalar) and rainbow trout (Oncorhynchusmykiss) [J].Comparative Biochemistry and Physiology:Part B.Biochemistry and Molecular Biology,2009,153(1):81-88.
[7] Reschly E J,Ai N,Welsh W J,et al.Ligand specificity and evolution of liver X receptors [J].The Journal of Steroid Biochemistry and Molecular Biology,2008,110(1):83-94.
[8] Archer A,Lauter G,Hauptmann G,et al.Transcriptional activity and developmental expression of liver X receptor (lxr) in zebrafish [J].Developmental Dynamics,2008,237(4):1090-1098.
[9] Maglich J M,Caravella J A,Lambert M H,et al.The first completed genome sequence from a teleost fish (Fugurubripes) adds significant diversity to the nuclear receptor superfamily [J].Nucleic Acids Research,2003,31(14):4051-4058.
[10] Peet D J,Turley S D,Ma W,et al.Cholesterol and bile acid metabolism are impaired in mice lacking the nuclear oxysterol receptor LXR alpha [J].Cell,1998,93:693-704.
[11] Eberle D,Hegarty B,Bossard P,et al.SREBP transcription factors: master regulators of lipid homeostasis [J].Biochimie,2004,86(11):839.
[12] Schultz J R,Tu H,Luk A,et al.Role of LXRs in control of lipogenesis [J].Genes & Development,2000,14(22):2831-2838.
[13] Schuster G U,Parini P,Wang L,et al.Accumulation of foam cells in liver X receptor-deficient mice [J].Circulation,2002,106(9):1147-1153.
[14] Kalaany N Y,Gauthier K C,Zavacki A M,et al.LXRs regulate the balance between fat storage and oxidation [J].Cell Metabolism,2005,1(4):231-244.
[15] Quinet E M,Savio D A,Halpern A R,et al.Liver X receptor (LXR)-β regulation in LXRα-deficient mice:implications for therapeutic targeting [J].Molecular Pharmacology,2006,70(4):1340-1349.
[16] Cruz-Garcia L,Saera-Vila A,Navarro I,et al.Targets for TNFα-induced lipolysis in gilthead sea bream (SparusaurataL.) adipocytes isolated from lean and fat juvenile fish [J].Journal of Experimental Biology,2009;212(14):2254-2260.
[17] Cruz-Garcia L,Sánchez-Gurmaches J,Gutiérrez J,et al.Regulation of LXR by fatty acids,insulin,growth hormone and tumor necrosis factor-α in rainbow trout myocytes [J].Comparative Biochemistry and Physiology:Part A.Molecular & Integrative Physiology,2011,160(2):125-136.
[18] Al-Hasani H,Joost H G.Nutrition-/diet-induced changes in gene expression in white adipose tissue [J].Best Practice & Research Clinical Endocrinology & Metabolism,2005,19(4):589-603.
[19] Madsen L,Petersen R K,Kristiansen K.Regulation of adipocyte differentiation and function by polyunsaturated fatty acids [J].Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Molecular Basis of Disease,2005,1740(2):266-286.
[21] 曹俊明,劉永堅(jiān),勞彩玲,等.飼料中不同脂肪酸對草魚組織脂質(zhì)含量和脂肪酸構(gòu)成的影響 [J].動(dòng)物營養(yǎng)學(xué)報(bào),1997,9(3):36-44.
Cao J M,Liu Y J,Lao C L,et al.Effect of different dietary fatty acids on tissue lipid content and fatty acid composition of grass carp [J].Acta Zoonutrimenta Sinica,1997,9(3):36-44.(in Chinese)
[22] 吉 紅,曹艷姿,劉 品,等.飼料中HUFA影響草魚脂質(zhì)代謝的研究 [J].水生生物學(xué)報(bào),2009,33(5):881-889.
Ji H,Cao Y Z,Liu P,et al.Effect of dietary HUFA on the lipid metabolism in grass carp,Ctenopharymgodonidellus[J].Acta Hydrobilogica Sinica,2009,33(5):881-889.(in Chinese)
[23] Ji H,Li J,Liu P.Regulation of growth performance and lipid metabolism by dietary n-3 highly unsaturated fatty acids in juvenile grass carp,Ctenopharyngodon idellus [J].Comparative Biochemistry and Physiology:Part B.Biochemistry and Molecular Biology,2011,159(1):49-56.
[24] Zhang Y,Mangelsdorf D J.LuXuRies of lipid homeostasis:the unity of nuclear hormone receptors,transcription regulation,and cholesterol sensing [J].Molecular Interventions,2002,2(2):78.
[25] Tontonoz P,Mangelsdorf D J.Liver X receptor signaling pathways in cardiovascular disease [J].Molecular Endocrinology,2003,17(6):985-993.
[26] Vaya J,Schipper H M.Oxysterols,cholesterol homeostasis,and Alzheimer disease [J].Journal of Neurochemistry,2007,102(6):1727-1737.
[27] Bouwens M,Bromhaar M G,Jansen J,et al.Postprandial dietary lipid-specific effects on human peripheral blood mononuclear cell gene expression profiles [J].The American Journal of Clinical Nutrition,2010,91(1):208-217.
[28] Roche H M,Noone E,Sewter C,et al.Isomer-dependent metabolic effects of conjugated linoleic acid insights from molecular markers sterol regulatory element-binding protein-1c and LXRα [J].Diabetes,2002,51(7):2037-2044.
[29] Granlund L,Juvet L K,Pedersen J I,et al.Trans10,cis12-conjugated linoleic acid prevents triacylglycerol accumulation in adipocytes by acting as a PPARγ modulator [J].Journal of Lipid Research,2003,44(8):1441-1452.
[30] Ou J,Tu H,Shan B,et al.Unsaturated fatty acids inhibit transcription of the sterol regulatory element-binding protein-1c (SREBP-1c) gene by antagonizing ligand-dependent activation of the LXR [J].Proceedings of the National Academy of Sciences,2001,98(11):6027-6032.
[31] Pawar A,Botolin D,Mangelsdorf D J,et al.The role of liver X receptor-α in the fatty acid regulation of hepatic gene expression [J].Journal of Biological Chemistry,2003,278(42):40736-40743.
[32] Uehara Y,Miura S,von Eckardstein A,et al.Unsaturated fatty acids suppress the expression of the ATP-binding cassette transporter G1 (ABCG1) and ABCA1 genes via an LXR/RXR responsive element [J].Atherosclerosis,2007,191(1):11-21.
[33] Yoshikawa T,Shimano H,Yahagi N,et al.Polyunsaturated fatty acids suppress sterol regulatory element-binding protein 1c promoter activity by inhibition of liver X receptor (LXR) binding to LXR response elements [J].Journal of Biological Chemistry,2002,277(3):1705-1711.
[34] Tobin K A R,Ulven S M,Schuster G U,et al.Liver X receptors as insulin-mediating factors in fatty acid and cholesterol biosynthesis [J].Journal of Biological Chemistry,2002,277(12):10691-10697.