王寶珍 ，解紅霞，烏日寧，孫冉冉

（1.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010110； 2.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院藥劑部，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010059）

庫(kù)頁(yè)懸鉤子為薔薇科庫(kù)頁(yè)懸鉤子 Rubus sachalinensis Leveille的干燥莖，又名懸鉤子木，蒙藥名甘達(dá)嘎日[1]。從懸鉤子屬藥用植物中分離得到多種化學(xué)成分，主要包括黃酮類、萜類、生物堿類、甾體類、醌類(少量)、有機(jī)酸類及鞣質(zhì)類[2－4]。萜類化合物是懸鉤子屬藥用植物的主要化合物類型。目前己對(duì)30余種同屬植物的化學(xué)成分進(jìn)行了研究，報(bào)道了60余種三萜（苷）化合物，其母核主要為烏蘇烷型和齊墩果烷型，少數(shù)為羽扇豆烷型[5]。蒙藥治感冒、咳嗽、頭痛藥方中大多以庫(kù)頁(yè)懸鉤子為主藥或配伍有庫(kù)頁(yè)懸鉤子，為蒙醫(yī)常用藥[6－7]。吳香杰等[8]報(bào)道了庫(kù)頁(yè)懸鉤子的總黃酮含量測(cè)定方法，但有關(guān)庫(kù)頁(yè)懸鉤子總皂苷的含量測(cè)定未見(jiàn)報(bào)道。筆者建立了該藥材總皂苷的含量測(cè)定方法，并比較了不同采收期總皂苷的含量差異，確定了最佳采收期。

1 儀器與試藥

ESJ200－4型電子分析天平（沈陽(yáng)龍騰電子有限公司）；HHS4型電熱恒溫水浴鍋（北京科偉永興儀器有限公司）；TU－1901型雙光束紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（北京普析儀器有限責(zé)任公司）；IKA－RV10型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（德國(guó)）。庫(kù)頁(yè)懸鉤子采集于內(nèi)蒙古呼和浩特市小井溝，由內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)藥用植物教研室喬俊纏教授鑒定；齊墩果酸對(duì)照品（上海源葉生物科技有限公司，批號(hào)為20120228）；其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液制備

精密稱取齊墩果酸對(duì)照品2.74mg，加無(wú)水甲醇溶解為每1.0 mL含齊墩果酸0.548mg的溶液，搖勻即得對(duì)照品溶液。精密稱取藥材 0.5 g，置圓底燒瓶，用70%乙醇30 mL回流提取3次，每次2 h，合并濾液濃縮旋蒸，轉(zhuǎn)移至分液漏斗，用石油醚等體積萃取3次，將下層濃縮至25 mL，精密吸取10 mL，用水飽和正丁醇萃取3次，每次10 mL，靜置，棄去水層，合并正丁醇，將正丁醇溶液減壓蒸干，殘?jiān)眉状既芙?，轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶，即得供試品溶液[9]。

2.2 測(cè)定波長(zhǎng)選擇

懸鉤子屬的三萜類化合物其母核主要為烏蘇烷型和齊墩果烷型，據(jù)其特點(diǎn)，選擇齊墩果酸為對(duì)照品，用5%香草醛－冰乙酸和高氯酸染色，采用分光光度法進(jìn)行比色測(cè)定。在200～800 nm波長(zhǎng)范圍進(jìn)行光譜掃描，光譜圖見(jiàn)圖1。對(duì)照品和樣品在547 nm波長(zhǎng)處均有明顯吸收，故選547 nm為測(cè)定波長(zhǎng)。

圖1 紫外吸收光譜圖

2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：精密吸取齊墩果酸對(duì)照品溶液0.02，0.06，0.2，0.4，0.6，0.8 mL 置具塞試管中，水浴揮干溶劑，依次加入0.2 mL 5%香草醛－冰醋酸溶液、0.8 mL高氯酸，搖勻，于60℃水浴加熱15 min，取出迅速冷卻，終止反應(yīng)。加入5 mL乙酸乙酯，搖勻，于547 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。以吸光度(Y)對(duì)齊墩果酸對(duì)照品取樣量(X)進(jìn)行回歸分析，得回歸方程 Y＝6.77 X－0.022 1，（R2＝0.999 2），齊墩果酸進(jìn)樣量在 0.010 96 ～0.438 40 g/L 范圍內(nèi)與吸光度線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：精密吸取對(duì)照品溶液0.1 mL，按擬訂方法在547 nm波長(zhǎng)重復(fù)進(jìn)樣6次，分別測(cè)定吸光度值。結(jié)果的 RSD為0.22%，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密量取同一供試品溶液0.5 mL，按擬訂方法分別配置溶液后于 0，15，30，45，60，75 min 時(shí)進(jìn)樣，測(cè)定吸光度值，結(jié)果的 RSD為0.31%，表明樣品溶液在75 min內(nèi)穩(wěn)定，符合含量測(cè)定要求。

重復(fù)性試驗(yàn)：取樣品 6份，每份約 0.5 g，精密稱定，按 2.1項(xiàng)下方法制備樣品溶液，按擬定方法測(cè)定吸光度值，計(jì)算含量。結(jié)果的 RSD為1.28%，表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：取已知含量的供試品粉末約0.25 g，精密稱定 6 份，加入質(zhì)量濃度為 1.01 g/L 的標(biāo)準(zhǔn)品 1.75 mL，按 2.1 項(xiàng)下方法制備樣品溶液，精密吸取0.5 mL，按擬訂方法測(cè)定吸光度值，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 總皂苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝5）

2.4 樣品含量測(cè)定

對(duì)5批不同采收期樣品，按2.1項(xiàng)下方法制備樣品溶液，按擬訂方法測(cè)定吸光度，計(jì)算含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果（n＝3）

本試驗(yàn)通過(guò)加熱回流提取法對(duì)5批庫(kù)頁(yè)懸鉤子進(jìn)行了總皂苷含量測(cè)定，其總皂苷含量均較高，其中9月的樣品含量最高，可初步認(rèn)為9月為蒙藥庫(kù)頁(yè)懸鉤子的最佳采收時(shí)期。

3 討論

對(duì)空白試劑作為參比溶液，以及加顯色劑的空白溶劑作為參比溶液分別進(jìn)行了考察，并與供試品溶液的測(cè)定結(jié)果進(jìn)行了比較。結(jié)果表明，加顯色劑的空白溶劑作參比溶液的色譜圖較好，故選用加顯色劑的空白溶劑作為參比溶液。參考文獻(xiàn)[10]選用70%乙醇為提取溶劑，分別對(duì)熱回流、冷浸、超聲提取3種方法進(jìn)行了對(duì)比。結(jié)果表明，熱回流提取方法提取較為完全，總皂苷含量較高，故選用熱回流方法提取供試品溶液。在萃取過(guò)程中，進(jìn)行了2種萃取方法的考察，即采用正丁醇萃取和水飽和正丁醇萃取?？疾旖Y(jié)果表明，采用水飽和正丁醇萃取效果較好，故最終確定該方法。

通過(guò)考察不同采收期庫(kù)頁(yè)懸鉤子中總皂苷的含量，發(fā)現(xiàn)不同采收期含量差異較大，最佳采收季節(jié)為9月。

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