任冰如,呂 寒,陳 劍,梁呈元,吳菊蘭,李維林

〔江蘇省·中國科學院植物研究所(南京中山植物園)江蘇省藥用植物研究開發(fā)中心江蘇省抗糖尿病藥物篩選技術服務中心,江蘇南京210014〕

紅鳳菜新鮮莖葉中總黃酮提取物的LC-MS分析

任冰如,呂 寒,陳 劍,梁呈元,吳菊蘭,李維林①

〔江蘇省·中國科學院植物研究所(南京中山植物園)江蘇省藥用植物研究開發(fā)中心江蘇省抗糖尿病藥物篩選技術服務中心,江蘇南京210014〕

紅鳳菜;LC-MS;總黃酮;槲皮素;山柰酚

紅鳳菜(Gynura bicolor DC.)為菊科(Compositae)菊三七屬(Gynura Cass.)植物,別名血皮菜、觀音菜、觀音莧、紫背天葵等,主要分布于中國南方各地,全草均可入藥[1];也可作為蔬菜食用,在國內(nèi)多個地區(qū)均有栽培和銷售。目前已知紅鳳菜含有黃酮類、酚性酸類、萜類、甾醇類、脂肪酸類、生物堿類及花青素類等[2-7]成分。由于黃酮類成分多具有保護心血管、抗腫瘤、抗糖尿病、抗氧化、抗炎和抗病毒等作用[8],因此對紅鳳菜中黃酮類成分的研究具有深度開發(fā)價值。

作者采用“乙醇提取-大孔樹脂柱層析-聚酰胺柱層析-重結晶”方法從紅鳳菜新鮮莖葉中提取獲得不同分離階段的黃酮類化合物,并采用LC-MS技術結合薄層層析對其進行檢測分析,考察提取分離過程中黃酮類化合物的富集和純化狀況,以期為紅鳳菜中黃酮類化合物高效提取純化工藝的建立提供基礎實驗數(shù)據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料

供試紅鳳菜取自江蘇省·中國科學院植物研究所實驗苗圃,于2003年7月引自重慶,憑證標本保存于江蘇省·中國科學院植物研究所標本館(NAS),憑證標本號為0648614。

使用的乙腈(美國Fisher公司)和甲酸(美國Tedia公司)均為色譜純級;采用Milli-Q純水儀(美國Millipore公司)制備超純水。

1.2 方法

1.2.1 對照品溶液制備 參照陳劍[5]的方法從紅鳳菜中分離制得黃酮苷類對照品蘆丁(rutin)、異槲皮苷(isoquercitrin)和紫云英苷(astragalin)以及有機酸類對照品異綠原酸A (isochlorogenic acid A)和異綠原酸C(isochlorogenic acid C),上述5個對照品均通過NMR、MS和文獻比對等進行結構鑒定。分別取各對照品適量,用甲醇配成質(zhì)量濃度0.1 mg·mL-1的對照品溶液。

1.2.2 總黃酮成分的分離及樣品溶液的制備 取紅鳳菜新鮮莖葉5 kg,用20 L體積分數(shù)95%乙醇室溫冷浸提取7 d,提取液減壓濃縮并冷沉去雜。上清液上NKA大孔樹脂柱,依次用2倍體積的水以及體積分數(shù)30%、50%、70%和95%乙醇進行梯度洗脫;以BAW〔V(正丁醇)：V(乙酸)：V(水)=4：1：5〕為展開劑、質(zhì)量體積分數(shù)1%A lCl3為顯色劑對洗脫液進行聚酰胺薄層層析;合并具有黃酮反應的洗脫液,減壓濃縮至無醇味。取一部分洗脫液在沸水浴上蒸干,得到樣品Ⅰ;另一部分洗脫液進行聚酰胺柱層析,依次用2倍體積的水以及體積分數(shù)30%、50%、70%和95%乙醇梯度洗脫,收集洗脫液,每流份為1/10柱床體積,減壓濃縮后室溫放置,至黃酮結晶析出后,過濾,將濾液合并后進行干燥,得到樣品Ⅱ,同時得到不同流份的結晶即樣品Ⅲ和樣品Ⅳ。各樣品均取5 mg,分別用體積分數(shù)80%甲醇溶解并定容至10mL,用孔徑0.22μm微孔濾膜過濾,即為供試樣品溶液。

1.2.3 LC-MS檢測條件 參照文獻[5]、使用Agilent 6530 Accurate-Mass Q-TOF LC-MS超高效液相-精確飛行時間質(zhì)譜聯(lián)用儀(美國Agilent公司)進行LC-MS分析。

色譜分析條件:AgilentZorbaxSB-C18色譜柱(100mm× 4.6mm,1.8μm,美國Agilent公司);流速0.5 mL·min-1,柱溫25℃,進樣量5.0μL。流動相A為乙腈、流動相B為體積分數(shù)0.1%甲酸溶液,梯度洗脫過程:0～30 m in,5%～40%A; 30～40 min,40%～100%A;40～45 min,100%～5%A。紫外采集數(shù)據(jù)范圍為200～400 nm,檢測波長360 nm。

質(zhì)譜分析條件:ESI負離子模式,噴霧氣壓力50 psig,干燥氣流速10 L·min-1,干燥氣溫度350℃,毛細管電壓3 500 V;碎裂電壓175 V;掃描范圍(m/z)50～1 000。

表1 紅鳳菜新鮮莖葉總黃酮提取物的LC-MS分析結果Table 1 LC-MS analysis result of total flavonoids extracts from fresh stem and leaf of Gynura bicolor DC.

2 結果和分析

2.1 紅鳳菜總黃酮提取物的組成成分解析

紅鳳菜新鮮莖葉總黃酮提取物的LC-MS檢測結果見表1,表中的化合物名稱根據(jù)對照品和樣品的LC-MS圖譜、保留時間(Rt)和負離子模式下一級質(zhì)譜的分子離子峰[M-H]-并結合文獻[4-5]中的數(shù)據(jù)確定。

根據(jù)對照品的質(zhì)譜信息,鑒定出1號峰(Rt17.64 min, [M-H]-m/z609)為蘆丁,3號峰(Rt18.60 min,[M-H]-m/z 463)為異槲皮苷,6號峰(Rt 20.35 min,[M-H]-m/z447)為紫云英苷。因作者采用的LC-MS檢測條件與文獻[5]完全一致,故參照文獻[5]確定樣品中其余黃酮苷類成分分別為:3號峰(Rt18.67 m in,[M-H]-m/z 593)為山柰酚-3-O-洋槐苷(kaempferol-3-O-rubinobioside),4號峰(Rt19.31 min,[M-H]-m/z593)為山柰酚-3-O-蕓香苷(kaempferol-3-O-rutinoside),5號峰(Rt19.72min,[M-H]-m/z447)為山柰酚-3-O-半乳糖苷(kaempferol-3-O-galactoside)。

表1分析結果顯示:紅鳳菜中的黃酮苷多以槲皮素或山柰酚為苷元,其連接的糖包括六碳醛糖〔如D-葡萄糖(D-glucose)或D-半乳糖(D-galactose)〕和甲基五碳糖〔如L-鼠李糖(L-rhamnose)〕。鑒于樣品Ⅰ和樣品Ⅱ的1號峰呈不對稱肩峰,故推測1號峰(Rt17.64 min,[M-H]-m/z609)除含蘆丁外,還含有槲皮素-3-O-洋槐苷(quercetin-3-O-rubinobioside); 2號峰(Rt 18.35 min,[M-H]-m/z463)和與其相鄰的異槲皮苷具有相同的分子量,故推測其為金絲桃苷(hyperoside)。

2.2 紅鳳菜總黃酮提取物的分離效果分析

由表1還可見:樣品Ⅰ除了具有6組黃酮苷吸收峰外,還有3個包含4種成分的雜質(zhì)峰(即7～9號峰),對照文獻[5],確定7號峰(Rt 20.81 min,[M-H]-m/z515)為異綠原酸A (isochlorogenic acid A),8號峰(Rt 21.66 min,[M-H]-m/z 515)為異綠原酸C(isochlorogenic acid C),另外2種成分尚未能確定。樣品Ⅰ經(jīng)過聚酰胺柱層析得到的樣品Ⅱ中不含有7～9號雜質(zhì)峰,且保留了6個黃酮苷吸收峰,說明聚酰胺柱層析可有效純化紅鳳菜的黃酮苷提取物。

樣品Ⅲ含有1號峰(Rt 17.64 min,[M-H]-m/z 609)、3號峰(Rt 18.67 min,[M-H]-m/z 593)和4號峰(Rt 19.31min,[M-H]-m/z 593)3個峰信號;樣品Ⅳ含有2號峰(Rt 18.35min,[M-H]-m/z463)、3號峰(Rt18.60 min,[M-H]-m/z463)、5號峰(Rt 19.72 min,[M-H]-m/z447)和6號峰(Rt20.35 m in,[M-H]-m/z447)4個峰信號。與樣品Ⅰ不同的是,樣品Ⅲ中的1號峰為對稱的峰信號,3號峰只有1個分子離子峰信號([M-H]-m/z 593),而樣品Ⅳ中的3號峰也只有1個分子離子峰信號([M-H]-m/z463)。以上結果說明,采用聚酰胺柱層析結合重結晶方法可使紅鳳菜中的不同黃酮苷成分得到較好的分離。

3 討 論

在上述獲得的黃酮苷成分中,槲皮素-3-O-洋槐苷和槲皮素-3-O-半乳糖苷在紅鳳菜化學成分的相關研究中未見報道,造成這一結果的原因除與分離手段不同有關外,還與供試樣品的性質(zhì)不同有關。前人的研究多采用紅鳳菜干燥葉片,而作者采用的是紅鳳菜新鮮莖葉,采用新鮮植物樣品能更全面地保留原有的化學成分。雖然如此,還應采用其他分析手段對紅鳳菜中上述2種成分進行進一步的驗證。

此外,從紅鳳菜新鮮莖葉中分離或檢測到的黃酮苷成分主要以槲皮素或山柰酚為苷元,這與他人的研究結果[2-5]一致。因此,在測定紅鳳菜總黃酮成分時建議將樣品中的黃酮苷進行酸水解,并以槲皮素和山柰酚為對照品采用高效液相法進行定量測定,以獲得較準確的結果。

采用“體積分數(shù)95%乙醇提取-NKA大孔樹脂柱層析-聚酰胺柱層析-重結晶”的工藝流程可有效地從紅鳳菜新鮮莖葉中分離獲得總黃酮,該工藝能耗低、操作簡便、產(chǎn)品純度高,可用于工廠化生產(chǎn)。

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(責任編輯:佟金鳳)

不同種植模式對滇龍膽草總裂環(huán)烯醚萜苷含量的影響

李遠菊1,2,沈 濤3,張 霽1,趙艷麗1,王元忠1,①

(1.云南省農(nóng)業(yè)科學院藥用植物研究所,云南昆明650200;2.云南中醫(yī)學院中藥學院,云南昆明650500; 3.玉溪師范學院資源環(huán)境學院,云南玉溪653100)

Abstract:Effect of different planting patterns on total secoiridoid glycoside content in different parts of Gentiana rigescens Franch.ex Hemsl.was researched.The results show that different planting patterns have significant or extremely significant effects on total secoiridoid glycoside content in root,stem and leaf of G.rigescens.Total secoiridoid glycoside content in root is the highest under planting pattern of G.rigescens-Alnus nepalensis D.Don and is the lowest under p lanting pattern of G.rigescens-Chaenomeles sinensis(Thouin)Koehne,that in stem is the highest under single p lanting pattern of G.rigescens and is the lowest under planting pattern of G.rigescens-Juglans regia Linn.,and that in leaf is the highest under planting pattern of G.rigescens-Cunninghamia lanceolata(Lamb.)Hook.and is the lowest under single planting pattern of G.rigescens.

關鍵詞:滇龍膽草;復合種植;總裂環(huán)烯醚萜苷含量

Key words:Gentiana rigescens Franch.ex Hemsl.;complex planting;total secoiridoid glycoside content

DOI:10.3969/j.issn.1674-7895.2014.03.16

滇龍膽草(Gentiana rigescens Franch.ex Hemsl.)為龍膽科(Gentianaceae)龍膽屬(Gentiana Linn.)多年生草本植物,主要分布于云南、四川、貴州、湖南和廣西等地,生長于山坡、草地、灌叢、林下及山谷中[1]。該種為傳統(tǒng)中藥龍膽的基源植物,其干燥根及根莖均可入藥,具有清熱燥濕和瀉肝膽火的功效[2]。因其資源需求量逐年增加,滇龍膽草的人工種植越來越普遍,并出現(xiàn)了多種種植模式[3]。目前滇龍膽草主要種植模式有單一種植和林藥復合種植,常見的有滇龍膽草與茶樹〔Camellia sinensis(Linn.)Kuntze〕、桉樹(Eucalyptus robusta Smith)、木瓜〔Chaenomeles sinensis(Thouin)Koehne〕和旱冬瓜(Alnus nepalensis D.Don)的復合種植模式[4]。與傳統(tǒng)林業(yè)系統(tǒng)相比,林藥復合系統(tǒng)具有良好的生態(tài)效益、社會效益和經(jīng)濟效益[5]。周幸[6]的研究結果表明:在太行山山地林藥復合種植模式中,分布于土壤表層的藥用植物淺根系對表層土有加筋固著作用,可減少水土流失。Sujatha等[7]認為:在檳榔(Areca catechu Linn.)園間作芳香藥用植物有助于提高其產(chǎn)量并增加單位面積收入。目前有關林藥復合種植的研究主要集中于其生態(tài)效益和經(jīng)濟效益,對復合種植模式下藥用植物有效成分變化的研究尚不多見[8-9]。

裂環(huán)烯醚萜苷是龍膽科藥用植物的特征性成分,主要有龍膽苦苷、獐牙菜苦苷和獐牙菜苷等[10-11],是龍膽藥材的主要藥效成分[12-14]。作者以滇龍膽草中總裂環(huán)烯醚萜苷含量為評價指標,分析不同種植模式對其不同部位總裂環(huán)烯醚萜苷含量的影響,為滇龍膽草復合種植模式的實施提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料、儀器和試劑

1.1.1 材料 供試樣品于2012年10月采集自云南臨滄滇龍膽栽培樣地,所有樣品均栽培2 a。共設置8種種植模式,包括單一種植以及滇龍膽草與茶樹、桉樹、木瓜、旱冬瓜、核桃(Juglans regia Linn.)、杉木〔Cunninghamia lanceolata(Lamb.)Hook.〕及木果柯〔Lithocarpus xylocarpus(Kurz)Markgraf〕復合種植。每種模式樣地面積48m2,樣地年平均氣溫18.5℃,年平均降水量1 158 mm。不同種植模式按五點取樣法進行取樣,并由云南省農(nóng)業(yè)科學院藥用植物研究所張金渝研究員鑒定;取樣后每個樣地隨機選取10株,每株分成根、莖和葉片3部分,分別置于50℃條件下干燥至恒質(zhì)量,粉碎后過100目篩,備用。

1.1.2 儀器與試劑 UV-2550型紫外分光光度計(日本島津公司),SY3200-T型超聲波清洗器(上海聲源超聲波儀器設備有限公司),AR1140萬分之一分析天平(美國奧豪斯公司), FW-100高速萬能粉碎機(北京市永光明醫(yī)療儀器廠),UPTI-10L優(yōu)普超純水機(成都優(yōu)越科技有限公司)。龍膽苦苷對照品(批號110770-201314,純度96.9%)購自中國藥品生物制品檢定所;乙醇為分析醇,蒸餾水自制。

1.2 方法

1.2.1 對照品溶液及樣品溶液制備 稱取龍膽苦苷對照品3.0mg,用體積分數(shù)70%乙醇配制成60μg·mL-1對照品溶液。分別稱取各種植模式下滇龍膽草不同部位樣品粉末25.0 mg,加入體積分數(shù)70%乙醇10 mL,超聲(功率150W)提取40 m in,過濾;取濾液5.0 mL,用體積分數(shù)70%乙醇定容至50 mL,即為質(zhì)量濃度250μg·mL-1的供試樣品溶液。

1.2.2 測定波長的選擇 分別取上述龍膽苦苷對照品溶液和樣品溶液,以體積分數(shù)70%乙醇為空白,在波長190～400 nm范圍內(nèi)掃描,兩者均在波長270 nm處有最大吸收峰,故選擇270 nm為檢測波長。

1.2.3 對照品線性關系考察 分別取對照品溶液1.0、3.0、4.0、5.0和8.0 mL,分別用體積分數(shù)70%乙醇定容至10 mL,以體積分數(shù)70%乙醇為空白,于波長270 nm處測定吸光度值;以吸光度值(A)為縱坐標、對照品質(zhì)量濃度(C)為橫坐標繪制標準曲線:A=0.023 08C-0.005 81(r=0.999 7),龍膽苦苷在質(zhì)量濃度6.0～48.0μg·mL-1范圍內(nèi)線性關系良好。

1.2.4 樣品溶液測定 取上述各樣品溶液,以體積分數(shù)70%乙醇為空白,于波長270 nm處測定吸光度值,平行測定3次,根據(jù)標準曲線計算樣品中總裂環(huán)烯醚萜苷含量。

1.2.5 方法學考察 精密吸取質(zhì)量濃度24μg·mL-1的對照品溶液,測定波長270 nm處的吸光度值,重復測定5次,RSD為0.15%,結果表明該方法精密度良好。

精密吸取同一樣品溶液,分別在0、1、2、3和4 h測定波長270 nm處的吸光度值,總裂環(huán)烯醚萜苷含量分別為122.62、120.58、122.56、126.32和125.14μg·mg-1,平均含量為123.44μg·mg-1,RSD為1.85%,結果表明該樣品溶液穩(wěn)定性良好。

分別稱取同一批樣品粉末6份,按上述方法制備樣品溶液并測定吸光度值,RSD為1.97%,結果表明該方法重復性良好。

稱取總裂環(huán)烯醚萜苷含量為119.856μg·mg-1的樣品粉末20.0 mg,稱取6份,按上述方法制備樣品溶液;然后分別加入質(zhì)量濃度97.71μg·mL-1龍膽苦苷對照品溶液1.0、1.0、2.0、2.0、3.0和3.0 mL,用體積分數(shù)70%乙醇定容至25 mL,于波長270 nm處測定吸光度值并計算總裂環(huán)烯醚萜苷含量;樣品中龍膽苦苷的平均回收率達到98.83%,RSD為3.39%,表明該方法的回收率較高。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計和分析

采用EXCEL 2003和SPSS 11.5統(tǒng)計分析軟件對實驗數(shù)據(jù)進行方差分析和多重比較分析。

2 結果和分析

不同種植模式下滇龍膽草不同部位總裂環(huán)烯醚萜苷含量見表1。

由表1可知:滇龍膽草根中的總裂環(huán)烯醚萜苷含量在滇龍膽草-木瓜種植模式下最低(82.03μg·mg-1),而在滇龍膽草-旱冬瓜和滇龍膽草-核桃種植模式下較高(分別為105.52和102.88μg·mg-1),前者與后2種復合種植模式間差異顯著(P＜0.05);在7種復合種植模式中,除滇龍膽草-木瓜種植模式外,在其他復合種植模式下根中總裂環(huán)烯醚萜苷含量均高于滇龍膽草單一種植模式。

莖中的總裂環(huán)烯醚萜苷含量在滇龍膽草單一種植模式下最高(80.46μg·mg-1),在滇龍膽草-旱冬瓜種植模式下也較高(73.66μg·mg-1),而在滇龍膽草-核桃種植模式下則最低(60.53μg·mg-1);在7種復合種植模式中,除滇龍膽草-旱冬瓜、滇龍膽草-木果柯種植模式外,在其余種植模式下莖中總裂環(huán)烯醚萜苷含量均顯著低于滇龍膽草單一種植。

表1 不同種植模式下滇龍膽草不同部位總裂環(huán)烯醚萜苷含量的比較(ˉX±SD,n=10)1)Table 1 Comparison of totalsecoiridoid glycoside content in different parts of Gentiana rigescens Franch.ex Hemsl.under different p lanting patterns(ˉX±SD,n=10)1)

葉片中總裂環(huán)烯醚萜苷含量在滇龍膽草-杉木種植模式下最高(109.26μg·mg-1),在滇龍膽草單一種植模式最低(僅為66.75μg·mg-1);在7種復合種植模式中,在滇龍膽草-杉木、滇龍膽草-木瓜、滇龍膽草-桉樹種植模式下葉片中總裂環(huán)烯醚萜苷含量顯著高于滇龍膽草單一種植模式,而在其他復合種植模式下葉片中總裂環(huán)烯醚萜苷含量與滇龍膽草單一種植模式差異不顯著。

由表1還可知:不同種植模式下滇龍膽草根、葉片和莖中總裂環(huán)烯醚萜苷平均含量依次降低,分別為92.97、84.45和68.44μg·mg-1。方差分析結果表明:種植模式對滇龍膽草根中總裂環(huán)烯醚萜苷含量有顯著影響,對莖和葉片中總裂環(huán)烯醚萜苷含量有極顯著影響(P＜0.01)。

3 討論和結論

藥用植物藥效成分的產(chǎn)生和積累受生態(tài)環(huán)境因素影響[15]。權秋梅等[16]的研究結果表明:不同生境中柔毛淫羊藿(Epimedium pubescens Maxim.)有效成分有差異,在光照強度較高的生境中其總黃酮和淫羊藿苷含量高于光照強度較低的生境。曹建華等[17]認為:適宜的間作復合生態(tài)系統(tǒng)可以改善生態(tài)環(huán)境小氣候。因而,推測不同種植模式下滇龍膽草體內(nèi)總裂環(huán)烯醚萜苷含量變化可能與其生長的小環(huán)境有關。

滇龍膽草的主要藥用部位為根部,在不同種植模式下,除滇龍膽草-木瓜種植模式外,在其余復合種植模式下滇龍膽草根中總裂環(huán)烯醚萜苷含量均高于單一種植模式,其中在滇龍膽草-旱冬瓜種植模式下滇龍膽草根中總裂環(huán)烯醚萜苷含量最高,但由于桉樹和旱冬瓜葉片水提物對滇龍膽草種子萌發(fā)有顯著抑制作用[4],因此,滇龍膽草與茶樹、核桃、杉木及木果柯復合種植較為適宜。

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(責任編輯:張明霞)

LC-MS analysis of total flavonoids extracts from fresh stem and leaf of Gynura bicolor

REN Bingru,LYU Han, CHEN Jian,LIANG Chengyuan,WU Julan,LIWeilin①(Jiangsu Center for Research and Development of Medicinal Plants,Jiangsu Provincial Service Center for Anti-diabetic Drugs Screening,Institute of Botany,Jiangsu Province and the Chinese Academy of Sciences,Nanjing 210014,China),J.Plant Resour.&Environ.2014,23(3):108-110

Four total flavonoids extractswere obtained from fresh stem and leaf of Gynura bicolor DC.bymethod of ethanol extraction-macroporous resin column chromatography-polyamide column chromatography-recrystallization,and their compositions were analyzed by LC-MS technology.The results show that there are six groups of flavonoid absorption peak in total flavonoids extracts of G.bicolor,which is identified to be eight components including rutin,quercetin-3-O-rubinobioside,hyperoside,isoquercitrin,kaempferol-3-O-rubinobioside,kaempferol-3-O-rutinoside,kaempferol-3-O-galactoside and astragalin.This extractionmethod can effectively extract and purify total flavonoids from fresh stem and leaf of G.bicolor,so it can be used for factory production.

Gynura bicolor DC.;LC-MS;total flavonoids;quercetin;kaempferol

E ffect of different p lanting patterns on total secoiridoid glycoside content in

Gentiana rigescens LI Yuanju1,2, SHEN Tao3,ZHANG Ji1,ZHAO Yanli1,WANG Yuanzhong1,①(1.Institute of Medicinal Plants,Yunnan Academy of Agricultural Sciences,Kunming 650200,China;2.College of Traditional Chinese Medicine,Yunnan University of Traditional Chinese Medicine,Kunming 650500,China;3.College of Resources and Environment,Yuxi Normal University,Yuxi653100,China),J.Plant Resour.&Environ.2014,23(3):111-113

Q946.83;R284.1

A 文章編號:1674-7895(2014)03-0108-03

10.3969/j.issn.1674-7895.2014.03.15

946.83;Q949.776.4;R282.2 文獻標志碼:A

1674-7895(2014)03-0111-03

2013-09-29

江蘇省產(chǎn)學研聯(lián)合創(chuàng)新資金項目(BY2012213);江蘇省科技基礎設施建設計劃——科技公共服務平臺項目(BM2011117)

任冰如(1964—),女,江蘇宜興人,博士,研究員,主要從事植物資源的研究與開發(fā)工作。

①通信作者E-mail:lwlcnbg@mail.cnbg.net

收稿日期:2013-10-08

基金項目:國家自然科學基金資助項目(81260608);國家“十二五”科技支撐計劃項目(2011BAI13B02-04);云南省技術創(chuàng)新人才培養(yǎng)項目(2010CI068);云南省科技計劃項目(2012AE002);云南省自然科學基金資助項目(2013FZ150;2013FZ151);2012年度國家中藥材生產(chǎn)扶持項目(41);國家農(nóng)業(yè)部公益性行業(yè)科研專項(201303117)

作者簡介:李遠菊(1989—),女,云南麗江人,碩士研究生,主要從事中藥資源開發(fā)與利用研究。

①通信作者E-mail:boletus@126.com