裴竟等

摘要 [目的]為新型驅(qū)蚊產(chǎn)品的開發(fā)、生產(chǎn)與應(yīng)用提供理論依據(jù)和試驗數(shù)據(jù)。[方法]對夜來香揮發(fā)油提取物中驅(qū)蚊成分進(jìn)行分離與提純，并對其產(chǎn)品開發(fā)進(jìn)行研究。[結(jié)果]從夜來香提取到15.92 g揮發(fā)油，提取率為3.16%。夜來香揮發(fā)油對蚊蟲有較好的殺傷效果。復(fù)方精油具有高效的驅(qū)蚊性，具有良好的市場應(yīng)用價值。復(fù)方精油可以直接涂于皮膚上，對皮膚無刺激作用。[結(jié)論]新型復(fù)方精油可制成固體空氣清新劑。

關(guān)鍵詞 夜來香；揮發(fā)油提取物；驅(qū)蚊作用

中圖分類號 S567 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A 文章編號 0517-6611（2014）03-00770-02

Abstract [Objective] The research aimed to provide theoretical basis and test basis for the development，production and application of new type of mosquito-repellent products. [Method] The mosquito-repellent components were separated and purified from the volatile oil extracts from Centrum nocturnum Linn. And the product development was studied. [Result] 15.92 g volatile oil was extracted from C. nocturnum and the extraction rate was 3.16%. The volatile oil extracted from C. nocturnum had stronger killing effects on mosquitoes and pests. The compound essential oil had high-efficiency mosquito-repellent effects and good market application values. The compound essential oil could be directly smeared on the skin and it had no simulation on skin. [Conclusion] New type of compound essential oil could be made into solid air freshener.

Key words Centrum nocturnum Linn； Volatile oil extracts； Mosquito-repellent effects

夜來香（Centrum nocturnum Linn）為夜香樹屬茄科植物，在我國南方地區(qū)較為常見，其性溫味辛，具有行氣止痛鎮(zhèn)定之功效[1]；其花夜間香氣獨特而有刺激性，其中揮發(fā)油提取物具有高效的驅(qū)蚊作用[2]，但是對此揮發(fā)油提取物中驅(qū)蚊成分的分離提純以及產(chǎn)品應(yīng)用報道較少。筆者對揮發(fā)油提取物中驅(qū)蚊成分的分離提純以及產(chǎn)品開發(fā)進(jìn)行研究，旨在為新型驅(qū)蚊產(chǎn)品的開發(fā)生產(chǎn)應(yīng)用提供一定的提供理論依據(jù)和試驗數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

1.1.1 植物材料。植物材料為夜來香樹苗，產(chǎn)自江蘇省宿遷地區(qū)。

1.1.2 試劑。

無水乙醚（標(biāo)準(zhǔn)分析純）、無水氯化鈣、鄰苯二甲酸丁酯標(biāo)準(zhǔn)品（從國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)網(wǎng)上購買）、石油醚（60～90 ℃）、乙酸乙酯（分析純）、碘顆粒若干、龍虎牌風(fēng)油精、六神驅(qū)蚊花露水、月見草基礎(chǔ)油、甜橙精油、薄荷精油、薰衣草精油、卡拉膠和保水劑（均從青島惠德海洋生物技術(shù)公司購買，專門用于生產(chǎn)固體清新劑）吐溫80、蒸餾水、脫毛劑（8%的硫化鈉酒精溶液，現(xiàn)用現(xiàn)配）。

1.1.3 活體動物。

無翅果蠅（上海海洋大學(xué)食品學(xué)院海洋生物制藥實驗室培養(yǎng)后，挑選整齊一致的初期幼蟲供試）；昆明鼠（購自上海西普爾-必凱實驗動物有限公司，許可證號為SCXK（滬）2008-0016）。

1.1.4 試驗儀器。

SB-4200DT超聲波發(fā)生器（寧波新藝生物技術(shù)有限公司）；SHZ-9813循環(huán)水式多用真空汞（鞏義市予華儀器有限公司）；RE-52C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海青浦滬西儀器廠）；HH.S11-2-S水浴鍋（上海新苗醫(yī)療儀器器械制造有限公司）；廣口瓶500 ml；中速濾紙若干；毛細(xì)管；硅膠板若干；層析色譜柱；燒杯500 ml、培養(yǎng)皿、紗布、濾紙若干；粗硅膠。

1.2 試驗方法

1.2.1 夜來香揮發(fā)油的提取[2]。

采集夜來香白天花朵與嫩枝，切碎后風(fēng)干7 d。將風(fēng)干的樣品裝入燒瓶內(nèi)，放入超聲波提取器中進(jìn)行揮發(fā)油提取。在燒瓶內(nèi)加入無水乙醚，室溫下抽提0.5 h。采用梯度提取法提取4次，使?jié)舛戎饾u增加，達(dá)到濃縮的效果，每提取1次后抽濾1次。最后，用無水氯化鈣進(jìn)行干燥，得到深綠色透明的揮發(fā)油。

1.2.2 夜來香揮發(fā)油的分離純化[3-5]。

將粗硅膠與粗提取物拌勻后，再填入層析柱中，然后再加壓用石油醚（60～90 ℃）與乙酸乙酯混合液（20∶1）過柱。每收集1 000 ml濾液合并40 ℃下旋蒸1次，將所得產(chǎn)物以鄰苯二甲酸丁酯為標(biāo)準(zhǔn)物進(jìn)行TLC分析，收集所有含鄰苯二甲酸丁酯的提取物。

1.2.3 夜來香揮發(fā)油提取物驅(qū)蚊效果的檢測[2]。

將夜來香揮發(fā)油提取物與無水乙醇1∶1稀釋。將20頭果蠅用乙醚麻醉后置于培養(yǎng)皿中，用紗布將培養(yǎng)皿包裹起來，等乙醚對果蠅的麻醉作用消失以后，將滴有夜來香提取物乙醇稀釋液的濾紙固定于紗布外，濾紙打孔保持空氣流通，平行3組，并設(shè)立空白對照組，30 min內(nèi)觀察果蠅的情況。

1.2.4 復(fù)方精油配置及其驅(qū)蚊效果的檢測[2]。

將夜來香揮發(fā)油提取物分別與月見草、甜橙、薄荷、薰衣草精油進(jìn)行1∶0.5、1∶1、1∶2、1∶3、1∶4、1∶5、1∶5.5、1∶6稀釋。將20頭果蠅用乙醚麻醉后，置于培養(yǎng)皿中，用紗布將培養(yǎng)皿包裹起來，等乙醚對果蠅的麻醉作用消失以后，將滴有混合精油的濾紙固定于紗布外，濾紙打孔保持空氣流通。各比例平行3組，并設(shè)立空白對照組，30 min內(nèi)觀察果蠅的情況。

1.2.5 復(fù)方精油與市場上驅(qū)蚊產(chǎn)品驅(qū)蚊效果的對比[2]。

將20頭果蠅用乙醚麻醉后置于培養(yǎng)皿中，用紗布將培養(yǎng)皿包裹起來，等乙醚對果蠅的麻醉作用消失以后，將滴有復(fù)方精油的濾紙固定于于紗布外，濾紙打孔保持空氣流通。同時在相同處理的培養(yǎng)皿外面，用滴有等量的龍虎牌風(fēng)油精或六神驅(qū)蚊花露水的濾紙固定于紗布外，濾紙同樣打孔保持空氣流通。將二者進(jìn)行對比，記錄果蠅全部致死的時間。各設(shè)立平行3組。

1.2.6 復(fù)方精油皮膚刺激試驗[6-8]。

用無水乙醚浸泡11個棉球，用棉球麻醉11只昆明鼠，約10 s（若時間過長會使小鼠致死），然后用現(xiàn)配的脫毛劑對11只小鼠背部進(jìn)行脫毛（脫毛區(qū)域為3 cm×3 cm），再將配好的混合精油涂于紗布上，紗布覆蓋于小鼠的裸露的背部，每只老鼠對應(yīng)1種比例的混合復(fù)方精油（復(fù)方精油中加入10倍精油量的月見草基礎(chǔ)油）。4 h后每個比例各追加4只小鼠。在相同的培養(yǎng)生存條件下，連續(xù)14 d觀察小鼠。

1.2.7 復(fù)方精油制成的固體清新劑及其驅(qū)蚊效果檢測[9-10]。

將卡拉膠1.0 g、蒸餾水100.0 ml、保水劑1.0 ml、吐溫80 4.0 ml、復(fù)方精油2.0 ml 混合，85～90 ℃下攪拌混合均勻，迅速冷卻至室溫。

將20頭果蠅用乙醚麻醉后置于培養(yǎng)皿中，用紗布將培養(yǎng)皿包裹起來，等乙醚對果蠅的麻醉作用消失以后，將放有少量固體清新劑的濾紙固定于紗布外，濾紙打孔保持空氣流通，平行3組，并設(shè)立空白對照組，30 min內(nèi)觀察果蠅的情況。

1.2.8 固體空氣清新劑的安全性檢測。

由青島信標(biāo)檢測分析技術(shù)有限公司對自制固體空氣清新劑進(jìn)行安全性檢測，檢測固體空氣清新劑VOC和甲醛的含量，檢測報告（編號QT1310280306）表明自制固體空氣清新劑是安全的。

2 結(jié)果與分析

2.1 夜來香揮發(fā)油的提取和分離純化

100棵夜來香苗的嫩子和花朵（503.80 g）采用超生提取法提取到揮發(fā)油約60 ml（粗制）。夜來香揮發(fā)油提取物中主要驅(qū)蚊成分為鄰苯二甲酸丁酯，因此以鄰苯二甲酸丁酯為標(biāo)準(zhǔn)物，對夜來香提取物進(jìn)行層析柱分離，去除葉綠素等雜質(zhì)。過硅膠柱時，從編號60的試管開始出現(xiàn)鄰苯二甲酸丁酯，直至編號105的試管均有，合并這45管后40 ℃下蒸發(fā)1次，得到夜來香揮發(fā)油35 ml，重量達(dá)15.92 g（精制），提取率為3.16%，提取率較低，提取成本較高。

2.2 夜來香揮發(fā)油提取物驅(qū)蚊效果的檢測

試驗表明，含有夜來香揮發(fā)油提取物的試驗組在30 min后全部死亡，而不含夜來香提取物的空白組全部存活，說明夜來香對蚊蟲有較好的殺傷效果。

2.3 復(fù)方精油配置及其驅(qū)蚊效果的檢測

由于提純的精油不可以直接使用，需要與其他精油混合使用，因此開展了夜來香揮發(fā)油提取物與其他精油配比成復(fù)方精油的研究。

試驗表明，夜來香揮發(fā)油提取物與月見草精油的混合物對蚊蟲沒有殺傷作用。從圖1可以看出，夜來香揮發(fā)油提取物與甜橙精油的混合比例為1∶1、1∶3、1∶4、1∶5、1∶5.5時，對蚊蟲具有較好的殺傷作用。從圖2可以看出，夜來香揮發(fā)油提取物與薄荷精油的混合比例為1∶1、1∶2、1∶3、1∶4時對蚊蟲有較好的殺傷效果。從圖3可以看出，夜來香揮發(fā)油提取物與薰衣草的混合物比例為1∶4和1∶5時對蚊蟲具有較好的殺傷作用。另外，當(dāng)夜來香與甜橙的比例為1∶2時，試驗數(shù)據(jù)有些反常，但經(jīng)過2次的重復(fù)檢測，結(jié)果類似，其原因有待探討。

通過對比發(fā)現(xiàn)，夜來香揮發(fā)油提取物與其他精油的混合物對蚊蟲的殺傷作用除與夜來香提取物的濃度有關(guān)外，應(yīng)還與精油的揮發(fā)性有關(guān)。由于月見草為基礎(chǔ)油類，揮發(fā)性極低，因此殺傷效果較弱甚至沒有。