李萌萌等

摘 要：萎縮芽孢桿菌舊稱“枯草芽孢桿菌黑色變種”，是芽孢桿菌屬的一個(gè)重要種。該研究以其生理生化特征試驗(yàn)為基礎(chǔ)，探索萎縮芽孢桿菌的便捷檢測(cè)方法。通過(guò)生化試驗(yàn)完成的萎縮芽孢桿菌ATCC 9372 生化譜，可用于萎縮芽孢桿菌的檢測(cè)。

關(guān)鍵詞：萎縮芽孢桿菌；生理生化特征；檢測(cè)鑒定

中圖分類號(hào) Q93-331 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-7731（2014）07-33-03

1952年，Smith等人[1]發(fā)現(xiàn)萎縮芽孢桿菌原始菌株 NRS-1221A能在含酪氨酸培養(yǎng)基上產(chǎn)生黑色素，根據(jù)這一特性將NRS-1221A歸到枯草芽孢桿菌黑色變種新種中。1989年，Nakamura[2]提出將枯草芽孢桿菌黑色變種改名為萎縮芽孢桿菌，以區(qū)別于枯草芽孢桿菌。目前，國(guó)際上將ATCC 9372稱為萎縮芽孢桿菌，國(guó)內(nèi)仍使用枯草桿菌黑色變種這一命名方式。萎縮芽孢桿菌細(xì)胞寬0.5～1.0μm，長(zhǎng)2.0～4.0μm，可運(yùn)動(dòng)，好氧生長(zhǎng)；芽孢橢圓形、中生、不膨大，無(wú)芽孢壁[3]。萎縮芽孢桿菌能產(chǎn)生孢子而耐受不良環(huán)境，能在80℃以上的溫度生長(zhǎng)，抗性強(qiáng)[4]，無(wú)致病性，廣泛應(yīng)用于醫(yī)療[5]、工業(yè)、農(nóng)業(yè)和衛(wèi)生[6]等領(lǐng)域。國(guó)際上將萎縮芽孢桿菌ATCC 9372作為消毒檢測(cè)以及滅菌質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)菌株[7]。目前，萎縮芽孢桿菌的研究重點(diǎn)在于其應(yīng)用，在生理生化特征方面，如何便捷地有效區(qū)分萎縮芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌，還未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。本文從生理生化方面對(duì)萎縮芽孢桿菌進(jìn)行研究，旨在為檢測(cè)萎縮芽孢桿菌提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 菌株 本研究中萎縮芽孢桿菌ATCC 9372有2種形式：一種為萎縮芽孢桿菌菌粉；另一種為萎縮芽孢桿菌的芽孢懸液。另選取8種芽孢桿菌屬菌株，本研究中使用的菌株均購(gòu)自中國(guó)工業(yè)微生物菌種保藏管理中心CICC，列于表1中。

3 討論與結(jié)論

萎縮芽孢桿菌ATCC 9372，國(guó)內(nèi)稱“枯草芽孢桿菌黑色變種”，芽孢桿菌屬新種，在干熱、環(huán)氧乙烷等殺菌效果評(píng)價(jià)試驗(yàn)作為指示菌運(yùn)用廣泛。近年來(lái)對(duì)萎縮芽孢桿菌的生化鑒定和產(chǎn)黑色素特征研究較少。目前，國(guó)內(nèi)外的研究方向主要是對(duì)萎縮芽孢桿菌的抗逆性研究[11-12]，但如何便捷有效地區(qū)分萎縮芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌卻鮮有報(bào)道。本研究主要通過(guò)對(duì)萎縮芽孢桿菌生理生化特征的研究，提出便捷的萎縮芽孢桿菌檢測(cè)方法。

黑色素是一種廣泛存在于微生物、植物和動(dòng)物中的色素。黑色素的形成是通過(guò)酪氨酸酶催化L-酪氨酸成多巴，再經(jīng)過(guò)一系列聚合反應(yīng)合成的[10]。萎縮芽孢桿可在本研究中使用的酪氨酸培養(yǎng)基上產(chǎn)生黑色素。而其它8種芽孢桿菌能生長(zhǎng)但不產(chǎn)生黑色素。因此，在酪氨酸平板上產(chǎn)生黑色素這一特性應(yīng)可用于萎縮芽孢桿菌的初步判定。

法國(guó)梅里埃API微生物鑒定系統(tǒng)由于其簡(jiǎn)單、可靠和快速而應(yīng)用廣泛。本研究中選用了用于鑒定芽孢桿菌的API 50 CHB試劑條檢測(cè)供試菌株，結(jié)果表明其無(wú)法區(qū)分萎縮芽孢桿菌與枯草芽孢桿菌。而本研究生化試驗(yàn)得到的萎縮芽孢桿菌ATCC 9372生化譜不僅有效豐富了萎縮芽孢桿菌的生化特征，而且能清晰地將萎縮芽孢桿菌ATCC 9372與其它8種類似芽孢桿菌區(qū)別開(kāi)來(lái)，可用于萎縮芽孢桿菌的檢測(cè)鑒定。

參考文獻(xiàn)

[1]Fritze，D.，and Pukall，R.2001.Reclassification of bioindicator Bacillus subtilis DSM 675 and Bacillus subtilis DSM 2277 as Bacillus atrophaeus[J].Int J Syst Evol Micr，2001，51： 35-37.

[2]Nakamura，L K.Taxonomic relationship of black-pigmented Bacillus subtilis strains and a proposal for Bacillus atrophaeus sp.nov[J].International Journal of Systematic Bacteriology，1989，39（3）： 295–300.

[3]劉波，李紅，姚栗.枯草芽孢桿菌黑色變種ATCC 9372的特性及其應(yīng)用[J].中國(guó)消毒學(xué)雜志，2009，26（2）：236.

[4]曾新平，李磊，唐文偉.酸性氧化電位水對(duì)枯草桿菌黑色變種芽孢的殺滅效果與影響因素研究[J].中國(guó)消毒學(xué)雜志，2013，30（3）：208.

[5]Lewis，D.L.，M.Arens.Resistance of microorganisms to disinfection in dental and medical services[J].Nat.Med.1995，1：956–958.

[6]Dancer，S.J.Importance of the environment in meticillin-resistant Staphylococcus aureus acquisition： the case for hospital cleaning[J].Lancet Infect.Dis，2008，8：101–113.

[7]The United States Pharmacopoeial Convention.USP35-NF30.United States Pharmacopoeia[S].THE United States： United States Pharmacopoeia Convection Rockyille，2011：2 357-2 361.

[8]EDQM.European Pharmacopoeia（Seven Edition）[S].France：European Pharmacopoeia Commission，2010.

[9]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部.GB/T 15981–1995消毒與滅菌效果的評(píng)價(jià)方法與標(biāo)準(zhǔn)[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，1995：257.

[10]徐燕，陳越英，吳曉松.環(huán)氧乙烷滅菌生物指示物抗力實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)消毒學(xué)雜志，2013，30（3）：208.

[11]Sella，B.R，Guizelini，B.P，Gouvea，P.M，et al.Relations between phenotypic changes of spores and biofilm production by Bacillus atrophaeus ATCC 9372 growing in solid-state fermentation[J].Arch Microbiol，2012，194：815–825.

[12]Nicholson，W.L.，N.Munakata，et al.Resistance of Bacillus endospores to extreme terrestrial and extraterrestrial environments[J].Microbiol.Mol.Biol. Rev，2000，64：548-572.

[13]朱琳，商倩倩，游偲.一株產(chǎn)黑色素海洋細(xì)菌的篩選、鑒定及發(fā)酵條件優(yōu)化[J].海洋環(huán)境科學(xué)，2011，30（5）：686.

（責(zé)編：施婷婷）

摘 要：萎縮芽孢桿菌舊稱“枯草芽孢桿菌黑色變種”，是芽孢桿菌屬的一個(gè)重要種。該研究以其生理生化特征試驗(yàn)為基礎(chǔ)，探索萎縮芽孢桿菌的便捷檢測(cè)方法。通過(guò)生化試驗(yàn)完成的萎縮芽孢桿菌ATCC 9372 生化譜，可用于萎縮芽孢桿菌的檢測(cè)。

關(guān)鍵詞：萎縮芽孢桿菌；生理生化特征；檢測(cè)鑒定

中圖分類號(hào) Q93-331 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-7731（2014）07-33-03

1952年，Smith等人[1]發(fā)現(xiàn)萎縮芽孢桿菌原始菌株 NRS-1221A能在含酪氨酸培養(yǎng)基上產(chǎn)生黑色素，根據(jù)這一特性將NRS-1221A歸到枯草芽孢桿菌黑色變種新種中。1989年，Nakamura[2]提出將枯草芽孢桿菌黑色變種改名為萎縮芽孢桿菌，以區(qū)別于枯草芽孢桿菌。目前，國(guó)際上將ATCC 9372稱為萎縮芽孢桿菌，國(guó)內(nèi)仍使用枯草桿菌黑色變種這一命名方式。萎縮芽孢桿菌細(xì)胞寬0.5～1.0μm，長(zhǎng)2.0～4.0μm，可運(yùn)動(dòng)，好氧生長(zhǎng)；芽孢橢圓形、中生、不膨大，無(wú)芽孢壁[3]。萎縮芽孢桿菌能產(chǎn)生孢子而耐受不良環(huán)境，能在80℃以上的溫度生長(zhǎng)，抗性強(qiáng)[4]，無(wú)致病性，廣泛應(yīng)用于醫(yī)療[5]、工業(yè)、農(nóng)業(yè)和衛(wèi)生[6]等領(lǐng)域。國(guó)際上將萎縮芽孢桿菌ATCC 9372作為消毒檢測(cè)以及滅菌質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)菌株[7]。目前，萎縮芽孢桿菌的研究重點(diǎn)在于其應(yīng)用，在生理生化特征方面，如何便捷地有效區(qū)分萎縮芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌，還未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。本文從生理生化方面對(duì)萎縮芽孢桿菌進(jìn)行研究，旨在為檢測(cè)萎縮芽孢桿菌提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 菌株 本研究中萎縮芽孢桿菌ATCC 9372有2種形式：一種為萎縮芽孢桿菌菌粉；另一種為萎縮芽孢桿菌的芽孢懸液。另選取8種芽孢桿菌屬菌株，本研究中使用的菌株均購(gòu)自中國(guó)工業(yè)微生物菌種保藏管理中心CICC，列于表1中。

3 討論與結(jié)論

萎縮芽孢桿菌ATCC 9372，國(guó)內(nèi)稱“枯草芽孢桿菌黑色變種”，芽孢桿菌屬新種，在干熱、環(huán)氧乙烷等殺菌效果評(píng)價(jià)試驗(yàn)作為指示菌運(yùn)用廣泛。近年來(lái)對(duì)萎縮芽孢桿菌的生化鑒定和產(chǎn)黑色素特征研究較少。目前，國(guó)內(nèi)外的研究方向主要是對(duì)萎縮芽孢桿菌的抗逆性研究[11-12]，但如何便捷有效地區(qū)分萎縮芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌卻鮮有報(bào)道。本研究主要通過(guò)對(duì)萎縮芽孢桿菌生理生化特征的研究，提出便捷的萎縮芽孢桿菌檢測(cè)方法。

黑色素是一種廣泛存在于微生物、植物和動(dòng)物中的色素。黑色素的形成是通過(guò)酪氨酸酶催化L-酪氨酸成多巴，再經(jīng)過(guò)一系列聚合反應(yīng)合成的[10]。萎縮芽孢桿可在本研究中使用的酪氨酸培養(yǎng)基上產(chǎn)生黑色素。而其它8種芽孢桿菌能生長(zhǎng)但不產(chǎn)生黑色素。因此，在酪氨酸平板上產(chǎn)生黑色素這一特性應(yīng)可用于萎縮芽孢桿菌的初步判定。

法國(guó)梅里埃API微生物鑒定系統(tǒng)由于其簡(jiǎn)單、可靠和快速而應(yīng)用廣泛。本研究中選用了用于鑒定芽孢桿菌的API 50 CHB試劑條檢測(cè)供試菌株，結(jié)果表明其無(wú)法區(qū)分萎縮芽孢桿菌與枯草芽孢桿菌。而本研究生化試驗(yàn)得到的萎縮芽孢桿菌ATCC 9372生化譜不僅有效豐富了萎縮芽孢桿菌的生化特征，而且能清晰地將萎縮芽孢桿菌ATCC 9372與其它8種類似芽孢桿菌區(qū)別開(kāi)來(lái)，可用于萎縮芽孢桿菌的檢測(cè)鑒定。

參考文獻(xiàn)

[1]Fritze，D.，and Pukall，R.2001.Reclassification of bioindicator Bacillus subtilis DSM 675 and Bacillus subtilis DSM 2277 as Bacillus atrophaeus[J].Int J Syst Evol Micr，2001，51： 35-37.

[2]Nakamura，L K.Taxonomic relationship of black-pigmented Bacillus subtilis strains and a proposal for Bacillus atrophaeus sp.nov[J].International Journal of Systematic Bacteriology，1989，39（3）： 295–300.

[3]劉波，李紅，姚栗.枯草芽孢桿菌黑色變種ATCC 9372的特性及其應(yīng)用[J].中國(guó)消毒學(xué)雜志，2009，26（2）：236.

[4]曾新平，李磊，唐文偉.酸性氧化電位水對(duì)枯草桿菌黑色變種芽孢的殺滅效果與影響因素研究[J].中國(guó)消毒學(xué)雜志，2013，30（3）：208.

[5]Lewis，D.L.，M.Arens.Resistance of microorganisms to disinfection in dental and medical services[J].Nat.Med.1995，1：956–958.

[6]Dancer，S.J.Importance of the environment in meticillin-resistant Staphylococcus aureus acquisition： the case for hospital cleaning[J].Lancet Infect.Dis，2008，8：101–113.

[7]The United States Pharmacopoeial Convention.USP35-NF30.United States Pharmacopoeia[S].THE United States： United States Pharmacopoeia Convection Rockyille，2011：2 357-2 361.

[8]EDQM.European Pharmacopoeia（Seven Edition）[S].France：European Pharmacopoeia Commission，2010.

[9]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部.GB/T 15981–1995消毒與滅菌效果的評(píng)價(jià)方法與標(biāo)準(zhǔn)[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，1995：257.

[10]徐燕，陳越英，吳曉松.環(huán)氧乙烷滅菌生物指示物抗力實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)消毒學(xué)雜志，2013，30（3）：208.

[11]Sella，B.R，Guizelini，B.P，Gouvea，P.M，et al.Relations between phenotypic changes of spores and biofilm production by Bacillus atrophaeus ATCC 9372 growing in solid-state fermentation[J].Arch Microbiol，2012，194：815–825.

[12]Nicholson，W.L.，N.Munakata，et al.Resistance of Bacillus endospores to extreme terrestrial and extraterrestrial environments[J].Microbiol.Mol.Biol. Rev，2000，64：548-572.

[13]朱琳，商倩倩，游偲.一株產(chǎn)黑色素海洋細(xì)菌的篩選、鑒定及發(fā)酵條件優(yōu)化[J].海洋環(huán)境科學(xué)，2011，30（5）：686.

（責(zé)編：施婷婷）

摘 要：萎縮芽孢桿菌舊稱“枯草芽孢桿菌黑色變種”，是芽孢桿菌屬的一個(gè)重要種。該研究以其生理生化特征試驗(yàn)為基礎(chǔ)，探索萎縮芽孢桿菌的便捷檢測(cè)方法。通過(guò)生化試驗(yàn)完成的萎縮芽孢桿菌ATCC 9372 生化譜，可用于萎縮芽孢桿菌的檢測(cè)。

關(guān)鍵詞：萎縮芽孢桿菌；生理生化特征；檢測(cè)鑒定

中圖分類號(hào) Q93-331 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-7731（2014）07-33-03

1952年，Smith等人[1]發(fā)現(xiàn)萎縮芽孢桿菌原始菌株 NRS-1221A能在含酪氨酸培養(yǎng)基上產(chǎn)生黑色素，根據(jù)這一特性將NRS-1221A歸到枯草芽孢桿菌黑色變種新種中。1989年，Nakamura[2]提出將枯草芽孢桿菌黑色變種改名為萎縮芽孢桿菌，以區(qū)別于枯草芽孢桿菌。目前，國(guó)際上將ATCC 9372稱為萎縮芽孢桿菌，國(guó)內(nèi)仍使用枯草桿菌黑色變種這一命名方式。萎縮芽孢桿菌細(xì)胞寬0.5～1.0μm，長(zhǎng)2.0～4.0μm，可運(yùn)動(dòng)，好氧生長(zhǎng)；芽孢橢圓形、中生、不膨大，無(wú)芽孢壁[3]。萎縮芽孢桿菌能產(chǎn)生孢子而耐受不良環(huán)境，能在80℃以上的溫度生長(zhǎng)，抗性強(qiáng)[4]，無(wú)致病性，廣泛應(yīng)用于醫(yī)療[5]、工業(yè)、農(nóng)業(yè)和衛(wèi)生[6]等領(lǐng)域。國(guó)際上將萎縮芽孢桿菌ATCC 9372作為消毒檢測(cè)以及滅菌質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)菌株[7]。目前，萎縮芽孢桿菌的研究重點(diǎn)在于其應(yīng)用，在生理生化特征方面，如何便捷地有效區(qū)分萎縮芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌，還未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。本文從生理生化方面對(duì)萎縮芽孢桿菌進(jìn)行研究，旨在為檢測(cè)萎縮芽孢桿菌提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 菌株 本研究中萎縮芽孢桿菌ATCC 9372有2種形式：一種為萎縮芽孢桿菌菌粉；另一種為萎縮芽孢桿菌的芽孢懸液。另選取8種芽孢桿菌屬菌株，本研究中使用的菌株均購(gòu)自中國(guó)工業(yè)微生物菌種保藏管理中心CICC，列于表1中。

3 討論與結(jié)論

萎縮芽孢桿菌ATCC 9372，國(guó)內(nèi)稱“枯草芽孢桿菌黑色變種”，芽孢桿菌屬新種，在干熱、環(huán)氧乙烷等殺菌效果評(píng)價(jià)試驗(yàn)作為指示菌運(yùn)用廣泛。近年來(lái)對(duì)萎縮芽孢桿菌的生化鑒定和產(chǎn)黑色素特征研究較少。目前，國(guó)內(nèi)外的研究方向主要是對(duì)萎縮芽孢桿菌的抗逆性研究[11-12]，但如何便捷有效地區(qū)分萎縮芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌卻鮮有報(bào)道。本研究主要通過(guò)對(duì)萎縮芽孢桿菌生理生化特征的研究，提出便捷的萎縮芽孢桿菌檢測(cè)方法。

黑色素是一種廣泛存在于微生物、植物和動(dòng)物中的色素。黑色素的形成是通過(guò)酪氨酸酶催化L-酪氨酸成多巴，再經(jīng)過(guò)一系列聚合反應(yīng)合成的[10]。萎縮芽孢桿可在本研究中使用的酪氨酸培養(yǎng)基上產(chǎn)生黑色素。而其它8種芽孢桿菌能生長(zhǎng)但不產(chǎn)生黑色素。因此，在酪氨酸平板上產(chǎn)生黑色素這一特性應(yīng)可用于萎縮芽孢桿菌的初步判定。

法國(guó)梅里埃API微生物鑒定系統(tǒng)由于其簡(jiǎn)單、可靠和快速而應(yīng)用廣泛。本研究中選用了用于鑒定芽孢桿菌的API 50 CHB試劑條檢測(cè)供試菌株，結(jié)果表明其無(wú)法區(qū)分萎縮芽孢桿菌與枯草芽孢桿菌。而本研究生化試驗(yàn)得到的萎縮芽孢桿菌ATCC 9372生化譜不僅有效豐富了萎縮芽孢桿菌的生化特征，而且能清晰地將萎縮芽孢桿菌ATCC 9372與其它8種類似芽孢桿菌區(qū)別開(kāi)來(lái)，可用于萎縮芽孢桿菌的檢測(cè)鑒定。

參考文獻(xiàn)

[1]Fritze，D.，and Pukall，R.2001.Reclassification of bioindicator Bacillus subtilis DSM 675 and Bacillus subtilis DSM 2277 as Bacillus atrophaeus[J].Int J Syst Evol Micr，2001，51： 35-37.

[2]Nakamura，L K.Taxonomic relationship of black-pigmented Bacillus subtilis strains and a proposal for Bacillus atrophaeus sp.nov[J].International Journal of Systematic Bacteriology，1989，39（3）： 295–300.

[3]劉波，李紅，姚栗.枯草芽孢桿菌黑色變種ATCC 9372的特性及其應(yīng)用[J].中國(guó)消毒學(xué)雜志，2009，26（2）：236.

[4]曾新平，李磊，唐文偉.酸性氧化電位水對(duì)枯草桿菌黑色變種芽孢的殺滅效果與影響因素研究[J].中國(guó)消毒學(xué)雜志，2013，30（3）：208.

[5]Lewis，D.L.，M.Arens.Resistance of microorganisms to disinfection in dental and medical services[J].Nat.Med.1995，1：956–958.

[6]Dancer，S.J.Importance of the environment in meticillin-resistant Staphylococcus aureus acquisition： the case for hospital cleaning[J].Lancet Infect.Dis，2008，8：101–113.

[7]The United States Pharmacopoeial Convention.USP35-NF30.United States Pharmacopoeia[S].THE United States： United States Pharmacopoeia Convection Rockyille，2011：2 357-2 361.

[8]EDQM.European Pharmacopoeia（Seven Edition）[S].France：European Pharmacopoeia Commission，2010.

[9]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部.GB/T 15981–1995消毒與滅菌效果的評(píng)價(jià)方法與標(biāo)準(zhǔn)[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，1995：257.

[10]徐燕，陳越英，吳曉松.環(huán)氧乙烷滅菌生物指示物抗力實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)消毒學(xué)雜志，2013，30（3）：208.

[11]Sella，B.R，Guizelini，B.P，Gouvea，P.M，et al.Relations between phenotypic changes of spores and biofilm production by Bacillus atrophaeus ATCC 9372 growing in solid-state fermentation[J].Arch Microbiol，2012，194：815–825.

[12]Nicholson，W.L.，N.Munakata，et al.Resistance of Bacillus endospores to extreme terrestrial and extraterrestrial environments[J].Microbiol.Mol.Biol. Rev，2000，64：548-572.

[13]朱琳，商倩倩，游偲.一株產(chǎn)黑色素海洋細(xì)菌的篩選、鑒定及發(fā)酵條件優(yōu)化[J].海洋環(huán)境科學(xué)，2011，30（5）：686.

（責(zé)編：施婷婷）