劉 燕 柳華平 杜紅萍 劉亞平

（重慶市石柱土家族自治縣人民醫(yī)院，重慶 石柱 409199）

高效價冷凝集素引起血型鑒定及交叉配血困難1例

劉 燕 柳華平 杜紅萍 劉亞平

（重慶市石柱土家族自治縣人民醫(yī)院，重慶 石柱 409199）

目的 探討在臨床輸血中疑難血型鑒定及配血困難的解決方案。方法 通過臨床病例分析，紅細(xì)胞ABO正反血型鑒定，冷凝集素效價檢測，直接抗人球蛋白試驗(yàn)，吸收試驗(yàn)，鹽水法、聚凝胺、微柱凝膠法交叉合血等血清學(xué)檢測方法來正確鑒定血型，成功配血。結(jié)果 高效價冷凝集素的存在容易給患者血型鑒定及交叉配血帶來困難。結(jié)論 在臨床輸血中，患者體內(nèi)冷凝集素效價增高引起ABO血型鑒定正反不符，干擾結(jié)果。對于疑難血型鑒定標(biāo)本，應(yīng)該有針對性的選擇不同的方法共同驗(yàn)證，以防漏檢誤診，確保臨床輸血安全。

冷凝集素；血型鑒定；交叉配血

冷凝集素是一種自身抗體，正常人血清中的冷凝集素效價在4 ℃時一般不超過1∶16，但在某些病理情況下，冷凝集素的效價可異常增高而導(dǎo)致血型鑒定及交叉配血困難，影響臨床輸血治療的及時進(jìn)行?，F(xiàn)將我院收治的1例含高效價冷凝集素患者的血型鑒定及交叉配血過程報(bào)道如下。

1 臨床資料

患者男性，82歲，農(nóng)民，漢族，既往無輸血史。2013年1月12日因反復(fù)咳嗽、咳痰3年，喘累、氣促2+個月，加重3 d入我院內(nèi)科治療。隨后診斷為左肺肺癌、重度貧血的可能性大。實(shí)驗(yàn)室血常規(guī)檢查見HB：45 g/L，RBC：1.4×1012/L，申請懸浮紅細(xì)胞2 U。檢查血型時發(fā)現(xiàn)正反定型不一致，正定型為AB型，反定型與A細(xì)胞、B細(xì)胞、O細(xì)胞均凝集，正反定型不符，肉眼觀察血液標(biāo)本凝固成果凍狀。實(shí)驗(yàn)室技術(shù)員到患者床旁做血型鑒定，血液離體后迅速凝集成團(tuán)，不能確定血型。由于是老年患者，綜合臨床癥狀分析，懷疑為冷凝集素或其他抗體干擾所致。經(jīng)進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)檢測，證實(shí)為AB型，正反定型不一致正是由于其自身含有高效價冷凝集素所致。用患者的紅細(xì)胞與自身血清置4℃吸收后進(jìn)行配血試驗(yàn)，聚凝胺法及微柱凝膠法配血均相合。

2 血型血清學(xué)檢查

2.1 試劑與儀器

抗A、抗B單克隆血清(河北醫(yī)科大生物醫(yī)學(xué)中心，批號：20120904)；反定型試劑紅細(xì)胞：自制，凝聚胺試劑(合肥天一生物技術(shù)研究所，批號：20111018)；抗人球蛋白交叉配血卡(長春博訊，批號：20120806)；TDZ4-WS離心機(jī)、FYQ型免疫微柱孵育器、TD-3A型血型血清學(xué)離心機(jī)(長春博研)。37 ℃水浴箱。

2.2 血型鑒定

試管法，取干燥潔凈的試管三支，分別加入抗A、抗B、抗D血清各兩滴，再分別加入患者3%紅細(xì)胞懸液一滴，混合；另取干燥清潔的試管3支，各加入患者血清2滴，再分別加入A、B、O型3%紅細(xì)胞懸液1滴，混合；另取一只試管，加入患者血清2滴及患者紅細(xì)胞懸液1滴，混合。1000 r/min，1 min。鏡下觀察記錄結(jié)果。將患者正反定型試管均放入37 ℃水浴箱中10 min，取出輕輕混勻觀察記錄結(jié)果。

2.3 冷凝集素效價測定[1]

將未除去冷凝集素的患者血清經(jīng)連續(xù)等倍稀釋（共17管），分別加入50%自身洗滌紅細(xì)胞懸液，混勻，置于4 ℃反應(yīng)2 h，1000 r/min，離心1 min，記錄結(jié)果，然后置于37 ℃ 15 min后，1000 r/min，離心1 min，記錄結(jié)果。

2.4 直接抗人球蛋白試驗(yàn)

按抗人球蛋白檢測卡說明書標(biāo)準(zhǔn)操作。

2.5 吸收冷凝集素試驗(yàn)[2]

用O型壓積紅細(xì)胞1.5 mL經(jīng)37 ℃生理鹽水反復(fù)洗滌5次，取1體積洗滌O型壓積紅細(xì)胞與2體積患者血清，混合后立即置4 ℃冰箱吸收1 h，其間搖動數(shù)次，使其充分吸收，立即分離血清，備用。

2.6 交叉配血實(shí)驗(yàn)

利用吸收處理后的患者血清及經(jīng)37 ℃生理鹽水洗滌8次的紅細(xì)胞懸液與AB型獻(xiàn)血者（獻(xiàn)血者編號0040412022842）在室溫(20 ℃)聚凝胺配血中，主側(cè)出現(xiàn)凝集，次側(cè)無凝集，放37 ℃ 10 min，取出試管輕輕混合觀察結(jié)果，主側(cè)凝集消失，配血相合。在微柱凝膠配血法中，主側(cè)和次側(cè)均相合。

3 結(jié) 果

3.1 ABO血型鑒定結(jié)果見表1。

3.2 用未除去冷凝集素患者血清與自身洗滌紅細(xì)胞懸液測定在不同溫度的效價，見表2。

3.3 直接抗人球蛋白試驗(yàn)：陰性。

3.4 用處理后的患者血清，紅細(xì)胞做凝聚胺交叉配血試驗(yàn)，主次側(cè)均無凝聚，無溶血。在微柱凝膠配血法中，主側(cè)和次側(cè)均相合。

4 討 論

高效價冷凝集素是患者體內(nèi)產(chǎn)生了抗自身紅細(xì)胞的嗜異性冷抗體。此抗體為IgM類，在體外4 ℃或室溫條件下可與自身紅細(xì)胞或ABO系統(tǒng)其他各個血型的紅細(xì)胞發(fā)生非特異性凝集反應(yīng)，不規(guī)則抗體可呈強(qiáng)陽性。一般健康人血清中含少量冷凝集素，效價很低，一般在1∶16以下。這種抗體在32 ℃以下(0～4 ℃)時活性最強(qiáng)，能與紅細(xì)胞結(jié)合，當(dāng)溫度升高時凝集的紅細(xì)胞呈可逆性完全散開，可迅速從紅細(xì)胞表面解離，因此不引起非特異性凝集，但在某些病理情況下，如自身免疫性貧血，淋巴系統(tǒng)惡性腫瘤、支原體肺炎、EB病毒感染及某些腫瘤等會表達(dá)高效價[3]。本例患者系癌癥病患，體內(nèi)冷凝集素高效價表達(dá)，致使血液標(biāo)本在室溫下離體后馬上發(fā)生凝集，無法正確鑒定血型，成功配血。經(jīng)過一系列的有針對性的血清學(xué)試驗(yàn)，證實(shí)患者血型為AB型，高效價冷凝集素是引起血型鑒定困難的原因。

表1 高效價冷凝集素患者血型鑒定

表2 患者血清與自身洗滌紅細(xì)胞在不同溫度的效價

在臨床輸血中，安全輸血是根本宗旨。遇到疑難血型鑒定及交叉配血，應(yīng)該有針對性的選擇不同的血清學(xué)方法，如經(jīng)典的抗球蛋白法及卡式配血系統(tǒng)，凝聚胺法配血，最好是幾種方法聯(lián)合使用，共同驗(yàn)證，以免漏檢。以上方法不能確診時，再輔以吸收，放散試驗(yàn)，有條件的實(shí)驗(yàn)室甚至可以進(jìn)行血型物質(zhì)測定和家族血型調(diào)查，最終可以解決輸血難題。通過一系列的試驗(yàn)，不斷分析總結(jié)經(jīng)驗(yàn)，也能不斷提高輸血技術(shù)員的臨床實(shí)踐能力。總之臨床輸血關(guān)系到人的生命安危，一定要小心、仔細(xì)、嚴(yán)謹(jǐn)，確保輸血安全。

[1] 肖星甫.輸血技術(shù)手冊[M].成都:四川科學(xué)技術(shù)出版社,1992: 147-155.

[2] 龐桂芝,張趁利,姜燕娟.高效價冷凝集素配血不合1例[J].中華現(xiàn)代臨床醫(yī)學(xué)雜志,2005,3(12):1202-1203.

[3] 楊世明,張勇萍,潘曉莉.冷凝集素綜合征的血清學(xué)特征及檢測方法探討[J].細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志,2006,22(4):541-543.

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