田曉靜，史兵偉，丁志祥，錢高潮

（南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬常州市中醫(yī)醫(yī)院檢驗科，江蘇常州 213003）

活動期類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者IL-17和IL-27水平變化及其臨床意義

田曉靜，史兵偉，丁志祥，錢高潮

（南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬常州市中醫(yī)醫(yī)院檢驗科，江蘇常州 213003）

目的分析活動期類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(Rheumatoid arthritis，RA)患者血清和關(guān)節(jié)液中白細胞介素-17 (Interleukin-17，IL-17)和白細胞介素-27(Interleukin-25，IL-25)水平，探討IL-17和IL-27在活動期RA患者中的臨床意義及其與相關(guān)實驗指標(biāo)的相關(guān)性。方法選擇56例活動期RA患者為實驗組，30例健康體檢者為對照組，采用免疫散射比濁法測定血清C反應(yīng)蛋白(CRP)和類風(fēng)濕因子(RF)的濃度，用魏氏法測定紅細胞沉降率(ESR)，用化學(xué)發(fā)光微粒子免疫檢測法檢測抗環(huán)胍氨酸多肽抗體（CCP）濃度，用ELISA法測定健康體檢者血清和RA患者血清及關(guān)節(jié)液中的IL-17、IL-27水平。結(jié)果RA患者血清和關(guān)節(jié)液中IL-17和IL-27水平明顯高于對照組；RA患者血清IL-17水平與ESR、CRP、CCP呈正相關(guān)性，關(guān)節(jié)液中IL-17水平與ESR、CRP呈正相關(guān)性，與RF無相關(guān)性；RA患者血清及關(guān)節(jié)液中IL-27水平與ESR、CRP、RF和CCP無明顯相關(guān)性；RA患者血清及關(guān)節(jié)液中IL-17與IL-27水平呈正相關(guān)性。結(jié)論IL-17和IL-27在RA患者的血清和關(guān)節(jié)液中過度表達，提示IL-17和IL-27參與了RA的免疫性致病機制，其具體作用尚待進一步研究。

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；白細胞介素- 17；白細胞介素-27

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)是一種病因不明的自身免疫性疾病，以慢性、對稱性多關(guān)節(jié)滑膜炎和關(guān)節(jié)外病變?yōu)橹饕R床表現(xiàn)，我國RA的發(fā)病率為0.32%～0.36%。RA的發(fā)病機制和病因至今尚未完全清楚，細胞因子網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié)異常被認為在RA的發(fā)生、炎癥的遷延和關(guān)節(jié)的破壞中起著重要的作用。IL-17是由Th17細胞分泌的主要細胞因子，IL-17可通過誘導(dǎo)其他細胞因子，蛋白酶和粘附分子的分泌從而誘導(dǎo)關(guān)節(jié)的破壞和滑膜炎的發(fā)作[1]。IL-27是IL-12超家族成員之一，在自身免疫性疾病的炎癥反應(yīng)過程中起著重要作用，IL-27具有免疫抑制和免疫促進雙重特點。本研究采用ELISA法檢測RA患者外周血和關(guān)節(jié)液中IL-17和IL-27的水平，進一步分析上述細胞因子與RA實驗指標(biāo)類風(fēng)濕因子(RF)、抗環(huán)胍氨酸多肽抗體(CCP)、C反應(yīng)蛋白(CRP)和紅細胞沉降率(ESR)的關(guān)系，及IL-17和IL-27之間的相關(guān)性，探討兩種細胞因子在RA的發(fā)病及炎癥遷延中的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬常州市中醫(yī)醫(yī)院風(fēng)濕免疫科2011年2月至2012年9月RA住院和門診患者56例，均符合1987年美國風(fēng)濕病學(xué)會(ACR)制定的RA診斷標(biāo)準[2]，其中男性16例，女性40例，平均(40.38±16.56)歲，且病情處于活動期。RA患者活動期判別標(biāo)準：(1)關(guān)節(jié)腫脹≥6個；(2)關(guān)節(jié)壓痛≥6個；(3)晨僵≥45 min；(4)血沉(ESR)≥30 mm/h；(5)hsCRP大于正常值上限的1.5倍。RA患者存在(1)+(2)同時伴有(3)、(4)、(5)三項的任何兩項被認為處于活動期；不同時滿足(1)+(2)或(3)、(4)、(5)僅一項，被認為處于靜止期。健康體檢人員30例，性別年齡與患者組差異無統(tǒng)計學(xué)意義。各組人員均排除其他自身免疫性疾病及嚴重心肺功能異常者。

1.2 標(biāo)本采集與分組收集56例RA患者血清標(biāo)本(血清組)，其中30例關(guān)節(jié)液標(biāo)本(關(guān)節(jié)液組)，30例正常健康人外周血作為對照組。抽取各組靜脈血3 ml自行凝固，3 000 r/min離心15 min，收集上清；肝素抗凝的關(guān)節(jié)滑液經(jīng)透明質(zhì)酸酶(10 U/ml)37℃處理15 min，3 000 r/min離心15 min，收集上清，分裝后-80℃冷凍保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 實驗方法RF和CRP采用免疫透射比濁法，采用西門子BNⅡ全自動蛋白分析儀器測定，試劑為西門子公司生產(chǎn)；ESR用魏氏法測定；IL-17和IL-27采用ELISA法，試劑盒由美國RrapidBio Lab公司生產(chǎn)；抗CCP抗體由雅培2000化學(xué)發(fā)光法測定，試劑由雅培公司生產(chǎn)。按說明書操作步驟嚴格進行。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法實驗數(shù)據(jù)用SPSS11.5軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準差(±s)表示，其組間比較采用t檢驗。各指標(biāo)間的相關(guān)性采用Pearson相關(guān)性分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 RA患者組和健康對照組IL-17、IL-27水平的比較RA患者血清和關(guān)節(jié)液中IL-17、IL-27水平明顯高于健康對照組血清，RA患者關(guān)節(jié)液中IL-17、IL-27水平明顯高于RA患者血清組，其差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，見表1。

表1 RA患者組和健康對照組IL-17、IL-27水平的比較(±s)

表1 RA患者組和健康對照組IL-17、IL-27水平的比較(±s)

注：與健康對照血清組比較，aP＜0.05，bP＜0. 01；RA血清組與RA關(guān)節(jié)液組比較，cP＜0.05。

組別例數(shù)IL-17(pg/ml)IL-27(pg/ml)健康對照血清組RA血清組RA關(guān)節(jié)液組30 56 30 43.9±7.8 76.3±13.5a101.6±25.4c37.6±9.1 89.2±18.2a113.5±31.5c

2.2 IL-17、IL-27水平與有關(guān)實驗指標(biāo)的相關(guān)性RA患者血清IL-17水平與ESR、CRP、CCP呈正相關(guān)性，關(guān)節(jié)液中IL-17水平與ESR、CRP呈正相關(guān)性，血清及關(guān)節(jié)液中IL-17與RF均無明顯相關(guān)性；RA患者血清及關(guān)節(jié)液中IL-27水平與ESR、CRP、RF和CCP無相關(guān)性，見表2。

表2 IL-17、IL-27水平與有關(guān)實驗指標(biāo)的相關(guān)性(±s)

表2 IL-17、IL-27水平與有關(guān)實驗指標(biāo)的相關(guān)性(±s)

實驗室指標(biāo)結(jié)果CCP(U/ml) RF(IU/ml) CRP(mg/L) ESR(mm/h) 19.56±3.32 126.41±16.58 34.56±8.02 61.26±10.73 r值0.62 0.56 0.77 0.81血清IL-17 P值＜0.05＞0.05＜0.05＜0.05 r值0.58 0.31 0.81 0.49關(guān)節(jié)液IL-17 P值＞0.05＞0.05＜0.01＜0.01 r值0.89 0.87 0.39 0.76血清IL-27 P值＞0.05＞0.05＞0.05＞0.05 r值0.45 0.39 0.65 0.47關(guān)節(jié)液IL-27 P值＞0.05＞0.05＞0.05＞0.05

2.3 RA患者血清及關(guān)節(jié)液IL-17和IL-27水平的相關(guān)性血清中IL-17和IL-27呈正相關(guān)(r=0.95，P＜0.01)，關(guān)節(jié)液中IL-17和IL-27亦呈正相關(guān)(r=0.82，P＜0.05)。

3 討論

RA是一種以累及周圍關(guān)節(jié)為主的多系統(tǒng)性炎癥性自身免疫性疾病，其致殘率和致死率很高，嚴重影響患者的生活質(zhì)量。RA的病因和病理機制尚未完全闡明，多種源自免疫系統(tǒng)和滑膜組織的細胞及細胞因子參與了疾病的發(fā)展。近來有文獻報道，炎癥因子網(wǎng)絡(luò)持續(xù)的激活調(diào)節(jié)異常與自身抗原刺激的免疫反應(yīng)一起成為RA患者關(guān)節(jié)慢性炎癥持續(xù)存在的主要因素。

IL-17是Th17細胞分泌的主要的促炎性細胞因子，在很多自身免疫性疾病中發(fā)揮著重要作用。Kehlen等[3]在RA滑膜中檢測到IL-17mRNA。有文獻報道，IL-17可抑制RA滑膜和骨II型膠原的合成，刺激其分解[4]，體內(nèi)注射IL-17可導(dǎo)致小鼠關(guān)節(jié)的炎癥和軟骨的降解[5]。動物實驗結(jié)果初步顯示，在關(guān)節(jié)炎早期階段，用IL-17中和性抗體治療可以顯著減輕關(guān)節(jié)炎的嚴重程度，阻止關(guān)節(jié)軟骨和骨的進一步破壞，X線上關(guān)節(jié)損傷也被明顯抑制，即使在關(guān)節(jié)炎的晚期階段，仍然可以顯著減緩病程的發(fā)展[6]。IL-17可通過誘導(dǎo)其他細胞因子、蛋白酶和粘附分子的產(chǎn)生發(fā)揮其在RA中的作用。IL-17通過核轉(zhuǎn)錄因子κB (NF-κB)和磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)等細胞通路來促進多種細胞因子分泌，包括IL-6、IL-8及TNF-α等[7-8]；同時IL-17能夠誘導(dǎo)中性粒細胞產(chǎn)生和成熟。IL-17單獨或與IL-1β/TNF-α等協(xié)同刺激關(guān)節(jié)滑膜細胞表達IL-6，這些細胞因子募集炎性細胞，使巨噬細胞、中性粒細胞、幼稚DC細胞和T細胞等在關(guān)節(jié)滑膜處聚集，增強炎癥反應(yīng)，加快滑膜細胞殖[9-10]；而且IL-17能誘導(dǎo)巨噬細胞分泌基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-2、MMP-3、MMP-9及MMP-13[11]，促進軟骨蛋白多糖及膠原降解，增強單核巨噬細胞對軟骨基質(zhì)的破壞[12]。IL-17可以通過上述多種途徑誘導(dǎo)關(guān)節(jié)的破壞。

本文檢測了活動期RA患者血清及部分患者關(guān)節(jié)炎中的IL-17水平，結(jié)果顯示RA患者組IL-17水平較健康對照組顯著增高，關(guān)節(jié)液中水平更高，與國內(nèi)外研究結(jié)果一致[13-14]。CCP、RF、CRP和ESR是RA重要的診斷和預(yù)后判斷指標(biāo)，本文對RA患者IL-17與這些指標(biāo)進行了相關(guān)性分析，結(jié)果表明RA患者血清和關(guān)節(jié)液中IL-17與CRP和ESR水平呈明顯正相關(guān)，提示IL-17與疾病的活動度有關(guān)，IL-17有可能作為RA患者疾病活動的新指標(biāo)之一。Bas等[15]報道CCP抗體與骨侵蝕具有明顯相關(guān)性，本研究亦發(fā)現(xiàn)RA患者血清IL-17與抗CCP抗體亦呈正相關(guān)，表明IL-17可以作為RA患者關(guān)節(jié)骨質(zhì)損害嚴重程度的指標(biāo)之一。但關(guān)節(jié)液中IL-17與CCP抗體無明顯相關(guān)性，可能與標(biāo)本量的收集有關(guān)，需繼續(xù)加大樣本量進一步證實。

2002年，Pflanz等發(fā)現(xiàn)并命名了一種新的屬于IL-12超家族的細胞因子，即IL-27[16]。IL-27由巨噬細胞、DCs和上皮細胞分泌。早期研究認為，IL-27可以誘導(dǎo)Th1細胞的分化，作為促炎性細胞因子在炎癥反應(yīng)中起作用[17]，但是后來進一步研究證實，IL-27不僅可以抑制Th1，還可以抑制Th2和Th17，進而抑制炎癥反應(yīng)[17-18]。在膠原誘導(dǎo)的小鼠骨關(guān)節(jié)模型(CIA)中，注射IL-27后，前炎性細胞因子IL-6和IL-17水平降低，關(guān)節(jié)炎臨床癥狀減輕，骨質(zhì)受損情況亦得到改善[19]。在AA模型中，IL-27可以調(diào)節(jié)IL-17的表達，從而減輕關(guān)節(jié)炎癥，不論是在AA的潛伏期還是復(fù)原期注射IL-27后，都可以部分抑制IL-17反應(yīng)，從而減輕關(guān)節(jié)炎癥[20]。本文研究發(fā)現(xiàn)RA患者血清及關(guān)節(jié)液中IL-27較健康對照組均明顯升高，IL-27水平與CCP，RF，CRP和ESR無明顯相關(guān)性，與堯榮鳳等[21]報道相一致。本研究結(jié)果顯示，RA患者IL-17和IL-27水平均明顯升高，且兩者呈正相關(guān)關(guān)系，說明他們參與了RA的炎性病理過程。那么IL-17和IL-27之間是如何調(diào)節(jié)的，與炎癥的反應(yīng)階段有沒有關(guān)系尚待進一步研究。

綜上所述，IL-27與IL-17之間關(guān)系密切，但IL-27是通過什么途徑在炎癥反應(yīng)的哪個階段調(diào)節(jié)IL-17的表達還不清楚，IL-17是否反過來會影響IL-27的表達尚待進一步研究。相信隨著研究的不斷深入和完善，IL-17和IL-27之間的關(guān)系會逐漸清楚。參考文獻

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Clinical significance of IL-17 and IL-27 concentration in patients with activated rheumatoid arthritis.

TIAN Xiao-jing,SHI Bing-wei,DING Zhi-xiang,QIAN Gao-chao.Department of Clinical Laboratory,Changzhou TCM Affiliated Hospital of Nanjing TCM University,Changzhou 213003,Jiangsu,CHINA

ObjectiveTo determine the concentrations of IL-17 and IL-27 in serum and synovial fluid,and investigate their significance in the pathogenesis of activated rheumatoid arthritis(RA).MethodsThe serum concentrations of CRP and RF in 56 cases of activate RA patients and 30 cases of healthy controls were detected by immune scattering turbidimetry test.Erythrocyte sedimentation rate(ESR)was measured by Wei's method.The serum and synovial fluid concentrations of IL-17 and IL-27 were determined by ELISA.ResultsThe concentrations of serum and synovial fluid IL-17 and IL-27 were significantly higher than those of healthy controls.Furthermore,there were positive correlations between RA serum IL-17 and ESR and CRP and CCP,and there were significantly positive correlations between RA synovial fluid IL-17 with ESR and CRP.There was a significantly positive correlation between RA synovial fluid IL-17 and IL-27,as well as RA serum.ConclusionIL-17 and IL-27 were over expressed in serum and synovial fluid of active RA patients,which revealed that Il-17 and IL-27 may play important roles in the inflammatory pathogenesis of RA.And the relationship between IL-17 and IL-27 need to be further studied.

Rheumatoid arthritis;Interleukin-17;Iinterleukin-27

R593.22

A

1003—6350（2014）11—1635—04

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.11.0633

2013-11-29)

田曉靜。E-mail：txj_99@163.com