任亞?wèn)|，施 猛，孫秋艷，劉恩桂，劉志強(qiáng)

(揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)廣州海瑞藥業(yè)有限公司，廣東 廣州 510663)

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HPLC法測(cè)定正元膠囊中淫羊藿苷的含量

任亞?wèn)|，施 猛*，孫秋艷，劉恩桂，劉志強(qiáng)

(揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)廣州海瑞藥業(yè)有限公司，廣東 廣州 510663)

目的：建立正元膠囊中淫羊藿苷的含量測(cè)定方法。方法：采用高效液相色譜法，以十八烷基鍵合硅膠柱為色譜柱，以甲醇-1%醋酸溶液(52∶48)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為270nm，柱溫為30℃，流速為1.0mL/min。結(jié)果：淫羊藿苷在10.250 ～205.000μg/mL濃度范圍內(nèi)與其峰面積值呈良好線(xiàn)性關(guān)系，平均回收率為98.7%(RSD=0.3%)。結(jié)論：該方法測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確，精密度高，耐用性好，可以作為正元膠囊中淫羊藿苷的含量測(cè)定方法。

正元膠囊；淫羊藿苷；含量測(cè)定；高效液相色譜法

正元膠囊是由淫羊藿、黃芪等八味藥材經(jīng)適宜工藝加工而成，具有益氣健脾、補(bǔ)腎填精的功效。其能改善患者神疲乏力、少氣懶言、呼吸氣短、納谷少馨、腰脊酸痛、自汗等癥狀，提高患者免疫功能和生存質(zhì)量，增加體重，保護(hù)白細(xì)胞，對(duì)放療、化療有增效、減毒作用，可用于腫瘤放化療輔助治療。淫羊藿系方中君藥，淫羊藿苷為主要藥效成分。本文建立了制劑中淫羊藿苷HPLC含量測(cè)定方法，為有效控制正元膠囊質(zhì)量提供可靠的分析方法。

1 試藥與儀器

1.1 試藥

淫羊藿苷對(duì)照品，來(lái)源于中國(guó)食品藥品檢定研究院，正元膠囊由揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)廣州海瑞藥業(yè)有限公司提供；甲醇(色譜純)、醋酸(分析純)、乙醇(分析純)。

1.2 儀器

Agilent 1260型高效液相色譜儀，Agilent 1260VWD紫外檢測(cè)器，梅特勒 XS205電子天平。

2 含量測(cè)定方法

2.1 色譜條件

按照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2010年版一部附錄VI D[3])，以十八烷基鍵合硅膠柱為色譜柱，以甲醇-1%醋酸溶液(52∶48)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為270nm，柱溫為30℃，流速為1.0mL/min。

2.2 溶液制備

供試品溶液制備：取本品內(nèi)容物約0.5g，研細(xì)，精密稱(chēng)定，置50mL量瓶中，精密加入70%乙醇至刻度，靜置過(guò)夜，超聲處理60min，放冷至室溫，加70%乙醇至刻度，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

對(duì)照品溶液制備：取淫羊藿苷對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇溶解并稀釋成濃度為50μg/mL溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.3 含量測(cè)定

按照高效液相色譜法，精密量取供試品溶液與對(duì)照品溶液各5μL，注入色譜儀，記錄色譜圖；主峰按淫羊藿苷峰計(jì)，塔板數(shù)不低于3 000。樣品測(cè)定：精密量取供試品溶液與對(duì)照品溶液各5μL，注入色譜儀，記錄色譜圖；按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。

3 方法學(xué)考察

3.1 專(zhuān)屬性及系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)

按“2.2”項(xiàng)下供試品溶液配制方法制備陰性對(duì)照溶液及供試品溶液，精密量取空白溶劑、陰性對(duì)照溶液、對(duì)照品溶液及供試品溶液各5μL，照淫羊藿苷含量測(cè)定方法測(cè)定。理論塔板數(shù)按淫羊藿苷峰計(jì)算，應(yīng)不低于3 000。具體試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 專(zhuān)屬性及系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果表明空白樣品和陰性對(duì)照溶液在淫羊藿苷保留時(shí)間處無(wú)干擾，理論塔板數(shù)>3 000，拖尾因子及分離度均符合規(guī)定，表明該方法專(zhuān)屬性、系統(tǒng)適應(yīng)性良好。

3.2 線(xiàn)性與范圍

精密稱(chēng)取淫羊藿苷對(duì)照品50mg，置100mL 量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，作為對(duì)照品貯備液；精密量取對(duì)照品貯備液2mL、5mL、10mL、1mL、2mL、3mL、20mL分別置100mL、100mL、100mL、20mL、10mL、10mL、50mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，得到濃度為10μg/mL、25μg/mL、50μg/mL、75μg/mL、100μg/mL、150μg/mL、200μg/mL的對(duì)照品溶液。分別精密量取上述對(duì)照品系列濃度溶液各5μL，照淫羊藿苷含量測(cè)定方法測(cè)定，計(jì)算相關(guān)系數(shù)和回歸方程，試驗(yàn)數(shù)據(jù)見(jiàn)表2。

表2 線(xiàn)性與范圍

以進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)，淫羊藿苷峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，結(jié)果顯示，淫羊藿苷在10.250～205.000μg/mL的濃度范圍內(nèi)與其峰面積值呈良好線(xiàn)性關(guān)系，線(xiàn)性方程為Y=10.339 80X+3.402 07，相關(guān)系數(shù)r=0.999 88(n=7)。

3.3 準(zhǔn)確度試驗(yàn)

分別取正元膠囊樣品6份約0.25g，分別精密加入等量對(duì)照品，按照“2.2”項(xiàng)下供試品溶液配制方法處理，照淫羊藿苷含量測(cè)定方法同法測(cè)定，計(jì)算回收率見(jiàn)表3。

表3 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果顯示，淫羊藿苷的加樣回收率均在98%～102%之間，平均回收率為98.7%，RSD為0.3%(RSD≤2%)符合要求，說(shuō)明該方法準(zhǔn)確度良好。

3.4 精密度試驗(yàn)

精密量取“2.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液(濃度約為50μg/mL)5μL，照淫羊藿苷含量測(cè)定方法測(cè)定，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定淫羊藿苷的峰面積，結(jié)果見(jiàn)表4。從表4結(jié)果可得，各峰面積的RSD為0.3%(RSD≤2%)，表明該方法精密度良好。

表4 精密度試驗(yàn)結(jié)果

3.5 重現(xiàn)性試驗(yàn)

取正元膠囊樣品，精密稱(chēng)定，按照“2.2”項(xiàng)下供試品溶液配制方法處理6份供試品溶液，照淫羊藿苷含量測(cè)定方法同法測(cè)定，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表5。結(jié)果顯示，6份樣品的測(cè)定結(jié)果RSD為0.3%(RSD≤2%)，表明該方法具有良好的重復(fù)性。

3.6 溶液穩(wěn)定性考察

取“2.2”項(xiàng)下供試品溶液1份，分別在0h、2h、4h、8h、12h、24h測(cè)定淫羊藿苷峰面積，考察溶液穩(wěn)定性。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表6。結(jié)果表明樣品溶液至少在24h內(nèi)穩(wěn)定(RSD≤2%)。

3.7 耐用性試驗(yàn)

取供試品溶液，對(duì)色譜條件中流動(dòng)相的比例、流速、柱溫、色譜柱品牌進(jìn)行小范圍改變，考察主成分的保留時(shí)間、系統(tǒng)適應(yīng)性的變動(dòng)，考察結(jié)果見(jiàn)表7。結(jié)果表明，流動(dòng)相比例、流速、柱溫在小范圍內(nèi)調(diào)整，含量測(cè)定的系統(tǒng)適應(yīng)性均符合要求，且變化不大，不同廠(chǎng)家色譜柱均可使用，表明該方法具有良好的耐用性。

表5 重現(xiàn)性試驗(yàn)結(jié)果

表6 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

4 討論

取對(duì)照品溶液在200～400nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行光譜掃描，結(jié)果其最大吸收波長(zhǎng)為270nm，且在此波長(zhǎng)下空白樣品和陰性對(duì)照溶液均無(wú)干擾，故選擇270nm作為正元膠囊中淫羊藿苷含量測(cè)定的檢測(cè)波長(zhǎng)。

本方法測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確，精密度高，耐用性好，可以作為正元膠囊中淫羊藿苷的含量測(cè)定方法。

表7 流動(dòng)相比例考察結(jié)果

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典[S]．一部.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010．

(責(zé)任編輯：宋勇剛)

Determination of Icariinin Zhengyuan Capsules by HPLC

Ren Yadong, Shi Meng*, Sun Qiuyan, Liu Engui，Liu Zhiqiang

(Yangtze River Pharmaceutical Group Guangzhou Hairui Pharmaceutical Co.,Ltd，Guangzhou 510663,China)

Objective:To establish the method for determination of Icariinin Zhengyuan capsules. Methods:The assay involved an isocratic elution of Icariin in anEighteen alkyl bonded silica gel column，using a mobile phase composition of Methanol and 1%acetic acid solution (52∶48);The determination wavelength was 270 nm, column temperature was 30℃ and the flow rate was 1.0mL/min. Results:AndIcariin had a good linear range of 10.250μg/mL ～205.000μg/mL with a mean recovery of 98.7%(RSD=0.3%). Conclusion:The assay showed an accurate result, high precision and good durability ,which can used as a method for determination of Icariin in Zhengyuan capsules.

Zhengyuan Capsules ;Icariin；Determination；HPLC

2014-03-28

任亞?wèn)|(1978-)，男，碩士，揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)廣州海瑞藥業(yè)有限公司工程師，研究方向?yàn)樗幤飞a(chǎn)質(zhì)量管理。

施猛(1976-)，男，揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)廣州海瑞藥業(yè)有限公司工程師，研究方向?yàn)樗幤费邪l(fā)、生產(chǎn)。

R281

A

1673-2197(2014)11-0016-03