羅序英，趙燕,*，涂勇剛，王俊杰，李建科，陳彰毅

(1. 南昌大學(xué) 食品科學(xué)與技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江西 南昌 330047；2. 南昌大學(xué) 生物質(zhì)轉(zhuǎn)化教育部工程研究中心，江西 南昌 330047；3. 江西農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，江西 南昌 330045)

1964年，Bohak[1]用氨基酸分析儀在堿(pH13)處理后的牛胰臟核糖核酸酶 A(RnaseA)中檢出了一種新的氨基酸——賴(lài)丙氨酸( lysinoalanine，LAL )。隨后，學(xué)者們廣泛地從酪蛋白酸鈣(鈉)、嬰幼兒配方奶粉、巴氏殺菌乳、面條、烤燕麥、玉米片、煮蛋白、皮蛋、火腿、雞腿肉以及酵母、大豆分離蛋白、蛋清粉等食品或食品原料中也檢出了LAL[2-11]。富含蛋白質(zhì)的食品或食品原料在高溫或堿處理時(shí)易產(chǎn)生LAL，其實(shí)，即使是在室溫條件下，也會(huì)慢慢形成LAL[6,11]。LAL的產(chǎn)生伴隨著食品中必須氨基酸的減少和外消旋化，使含蛋白質(zhì)的食品營(yíng)養(yǎng)價(jià)值降低[3,12-15]；它甚至還能螯合金屬酶，特異地引發(fā)小鼠腎鈣質(zhì)沉著、腎細(xì)胞巨大及腎小管細(xì)胞壞死[16-18]。在很多嬰兒配方食品中，LAL已經(jīng)開(kāi)始作為一個(gè)質(zhì)量指標(biāo)[9,10]，以避免對(duì)嬰兒造成傷害。

國(guó)外雖已建立了LAL的氨基酸分析儀法[19]、氣相色譜法[6,20]、液相色譜法[4,21]及色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[5,22]等，但LAL的標(biāo)準(zhǔn)分析方法至今仍未確定；國(guó)內(nèi)對(duì)LAL的研究幾乎是空白。本文綜述了目前已報(bào)道的各種LAL的檢測(cè)方法，并總結(jié)各自的優(yōu)缺點(diǎn)，旨在為食品中LAL的檢測(cè)方法提供參考和指導(dǎo)，促進(jìn)LAL的深入研究，確保食品安全。

1 賴(lài)丙氨酸的性質(zhì)

LAL，即Nε-(DL-2-氨基-2羧乙基)-DL-賴(lài)氨酸，有2個(gè)光學(xué)活性中心，因而有兩對(duì)旋光異構(gòu)體，分別為L(zhǎng)L-、LD-和DL-、DD-LAL。由于部分賴(lài)丙氨酸的形成與氨基酸的外消旋化有關(guān)，而形成D-賴(lài)氨酸的條件苛刻、時(shí)間較長(zhǎng)，因此LL-和LD-型比較多見(jiàn)[23]。且用鈉光燈作光源檢測(cè)LL-LAL和LD-LAL的旋光度分別為 100.7°和-14.8°[24]。LAL的穩(wěn)定性比較差，如在乙醇中不穩(wěn)定；水溶液易受熱分解，60℃就有部分LAL分解，約174℃時(shí)LL-、DD-LAL完全分解，約192℃時(shí)，LD-、DL-LAL完全分解；在酸水解過(guò)程中LAL會(huì)迅速消旋化并發(fā)生部分分解[23]。

2 樣品前處理

食品中的LAL多與蛋白質(zhì)結(jié)合，因此在分析食品樣品中的LAL時(shí)都要先經(jīng)過(guò)水解，使LAL得到釋放。食品中蛋白質(zhì)的水解方法有酶水解法、微波輔助水解法、堿水解法和酸水解法，前三種方法對(duì)某些氨基酸而言存在著水解不徹底、氨基酸水解回收率偏低或者破壞某些氨基酸等缺點(diǎn)；而酸水解尤其是鹽酸水解法是一種采用較多的水解方法，它迅速而徹底[25]。因此，一般用鹽酸水解法來(lái)對(duì)樣品進(jìn)行前處理[26]，具體操作為：向樣品中加入適量的6mol/L的鹽酸(以1g蛋白質(zhì)加200mL鹽酸的比例為佳[4])，并滴入幾滴苯酚作保護(hù)劑，在108～110℃水解20～24h，LAL即可得到良好釋放。在分析富含脂肪的樣品時(shí)，為避免脂肪干擾LAL的測(cè)定，通常需要先對(duì)樣品進(jìn)行脫脂處理[5]。

3 檢測(cè)方法

20世紀(jì) 60年代初氨基酸分析儀的問(wèn)世，實(shí)現(xiàn)了氨基酸分析的自動(dòng)化，并使氨基酸分析進(jìn)入了一個(gè)嶄新的階段，也促進(jìn)了LAL的發(fā)現(xiàn)[1]和研究。

20世紀(jì)70至80年代，國(guó)外學(xué)者開(kāi)始致力于LAL檢測(cè)方法的研究，如薄層層析(TLC)法、氨基酸分析儀法和兩步衍生化的氣相色譜(GC)法以及液相色譜(HPLC)法等。除TLC外，其他方法都逐漸地得到發(fā)展和運(yùn)用。用TLC法檢測(cè)食品中的LAL時(shí)，由于儀器的局限性，樣品中的其它茚三酮陽(yáng)性化合物會(huì)干擾測(cè)定結(jié)果，特別在測(cè)定含少量或不定量LAL的樣品時(shí)，結(jié)果偏差更大，所以該方法沒(méi)有得到深入研究和廣泛使用，目前也基本不用此法測(cè)定LAL。當(dāng)時(shí)，兩步衍生化的GC法測(cè)定LAL已逐漸成為一種僅次于氨基酸分析儀法的常規(guī)化檢測(cè)方法；但是，這種方法存在的諸多弊端限制了它的進(jìn)一步發(fā)展。

20世紀(jì)90年代以后至今，檢測(cè)LAL時(shí)用得較多的方法是氨基酸分析儀法、HPLC法和液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS)法。此外，LAL一步衍生化的GC法、脈沖-傅里葉變換核磁共振譜儀法(適合檢測(cè)LAL的非對(duì)映異構(gòu)體)和陰離子交換色譜-積分脈沖安培檢測(cè)法(HPAEC-IPAD)，也具有其各自的優(yōu)勢(shì)。以下分別介紹了LAL的氨基酸分析儀、氣相色譜、液相色譜及色譜-質(zhì)譜聯(lián)用等檢測(cè)方法。

3.1 氨基酸分析儀法

氨基酸分析儀法是一種用于檢測(cè)LAL的較好方法，它不但靈敏度高、重復(fù)性好，還可以同時(shí)測(cè)定多種氨基酸。其最大特點(diǎn)是衍生化反應(yīng)發(fā)生在氨基酸與其他物質(zhì)分離之后，即柱后衍生。因此，分離柱的類(lèi)型(包括柱長(zhǎng)和柱內(nèi)填料)、洗脫液的類(lèi)型和溫度等的選擇非常重要。Slump[19]曾分別選用Bio-Rad Aminex A-4和Beckman M82填充的50cm離子交換柱分離了LAL與其它氨基酸，發(fā)現(xiàn)這兩種填料的分離效果存在差異，用前者分離時(shí)，LAL與甲基賴(lài)氨酸(Me-LAL)的兩種同分異構(gòu)體的洗脫時(shí)間相同；而后者分離效果略好，只稍微受Me-LAL的一種同分異構(gòu)體干擾。用氨基酸分析儀檢測(cè)LAL時(shí)，一般以pH5.3濃度0.35mol/L的檸檬酸鹽緩沖溶液作洗脫液，約 50℃進(jìn)行茚三酮柱后衍生化，但是，對(duì)于某些成分復(fù)雜的樣品中 LAL的檢測(cè)，顯色反應(yīng)控制在 50℃左右會(huì)帶入某些茚三酮的陽(yáng)性干擾物，此時(shí)要適當(dāng)提高顯色反應(yīng)的溫度[9]。茚三酮柱后衍生的方法是美國(guó)官方分析化學(xué)師協(xié)會(huì)(AOAC)分析氨基酸的標(biāo)準(zhǔn)方法，F(xiàn)ritsch等[27]提出用氨基酸分析儀測(cè)定LAL時(shí)，通過(guò)改用鄰苯二甲醛柱后衍生并經(jīng)熒光檢測(cè)，靈敏度和準(zhǔn)確性較茚三酮柱后衍生法明顯提高。Chang等[3]為探討皮蛋腌制過(guò)程中氨基酸的變化及其與LAL形成之間的關(guān)系，采用氨基酸分析儀法對(duì)皮蛋中的氨基酸和形成的LAL進(jìn)行了定量。Schwarzenbolz等[28]利用氨基酸分析儀測(cè)定了幾種富含蛋白質(zhì)的食品在高壓處理過(guò)程中產(chǎn)生的LAL，并發(fā)現(xiàn)LAL的形成量隨壓力增大而增多。

3.2 氣相色譜法

LAL作為一種交聯(lián)氨基酸，不能直接用GC進(jìn)行檢測(cè)，必須經(jīng)過(guò)衍生得到弱極性、低揮發(fā)性和良好熱穩(wěn)定性的衍生物后才能用 GC分離測(cè)定。LAL的衍生化方法不及普通氨基酸的衍生化方法(包括酯化-?；磻?yīng)、烷基化反應(yīng)、硅烷化反應(yīng)等)多。

早期，用GC法檢測(cè)LAL時(shí)，一般通過(guò)兩步(BTFA)衍生法進(jìn)行柱前衍生化，反應(yīng)方程式如圖1a，第一步利用正丁醇、異丁醇或異丙醇等與LAL發(fā)生酯化反應(yīng)；第二步利用三氟乙酸酐、五氟丙酸酐或七氟丁酸酐等與第一步所得產(chǎn)物進(jìn)行?；磻?yīng)。Hasegawa等[20]分別用正丁醇和三氟乙酸酐作酯化和?；噭?，并用2%OV-17/1%OV-210固定液的填充柱進(jìn)行分離，以丁基山崳酸作內(nèi)標(biāo)來(lái)定量，檢測(cè)出堿處理的面筋、大豆球蛋白、溶解酵素和乳白蛋白等樣品中的LAL含量。正丁醇和三氟乙酸酐是兩步衍生化常用的試劑，但學(xué)者們通過(guò)改用其它酯化或?；噭┩瑯舆_(dá)到了較理想的衍生效果。Buser等[29]改用七氟丁酸酐作?；噭⒉捎霉柰榛吲鸸璨Ａе偷讬z測(cè)器(NPD)分別進(jìn)行分離和檢測(cè)，該方法的精密度與離子交換色譜法相近，檢出限可低至100μg/g(以蛋白質(zhì)含量計(jì))。

圖1 LAL的酯化-?；?a)和MTBSTFA(b)衍生化反應(yīng)Fig.1 Derivatization of LAL with BTFA reagent(a)or MTBSTFA(b)

由于兩步衍生化法的酰化和酯化反應(yīng)是在互不相容的介質(zhì)中進(jìn)行，第一步結(jié)束后需將產(chǎn)物旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)蒸干，處理較繁雜。近期興起的另一種衍生化方法是用硅烷化試劑——N-(特丁基二甲基硅烷基)-N-甲基三氟乙酰胺(MTBSTFA)與LAL發(fā)生親核反應(yīng)進(jìn)行一步衍生，即MTBSTFA中的Si與LAL上的N、O結(jié)合生成tBDMSi-LAL化合物(反應(yīng)方程式如圖1b)，然后用GC-FID或GC-NPD等進(jìn)行檢測(cè)[30]。Montilla等[6]和Bosch等[31]首次在溫和的條件下利用MTBSTFA對(duì)LAL進(jìn)行了衍生，選用2,6-二氨基庚二酸(DPA)作內(nèi)標(biāo)，利用GC-FID法對(duì)禽蛋、牛奶等制品中的LAL進(jìn)行了準(zhǔn)確定量。該方法樣品處理簡(jiǎn)單，衍生反應(yīng)條件溫和，可避免大量LAL分解，采用毛細(xì)管柱分離靈敏度和分離度更高，檢測(cè)限較低(約50μg/g)，回收率較高(約94%)，且整個(gè)過(guò)程不需純化樣品，預(yù)處理方便，只需一步衍生化即可進(jìn)樣檢測(cè)。

兩步衍生化的氣相色譜法曾被大量用來(lái)測(cè)定各種食品中的LAL，但是因?yàn)槠溲苌幚矸彪s且條件苛刻，易造成LAL的部分分解，該方法未能繼續(xù)推廣。氣相色譜法本不是常規(guī)氨基酸的常規(guī)測(cè)定方法，由于一步衍生化的氣相色譜法在測(cè)定LAL時(shí)存在一定的優(yōu)勢(shì)，該方法值得繼續(xù)改進(jìn)后進(jìn)一步推廣。

3.3 液相色譜法

分析氨基酸所用的高效液相色譜主要是反相高效液相色譜(RP-HPLC)。用此方法分析 LAL的關(guān)鍵和GC法一樣，在于衍生試劑的選擇。目前主要用5-二甲氨基-1-萘磺酰氯(簡(jiǎn)稱(chēng)丹磺酰氯，即DNS-Cl)和氯甲酸芴甲酯(FMOC-Cl)。它們都能與一、二級(jí)氨基酸反應(yīng)，為充分反應(yīng)并使衍生產(chǎn)物單一，衍生試劑必須過(guò)量。相應(yīng)的反應(yīng)方程式分別如圖2a和2b所示。

圖2 LAL分別與DNS-Cl(a)和FMOC-Cl(b)的衍生化反應(yīng)Fig.2 Derivatization of LAL with DNS-Cl(a)or FMOC-Cl(b)

Badoud等[32]曾在用DNS-Cl衍生LAL時(shí)，以Li2CO3作緩沖溶液，并用甲胺鹽酸鹽來(lái)徹底終止反應(yīng)，達(dá)到了穩(wěn)定DNS-LAL衍生物和減少了因過(guò)量DNS-Cl和DNS-LAL重新反應(yīng)產(chǎn)生大量DNS-NH2副產(chǎn)物的目的；此外，他們?cè)贖PLC分析過(guò)程中利用Nε-甲基-賴(lài)氨酸作內(nèi)標(biāo)來(lái)定量，并采用梯度洗脫程序，進(jìn)而使結(jié)果更準(zhǔn)確，同時(shí)大大縮短了LAL出峰時(shí)間。由于存在樣品本身性質(zhì)的差異和方法的局限性，學(xué)者們還在繼續(xù)探索用HPLC檢測(cè)各種食品中的LAL。Faist等[4]和Al-Saadi等[33,34]在分析UHT乳、巴氏殺菌乳和酪蛋白等樣品中的LAL時(shí)，通過(guò)改變DNS-Cl用量，或采用不同液相柱和不同HPLC的洗脫程序，甚至改用精密度更高的熒光檢測(cè)器等方式，以達(dá)到快速檢測(cè)、精確分析的目的，尤其Al-Saadi等[34]通過(guò)用這種方法測(cè)定UHT乳中LAL含量，研究了貯存溫度對(duì)LAL形成量的影響。

FMOC-Cl是氨基酸 HPLC分析法中的一種常用柱前衍生試劑，可在室溫條件下進(jìn)行衍生化反應(yīng)。Pellegrino等[21]將FMOC-Cl用于LAL的衍生化，建立了奶制品中LAL的HPLC檢測(cè)法，該方法變異系數(shù)小、靈敏度高、檢測(cè)限低(約 0.4μg/g)。因?yàn)闃悠分?LAL含量較低，而固相萃取(SPE)技術(shù)對(duì)微量或痕量目標(biāo)化合物的提取、分離能力較強(qiáng)，所以該方法在衍生結(jié)束后通常需用SPE對(duì)相應(yīng)衍生產(chǎn)物進(jìn)行濃縮、提取和分離。Cattaneo等[2,9]就是用這種方法測(cè)定了幾種奶制品中的LAL含量，以此作為產(chǎn)品熱損傷程度的指標(biāo)之一，并對(duì)比了在酪蛋白加工成酪蛋白酸鈣(鈉)過(guò)程中形成的LAL量。

DNS-Cl衍生化的HPLC法檢測(cè)時(shí)間雖更短，但衍生副產(chǎn)物較多，對(duì)LAL的測(cè)定易造成一定的干擾；FMOC-Cl衍生化的HPLC法引入SPE處理，干擾小，重復(fù)性較好。

3.4 色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)

食品樣品成分復(fù)雜、LAL含量低，單一的分離檢測(cè)方法往往難以滿(mǎn)足復(fù)雜樣品分析檢測(cè)的要求。色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)的引入既能發(fā)揮色譜法的高分離能力，又能發(fā)揮質(zhì)譜法的高鑒別能力，減少假陽(yáng)性發(fā)生幾率。至今為止對(duì)食品中LAL的測(cè)定主要集中在氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(GC-MS)和液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS)技術(shù)，F(xiàn)MOC-Cl衍生化的LC-MS方法是目前檢測(cè)食品中LAL的重要手段之一。

GC-MS技術(shù)的引入相對(duì)GC提高了樣品組分的定性能力，但是樣品衍生的優(yōu)缺點(diǎn)與GC法仍是一致的。Hasegawa等[5]在對(duì)樣品脫脂和除碳水化合物后，用兩步衍生法對(duì)其衍生化，再用GC-MS測(cè)定了小麥制品、奶制品、豆制品和肉制品等樣品中的LAL含量。在Montilla等[6]和Bosch[31]建立的一步衍生化的GC-FID法中，也利用了GC-MS所得的特征碎片離子(如m/z 632；m/z387)來(lái)對(duì)LAL定性。

LC-MS技術(shù)用于食品中LAL的檢測(cè)，靈敏度和準(zhǔn)確性比HPLC法更高；由于它可以得到各組分的質(zhì)量信息來(lái)排除樣品中其它組分的影響，所以不需要對(duì)衍生后的樣品進(jìn)行SPE處理，既簡(jiǎn)單又節(jié)省了樣品處理時(shí)間。Calabrese等[22]將樣品經(jīng)FMOC-Cl衍生化后，直接利用LC-MS技術(shù)，準(zhǔn)確地測(cè)定了牛奶和奶酪中的LAL。此外，F(xiàn)enaille等[35]以d4-羧甲基賴(lài)氨酸(d4-CML)作內(nèi)標(biāo)，并以鹽酸正丁醇溶液作衍生試劑，利用LC-MS/MS測(cè)定了嬰幼兒配方奶、巴氏殺菌乳和UHT乳中LAL的含量。

3.5 其他

其他技術(shù)如脈沖-傅里葉變換核磁共振譜儀也曾用于LAL的研究中，Boschin等[36,37]以四甲基硅烷作內(nèi)標(biāo)，D2O作溶劑，用脈沖-傅里葉變換核磁共振譜儀測(cè)定了合成的LAL中的兩種非對(duì)映異構(gòu)體的比例。整個(gè)分析過(guò)程不需要衍生，處理簡(jiǎn)單，但其只適于合成的LAL及其標(biāo)準(zhǔn)品的檢測(cè)，并不適合成分復(fù)雜的食品中LAL的分析。近年來(lái)，陰離子交換色譜-積分脈沖安培(HPAEC-IPAD)技術(shù)也開(kāi)始運(yùn)用到LAL的檢測(cè)中。Rombouts等[38]采用 HPAEC-IPAD法，雙柱串接分離和用四元梯度洗脫系統(tǒng)洗脫，檢測(cè)使用金工作電極和pH參比電極，直接測(cè)定了面筋蛋白中的基本氨基酸和LAL的含量，該方法無(wú)需衍生，操作簡(jiǎn)單且重現(xiàn)性好，但也存在重復(fù)性差、電極損耗大和費(fèi)用高等缺點(diǎn)。因此，無(wú)論是 LAL分析的核磁共振譜儀法和HPAEC-IPAD技術(shù)都尚不及前面幾種方法應(yīng)用廣泛，這幾種方法固然存在各自的特點(diǎn)(表1)。

表1 LAL的各種常用檢測(cè)方法的比較Table.1 The comparison of common detection methods for LAL

點(diǎn) 應(yīng)用單一；該方法分析條件不易改變，對(duì)少于100μg/g的LAL定量不準(zhǔn)確[27]樣品前期處理復(fù)雜、耗時(shí)；LAL高溫尤其含鹽酸時(shí)易分解[29,30]劑較貴；衍生試劑及衍生產(chǎn)物的穩(wěn)定性不太理想，需要嚴(yán)格隔離水分[31]貴；衍生后有DNS-OH、DNS-NH2和其它柱前衍生干擾物干擾檢測(cè)[32]貴；HPLC法中SPE提取過(guò)程復(fù)雜、耗時(shí)[4]

4 結(jié)論與展望

目前，分析LAL的主要方法是氨基酸分析儀法、HPLC和LC-MS法。在開(kāi)展LAL的理論研究時(shí)，通常不僅要測(cè)定樣品中 LAL含量，也需對(duì)其他多種氨基酸定量，這種情況下可選擇氨基酸分析儀法；對(duì)某些成分復(fù)雜且LAL含量低的樣品，可能會(huì)受水解過(guò)程中LAL回收不完全的影響，分析時(shí)出現(xiàn)重峰，這些樣品可能比較適合用FMOC-Cl衍生化的HPLC法(包括聯(lián)用SPE或MS技術(shù))分析。另外，MTBSTFA衍生化的GC法，特別是GC-MS法靈敏度和準(zhǔn)確性高，且樣品衍生處理較HPLC或LC-MS法簡(jiǎn)單，因此它也是很具潛力的一種檢測(cè)食品中LAL的方法。但是，任何方法都不是通用的，都有其優(yōu)缺點(diǎn)和適用范圍，正如氨基酸分析儀法定量低含量 LAL時(shí)準(zhǔn)確性較低，HPLC法樣品處理更繁雜，且它與GC法都易受其他分離物的影響。在選擇方法時(shí)，應(yīng)充分考慮樣品的特征、LAL的特性、儀器的靈敏度、方法的可行性以及成本的高低，結(jié)合實(shí)際條件，選用合適的方法。針對(duì)國(guó)內(nèi)對(duì)LAL研究基礎(chǔ)薄弱的現(xiàn)狀，找到更準(zhǔn)確更通用的檢測(cè)方法，將是我們對(duì)LAL研究的重要任務(wù)之一。

[1]Bohak Z. Nε-(DL-2-amino-2-carboxyethyl)-L-lysine, A new amino acid formed on alkaline treatment of proteins[J]. Journal of Biological Chemistry, 1964, 239(9): 2878-2887.

[2]Cattaneo S, Masotti F, Pellegrino L.Chemical modifications of casein occurring during industrial manufacturing of milk protein powders[J]. European Food Research and Technology, 2012, 235(2): 315-323.

[3]Chang H M, Tsai C F, Li C F. Changes of amino acid composition and lysinoalanine formation in alkali-pickled duck eggs[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 1999, 47(4): 1495-1500.

[4]Faist V, Drusch S, Kiesner C, et al. Determination of lysinoalanine in foods containing milk protein by high-performance chromatography after derivatisation with dansyl chloride[J]. International Dairy Journal,2000, 10(5): 339-346.

[5]Hasegawa K, Mukai K, Gotoh M, et al. Determination of the Lysinoalanine Content in Commercial Foods by Gas Chromatography-selected Ion Monitoring (Food & Nutrition)[J]. Agricultural and Biological Chemistry, 1987, 51(11): 2889-2894.

[6]Montilla A, G Mez-Ruiz J á, Olano A, et al. A GC-FID method for analysis of Lysinoalanine[J].Molecular Nutrition & Food Research, 2007, 51(4): 415-422.

[7]Pellegrino L, Cattaneo S, Masotti F, et al. Detection of milk powder and caseinates in Halloumi cheese[J]. Journal of Dairy Science, 2010, 93(8): 3453-3460.

[8]Sieber R, Buetikofer U, Kaldas N, et al. Occurrence of lysinoalanine in milk and dairy products[J].Revue Suisse D'agriculture, 2007, 39(6): 297-302.

[9]Cattaneo S, Masotti F, Pellegrino L. Liquid infant formulas: technological tools for limiting heat damage[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2009, 57(22): 10689-10694.

[10]Cattaneo S, Masotti F, Pellegrino L. Effects of overprocessing on heat damage of UHT milk[J].European Food Research and Technology, 2008, 226(5): 1099-1106.

[11]董攀，趙燕，楊有仙，等.食品加工過(guò)程中有害物質(zhì)——賴(lài)丙氨酸研究進(jìn)展[J].食品科學(xué)，2011，32(15)：312-316.

[12]Friedman M. Origin, Microbiology, Nutrition, and Pharmacology of D-Amino Acids[J]. Chemistry &Biodiversity, 2010, 7(6): 1491-1530.

[13]Sarwar Gilani G, Wu Xiao C, Cockell K A. Impact of Antinutritional Factors in Food Proteins on the Digestibility of Protein and the Bioavailability of Amino Acids and on Protein Quality[J]. British Journal of Nutrition, 2012, 108(S2): S315-S332.

[14]Gilani G S, Cockell K A, Sepehr E. Effects of antinutritional factors on protein digestibility and amino acid availability in foods[J]. Journal of AOAC International, 2005, 88(3): 967-987.

[15]Gilani G S, Sepehr E. Protein digestibility and quality in products containing antinutritional factors are adversely affected by old age in rats[J]. The Journal of Nutrition, 2003, 133(1): 220-225.

[16]Jonker D, Woutersen R, Feron V. Toxicity of mixtures of nephrotoxicants with similar or dissimilar mode of action[J]. Food and Chemical Toxicology, 1996, 34(11): 1075-1082.

[17]Pearce K N, Friedman M. Binding of copper (II)and other metal ions by lysinoalanine and related compounds and its significance for food safety[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 1988, 36(4):707-717.

[18]Somoza V, Wenzel E, Wei C, et al. Dose-dependent utilisation of casein-linked lysinoalanine, N(epsilon)-fructoselysine and N (epsilon)-carboxymethyllysine in rats[J]. Molecular Nutrition & Food Research, 2006, 50(9): 833-841.

[19]Slump P. Determination of lysinoalanine with an automatic amino-acid analyzer[J]. Journal of Chromatography A, 1977, 135(2): 502-507.

[20]H ASEGAWA K, OKAMOTO N. Studies on the gas chromatographic analysis of lysinoalanine in alkali-treated food proteins [J]. Agricultural and Biological Chemistry, 1980, 44(3): 649-655

[21]Pellegrino L, Resmini P, De Noni I, et al. Sensitive determination of lysinoalanine for distinguishing natural from imitation Mozzarella cheese[J]. Journal of Dairy Science, 1996, 79(5): 725-734.

[22]Calabrese M G, Mamone G, Caira S, et al. Quantitation of lysinoalanine in dairy products by liquid chromatography-mass spectrometry with selective ion monitoring[J]. Food Chemistry, 2009, 116(3):799-805.

[23]Liardon R, Friedman M, Philippossian G. Racemization kinetics of free and protein-bound lysinoalanine (LAL)in strong acid media. Isomeric composition of bound LAL in processed proteins[J].Journal of Agricultural and Food Chemistry, 1991, 39(3): 531-537.

[24]Tas A, Kleipool R. The stereoisomers of lysinoalanine[J]. Lebensm Wiss-Technol, 1979,9:360-363.

[25]孫秋君，陳曉曄，朱建良.蛋白質(zhì)降解及其產(chǎn)物氨基酸檢測(cè)的研究進(jìn)展[J].食品工業(yè)科技，2011，11(32)：525-528.

[26]Garcia R, Pyle D, Piazza G, et al. Hydrolysis of animal protein meals for improved utility in non-feed applications[J]. Applied Engineering In Agriculture, 2011, 27(2): 269-275.

[27]Fritsch,R J, Klostermeyer H. Improved method for determination of lysinoalanine in food[J].Zeitschrift Fur Lebensmittel-Untersuchung Und-Forschung .1981, 172(6):101-106.

[28]Schwarzenbolz U, Henle T. Non-enzymatic modifications of proteins under high-pressure treatment[J].High Pressure Research, 2010, 30(4): 458-465.

[29]B Ser W, Erbersdobler H. Determination of lysinoalanine as the heptafluorobutyryl isobutyl ester derivative by gas-liquid chromatography[J]. Journal of Chromatography, 1984, 303(1): 234-237.

[30]Jimenez-Martin E A, Ruiz J, Perez-Palacios T, et al. Gas Chromatography-Mass Spectrometry Method for the Determination of Free Amino Acids as Their Dimethyl-tert-butylsilyl (TBDMS)Derivatives in Animal Source Food[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2012, 60(10): 2456-2463.

[31]Bosch L, Sanz M L, Montilla A, et al. Simultaneous analysis of lysine, Nε-carboxymethyllysine and lysinoalanine from proteins[J]. Journal of Chromatography B, 2007, 860(1): 69-77.

[32]Badoud R, Pratz G. Simple and rapid quantitative determination of lysinoalanine and protein hydrolysate amino acids by high-performance liquid chromatography after derivatization with dansyl chloride[J]. Chromatographia, 1984, 19(1): 155-164.

[33]Al-Saadi J, Deeth H C. Cross-linking of proteins and other changes in UHT milk during storage at different temperatures[J]. Australian Journal of Dairy Technology, 2008, 63(3): 93-99.

[34]Al-Saadi J, Easa A M, Deeth H C. Effect of lactose on cross-linking of milk proteins during heat treatments[J]. International Journal of Dairy Technology, 2013, 66(1): 1-6.

[35]Fenaille F, Parisod V, Visani P, et al. Modifications of milk constituents during processing: A preliminary benchmarking study[J]. International Dairy Journal, 2006, 16(7): 728-739.

[36]Boschin G, Scaglioni L, Arnoldi A. Optimization of the synthesis of the cross-linked amino acid ornithinoalanine and nuclear magnetic resonance characterization of lysinoalanine and ornithinoalanine[J].Journal of Agricultural and Food Chemistry, 1999, 47(3): 939-944.

[37]Boschin G, D’Agostina A, Arnoldi A. A convenient synthesis of some cross-linked amino acids and their diastereoisomeric characterization by nuclear magnetic resonance[J]. Food Chemistry, 2002, 78(3):325-331.

[38]Rombouts I, Lagrain B, Brijs K, et al. Cross-linking of wheat gluten proteins during production of hard pretzels[J]. Amino acids, 2012, 42(6): 2429-2438.