汪海宣程慶兵姜 麗

（1 安徽省合肥市食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)所，安徽 合肥 238000；2 安徽省巢湖市今辰藥業(yè)有限公司，安徽 合肥 238000）

GC法測(cè)定中藥黃芪中五氯苯胺和滅蟻靈的殘留量

汪海宣1程慶兵1姜 麗2

（1 安徽省合肥市食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)所，安徽 合肥 238000；2 安徽省巢湖市今辰藥業(yè)有限公司，安徽 合肥 238000）

目的 立測(cè)定栽培黃芪中五氯苯胺和滅蟻靈的殘留量的一種毛細(xì)管柱氣相色譜的分析方法。方法 樣品經(jīng)有機(jī)溶劑超聲萃取、以濃硫酸磺化后，采用不分流進(jìn)樣方式，用HP-5彈性石英毛細(xì)管柱經(jīng)柱程序升溫技術(shù)分離，并用電子捕獲檢測(cè)器檢測(cè)。結(jié)果 五氯苯胺和滅蟻靈三水平的平均回收率分別為75.31%～106.31%，RSD分別為2.51%～6.98%；五氯苯胺的標(biāo)準(zhǔn)曲線為：y=194465x+209.21（r=0.9996）、滅蟻靈的標(biāo)準(zhǔn)曲線為：y=88626x+209.21（r=0.9995），五氯苯胺和滅蟻靈的線性范圍：2～0.02 μg/mL。結(jié)論 該法簡(jiǎn)便，精密度、重復(fù)性及凈化效果好，可用于黃芪中五氯苯胺和滅蟻靈的殘留檢測(cè)。

黃芪；五氯苯胺和滅蟻靈殘留量；氣相色譜法

近年來，回歸大自然的潮流使人們對(duì)綠色藥品更為關(guān)注，世界各國(guó)對(duì)天然藥物的需求日益擴(kuò)大。有機(jī)氯農(nóng)藥是用于防治植物病、蟲害的組成成分中含有有機(jī)氯元素的有機(jī)化合物。其化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，脂溶性大，殘效期長(zhǎng)，易在脂肪體內(nèi)蓄積，造成慢性中毒，嚴(yán)重危及人體健康[1]。我國(guó)出口的中草藥在歐美等國(guó)市場(chǎng)上多次因農(nóng)藥殘留超標(biāo)等原因被查扣，農(nóng)藥殘留污染已成為中藥材走向世界的障礙，成為當(dāng)前中藥材生產(chǎn)中急待解決的重要問題[2]。盡管我國(guó)已在1983年禁止使用六六六、滴滴涕等有機(jī)氯農(nóng)藥，但由于其殘效期長(zhǎng)，至今在土壤、地下水等環(huán)境中仍有殘存。而藥材的種植期較長(zhǎng)，尤其是多年生的根類藥材，易受有機(jī)氯農(nóng)藥的污染。對(duì)甘草中有機(jī)氯農(nóng)藥的殘留量做了分析研究，呼吁有關(guān)方面對(duì)農(nóng)藥污染中藥材的問題引起重視，確保中藥材的質(zhì)量。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 藥材

黃芪（批號(hào)：20130101、20130212、20130401，上海海虹實(shí)業(yè)（集團(tuán)）巢湖今辰藥業(yè)有限公司提供），于60 ℃干燥4 h，冷至室溫后，粉碎，過三號(hào)篩，放入具塞錐形瓶中備用。

1.2 儀器

Agilent 7890A氣相色譜儀，附電子捕獲檢測(cè)器及自動(dòng)進(jìn)樣器；HP-5毛細(xì)管柱；XP-5電子天平；RV10旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（IKA）。

1.3 試劑

農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品：五氯苯胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所提供，濃度為200 μg/mL）；滅蟻靈標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所提供，濃度為200 μg/mL）；丙酮、石油醚（沸程60～90 ℃）、二氯甲烷均為分析純，且全部經(jīng)過重蒸。

2 實(shí)驗(yàn)方法[2,3]與結(jié)果

2.1 溶液的配制

2.1.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

精密量取五氯苯胺和滅蟻靈標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液各1 mL，置于100 mL容量瓶中，用石油醚（60～90 ℃）稀釋至刻度（2 μg/mL），作為標(biāo)準(zhǔn)使用液。

2.1.2 供試品溶液的配制[4]

精密稱取細(xì)粉4 g，置100 mL具塞錐形瓶中，加水20 mL浸泡過夜，精密加丙酮40 mL，稱定重量，超聲處理30 min，放冷，再稱定重量，用丙酮補(bǔ)足減失的重量，再加氯化鈉6 g和二氯甲烷30 mL，稱定重量，超聲處理15 min，直至氯化鈉完全溶解，再稱定重量，用二氯甲烷補(bǔ)足減失的重量，靜置使水相與有機(jī)相完全分層，將有機(jī)相迅速移入裝有無(wú)水硫酸鈉10g的100 mL具塞錐形瓶中，脫水4 h，精密量取35 mL，置100 mL旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶中，40 ℃水浴上減壓濃縮至近干，加少量石油醚（60～90 ℃）如前反復(fù)操作至二氯甲烷與丙酮除凈，用石油醚（60～90 ℃）溶解并轉(zhuǎn)移至10 mL具塞刻度離心管中，加石油醚（60～90 ℃）精密稀釋至5 mL，小心加入硫酸1 mL，振搖1 min，離心（3000 r/min）10 min，精密量取上清液2 mL，用0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.2 色譜條件

載氣：高純氮（純度＞99.999%），流速為1.0 mL/min；進(jìn)樣口溫度：280 ℃，進(jìn)樣量為1 μL，不分流進(jìn)樣；ECD檢測(cè)器溫度為300 ℃；程序升溫：初始溫度90 ℃，保持1 min然后以40 ℃/min升至170 ℃，保持5 min；再以3 ℃/min升至230 ℃，保持3 min。在此色譜條件下，2 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)使用液中五氯苯胺和滅蟻靈的出峰順序見圖譜1。

圖1 五氯苯胺和滅蟻靈混合對(duì)照溶液的色譜圖[保留時(shí)間（min）：11.518-五氯苯胺、25.700-滅蟻靈]

2.3 精密度試驗(yàn)

取2 μg/mL標(biāo)準(zhǔn)使用液連續(xù)進(jìn)樣5次，按2.2色譜條件進(jìn)行測(cè)定，五氯苯胺和滅蟻靈的峰面積值的RSD（%）分別為1.6%、2.0%。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密量取標(biāo)準(zhǔn)使用液，用石油醚制成每毫升中分別含2.00 μg、1.00 μg、0.40 μg、0.20 μg、0.08 μg、0.04 μg、0.02 μg的溶液。分別進(jìn)樣1 μL，按2.2色譜條件進(jìn)行測(cè)定，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，得到五氯苯胺的標(biāo)準(zhǔn)曲線為：y=194465x+209.21（r=0.9996）、滅蟻靈的標(biāo)準(zhǔn)曲線為：y=88626x+209.21（r=0.9995）。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取2 μg/mL標(biāo)準(zhǔn)使用液分別在0 h、2 h、4 h、8 h、12 h進(jìn)樣，按2.2色譜條件進(jìn)行測(cè)定，五氯苯胺和滅蟻靈的RSD（%）分別為：2.1、1.3?？芍迓缺桨泛蜏缦侅`在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 方法檢出限

首先用標(biāo)準(zhǔn)使用液配制一系列低濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液，以石油醚為溶劑，然后按2.2色譜條件進(jìn)樣，再以信噪比（S/N=3）時(shí)相應(yīng)濃度確定檢出限。五氯苯的檢出限為0.40 ng/mL，滅蟻靈的檢出限為0.16 ng/mL。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取批號(hào)為20130101的黃芪樣品6份，按2.1.2對(duì)樣品的處理方法進(jìn)行提取、凈化，然后按2.2色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算其峰面積的RSD，結(jié)果表明，該方法重復(fù)性良好。

2.8 供試品的測(cè)定

精密稱取不同批號(hào)的黃芪樣品各3份，按上述方法對(duì)黃芪樣品進(jìn)行提取、凈化，然后按2.1.2色譜條件進(jìn)樣分析，測(cè)定五氯苯胺和滅蟻靈的含量。結(jié)果表明：黃芪中沒有與滅蟻靈標(biāo)準(zhǔn)品相對(duì)應(yīng)的峰出現(xiàn)，故該三批樣品中未檢出滅蟻靈，含五氯苯胺的分別為1.110-4ng/g、2.110-4ng/g和2.3×10-4ng/g。

2.9 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取批號(hào)為20130101的黃芪樣品9份，分別加入標(biāo)準(zhǔn)混合對(duì)照品，三個(gè)添加水平，每個(gè)水平份樣，混勻，按2.2.1對(duì)樣品進(jìn)行提取、凈化和測(cè)定，所得結(jié)果扣除相應(yīng)樣品的各農(nóng)藥含量后，計(jì)算各水平加樣回收率，用0.08 μg/mL標(biāo)準(zhǔn)混合對(duì)照品溶液做了隨行標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果表明，測(cè)定方法的準(zhǔn)確度良好。

3 結(jié)論與討論

3.1 結(jié)論

由結(jié)果可知，本實(shí)驗(yàn)的回收率、精密度及重現(xiàn)性試驗(yàn)結(jié)果均符合農(nóng)藥分析的要求。《中國(guó)藥典》2005年版均規(guī)定黃芪中五氯苯胺（五氯硝基苯的降解產(chǎn)物）不得高于100 ng/g，本實(shí)驗(yàn)中藥材黃芪中農(nóng)藥五氯苯胺的殘留量在1.55×10-4～2.3×10-4ng/g，符合標(biāo)準(zhǔn)。

3.2 討論

本實(shí)驗(yàn)采用丙酮水溶液超聲波提取，加入氯化鈉和二氯甲烷，利用鹽析的原理使有機(jī)相和水相很好的分層[5]。同時(shí)使農(nóng)藥由水相進(jìn)入有機(jī)相，取出部分有機(jī)相濃縮、凈化，溶液的分配不需要在分液漏斗中進(jìn)行，這樣可以減少提取的次數(shù)。再在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀水浴蒸至近干，濃縮后的有機(jī)相放在帶有可讀的離心管中，稀釋到所需刻度，然后加硫酸進(jìn)行凈化處理，而且用硫酸磺化的步驟是在帶有刻度的離心管中進(jìn)行，離心后取部分上清液作為待測(cè)液進(jìn)行測(cè)定。另外，采用磺化法對(duì)于中草藥的干擾成分凈化非常完全，無(wú)干擾峰的存在。根據(jù)加樣回收率實(shí)驗(yàn)和精密度實(shí)驗(yàn)的結(jié)果可以看出，本法也符合國(guó)家關(guān)于農(nóng)藥殘留檢測(cè)的要求且本法簡(jiǎn)化了提取和凈化操作，減少了損失，提高了效率。

[1] 榮維廣,郭華,楊紅.我國(guó)中藥材農(nóng)藥殘留污染研究現(xiàn)狀[J].農(nóng)藥,2006,45(5):305-306.

[2] 朱日然,瀚海洋,朱宗民.黃芪中有機(jī)氯類農(nóng)藥殘留量的毛細(xì)管氣相色譜測(cè)定[J].齊魯藥事,2009,28(11):663-664.

[3] 孟輝,劉晨明.中藥材黃芪中農(nóng)藥殘留量檢測(cè)方法研究[J].遼東學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2009,16(1):23-24.

[4] 中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M].2010年版.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010:附錄57.

[5] 蔣開年,宋學(xué)偉,崔志斌,等.氣相色譜法測(cè)定黃芪甘草中有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量[J].西南民族大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2008,34(1): 120-123.

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1671-8194（2014）18-0091-02