張偉武，杜愛芳

(1.浙江大學(xué)動(dòng)物預(yù)防醫(yī)學(xué)研究所，浙江省動(dòng)物預(yù)防醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江杭州310058;2.杭州市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院)

肉雞球蟲病是危害肉雞生產(chǎn)的主要疫病之一，在我國因雞球蟲病引起的年損失約為10 多億元［1］。自20 世紀(jì)40年代磺胺類藥物用于防治雞球蟲病以來，已先后有40 多種藥物投入實(shí)際應(yīng)用，但任何一種抗球蟲藥物長期使用都會(huì)產(chǎn)生抗藥性。因此，人們將目光轉(zhuǎn)向非抗生素防治研究，如中藥和疫苗［2］。近10年來，國內(nèi)外相繼研制開發(fā)球蟲疫苗，如美國的Coccivac、加拿大的Immucox、英國的Paracox、捷克的Livacox［3］、中國的DLV 等，保護(hù)效果良好，但仍有某些不足之處。故目前防治雞球蟲病仍主要通過飼料中添加抗球蟲藥物進(jìn)行預(yù)防。

綠源素是一種中草藥提取物和競爭排斥益生菌組成的復(fù)合飼料添加劑，筆者曾采用該產(chǎn)品對黃羽肉雞生產(chǎn)性能和免疫功能影響及雛雞接種益生菌對腸道菌群的影響等進(jìn)行了研究［4-6］。為更好了解其預(yù)防雞球蟲病的效果特進(jìn)行本試驗(yàn)，以便為尋求解決球蟲抗藥性問題提供新途徑。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 球蟲蟲株 采自杭州富陽某肉雞場?，F(xiàn)場采集新鮮雞糞，經(jīng)實(shí)驗(yàn)室分離、純化與增殖柔嫩艾美爾球蟲卵囊后備用。

1.1.2 試驗(yàn)動(dòng)物 1日齡AA 肉雞，浙江大學(xué)正大肉雞發(fā)展中心提供;試驗(yàn)飼料為自配全價(jià)肉雞料，不含抗球蟲藥。

1.1.3 試驗(yàn)藥物 杜球(含1%馬杜霉素)，批號0806004;克球(含0.5%地克珠利)，批號0806002;抗球(含6%癸氧喹酯)，批號0806001;均由浙江某動(dòng)物保健品有限公司生產(chǎn);鹽霉素，生產(chǎn)批號080616;綠源素、甜菜堿均由浙江某飼料添加劑公司提供。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.2.1 柔嫩艾美爾球蟲卵囊的采集、分離、純化與增殖 采集4～6 周齡肉雞的新鮮糞便，用飽和食鹽溶液漂浮法分離卵囊，將混合卵囊孢子化后，用水洗凈重鉻酸鉀后計(jì)數(shù)，感染10～14日齡雞10 羽，每羽口服5 ×104～1 ×105個(gè)孢子化卵囊，感染后5 d 剖殺，刮取盲腸內(nèi)容物收集裂殖子，再感染5 羽10～14日齡無球蟲感染雞。接種后2～3 d 剖殺，從盲腸內(nèi)容物收集卵囊。經(jīng)水沖洗后加入重鉻酸鉀，孢子化后備用。

1.2.2 試驗(yàn)分組 試驗(yàn)設(shè)10 組，即杜球組、克球組、鹽霉素組、抗球組、綠源素1 組、綠源素2 組、綠源素+甜菜堿1 組、綠源素+甜菜堿2 組、不感染不用藥組、感染不用藥組。

1.2.3 試驗(yàn)方法 供試肉雞自出殼至試驗(yàn)結(jié)束，均籠養(yǎng)在無球蟲環(huán)境下，每組12 羽(6♂、6♀)。按試驗(yàn)要求分別飼喂含預(yù)防球蟲藥的飼料，柔嫩艾美爾球蟲卵囊13日齡經(jīng)嗉囊接種0.5 mL(1 ×105個(gè))。試驗(yàn)期間，每日觀察糞便狀態(tài)、出血程度及雛雞表現(xiàn)，記錄雞只精神狀態(tài)、飲水、食欲、發(fā)病率、死亡數(shù)、糞便狀況。接種卵囊后第5～7 d，每天更換墊紙，記錄血便，按1 堆血便記1 分［7］。同時(shí)稱取每組排出的糞便量，攪勻后取樣，用麥?zhǔn)舷x卵計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)各組糞便卵囊數(shù)(OPG)。試驗(yàn)于接種卵囊后第8 d 結(jié)束，逐只稱重后剖殺，檢查盲腸病變，按Johnson and Reid 方法(1970)［8］進(jìn)行盲腸病變計(jì)分。

1.3 療效判斷 計(jì)算各組存活率、相對增重率、平均病變記分、病變值及卵囊值，最后計(jì)算抗球蟲指數(shù)(ACI)。依此對藥物效果進(jìn)行判定。ACI ＜120 不宜作抗球蟲藥;ACI =120～160 抗球蟲效果低;ACI=160～180 抗球蟲效果中等;ACI ＞180 抗球蟲效果高效［9］。

1.4 測定指標(biāo)

存活率(%)= 組內(nèi)存活雞數(shù)/組內(nèi)總雞數(shù)×100;

相對增重率(%)=感染投藥組增重/不感染不投藥組增重×100;

病變值=各組平均盲腸病變計(jì)分×10;

卵囊值以各組盲腸內(nèi)容物OPG，參照角田清相關(guān)表格(1986)［10］換算成卵囊值;

ACI=(存活率+相對增重率)－(病變值+卵囊值);

糞便記分=(第5～7 d 血便記分?jǐn)?shù)÷雞數(shù))。

2 結(jié)果與分析

綠源素與甜菜堿配合應(yīng)用預(yù)防肉雞球蟲病效果，詳見表1、表2。

表1 不同抗球蟲藥物預(yù)防肉雞球蟲病的抗球蟲指數(shù)統(tǒng)計(jì)表

由表1可知，各組的初始平均體重相近(最大差距僅13 g)，末重則差距達(dá)39.5 g;相對增重率以杜球組最高(102.98%)，說明其促生長作用明顯;抗球組其次(100.98%)，綠源素+甜菜堿組的相對增重率為97.92%～98.38%。存活率則以鹽霉素組最低(83.33%)，杜球組、克球組和綠源素組均為91.67%，抗球組和綠源素+甜菜堿組均為100%?？骨蚪M的盲腸病變值和卵囊值均為0，杜球組與克球組卵囊值均為10，但杜球組的盲腸病變值則明顯低于克球組;鹽霉素組、綠源素組和綠源素+甜菜堿組的卵囊值均為20，盲腸OPG 均很高，與感染不用藥組相比則降低了70.59%～77.54%，但盲腸病變值各組差異較大，與鹽霉素組相比，綠源素組平均降低38.16%，綠源素+甜菜堿組平均降低67.11%?？骨蛳x指數(shù)的綜合指標(biāo)以抗球組最高，其次為杜球組，抗球蟲效果均達(dá)高效。綠源素+甜菜堿組的平均ACI 為171.95，高于克球組，達(dá)到中等有效水平，綠源素組的平均ACI 為149.06，低于綠源素+甜菜堿組的平均值，但高于鹽霉素組10.39%，其抗球蟲效果低于中等有效水平。

表2為各組糞便OPG 及血便記分。各組中僅有不感染不用藥組和抗球組未發(fā)現(xiàn)血便，糞便中卵囊數(shù)幾乎為零，杜球組有輕微血便出現(xiàn)，糞便中檢測到有少量卵囊，其余各組均有不同程度的血便，糞便OPG 均偏高，用藥組中鹽霉素組平均血便記分最高(2.50)，綠源素組次之達(dá)2.13，綠源素+甜菜堿組的平均血便記分為0.96，低于克球組32.39%，較綠源素組降低54.93%。

表2 各組的糞便OPG 及血便記分

3 小結(jié)與討論

3.1 抗藥性與藥物使用年限及使用頻率關(guān)系 本次試驗(yàn)結(jié)果顯示，癸氧喹酯、馬杜霉素、地克珠利和鹽霉素的抗球蟲指數(shù)依次為200.98，182.15，161.94 和133.57，藥效高低可以反應(yīng)球蟲對其產(chǎn)生的抗藥性程度。鹽霉素于20 世紀(jì)80年代引入我國，在杭州地區(qū)使用年限最長，但其低廉的用藥成本仍然受到眾多飼料生產(chǎn)廠家的歡迎，使用頻率較高，抗藥性也最嚴(yán)重。地克珠利是相對較新的高效化學(xué)合成抗球蟲藥，20 世紀(jì)90年代后期開始上市，飼料中添加量很低，一般用于穿梭、輪換用藥;馬杜霉素20 世紀(jì)90年代初開始上市，其抗球蟲效果在幾種離子載體抗生素類抗球蟲藥中最好，也是目前市場占有率最大的抗生素類抗球蟲藥;癸氧喹酯是喹啉類抗球蟲藥，最新上市，而且由于此類藥品的用藥成本較高，一般多使用于球蟲高發(fā)期和高發(fā)地區(qū)，故該藥仍然保持著較高敏感性。

3.2 綠源素預(yù)防肉雞球蟲病效果評價(jià) 綠源素是中草藥提取物與競爭排斥益生菌(CE)組成的復(fù)合飼料添加劑，能有效阻斷病原菌的定植，預(yù)防繼發(fā)感染，刺激免疫器官生長發(fā)育，提高循環(huán)抗體水平，在提高肉雞生產(chǎn)性能方面能取得與抗生素(金霉素)相類似的效果。綠源素是目前所發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)效的抗氧化劑和自由基清除劑，在食品、保健品、化妝品及醫(yī)藥領(lǐng)域應(yīng)用廣泛;競爭排斥益生菌對預(yù)防和控制禽類沙門氏菌方面有很好的效果，目前國內(nèi)外已有20 多個(gè)產(chǎn)品應(yīng)用于養(yǎng)禽業(yè)［11］。試驗(yàn)表明，雛雞接種益生菌能在腸道中成功定植，導(dǎo)致盲腸內(nèi)乳酸桿菌增多、大腸桿菌明顯減少，菌群結(jié)構(gòu)產(chǎn)生明顯變化，并表現(xiàn)趨益性，效果比較理想，但此類產(chǎn)品用于預(yù)防肉雞球蟲病在國內(nèi)外未見相關(guān)報(bào)道。本次試驗(yàn)結(jié)果顯示，綠源素平均ACI 為149.06，卵囊值為20，糞便、盲腸OPG 較高，平均血便記分為2.13，表明其不能有效殺滅球蟲，抗球蟲效果低于中等有效水平［12］。但與供試的4 種抗球蟲藥相比，綠源素在保證雛雞存活率方面與馬杜霉素、地克珠利相同，明顯高于甲基鹽霉素，相對增重率也優(yōu)于鹽霉素，盲腸病變值明顯低于甲基鹽霉素、地克珠利，表明綠源素可較好地促進(jìn)受球蟲感染雞的增重和飼料轉(zhuǎn)化率，減輕腸道病變，防止腸粘膜受損及繼發(fā)感染。

3.3 綠源素與甜菜堿配合使用效果評價(jià) 綠源素單獨(dú)用于抗球蟲效果一般。本次試驗(yàn)中綠源素與甜菜堿配合使用，結(jié)果表明ACI 為171.95，其抗球蟲效果達(dá)到中等有效水平，與綠源素單獨(dú)使用相比，相對增重率、存活率和盲腸病變值均有明顯改善，平均血便記分降低54.93%。表明綠源素與甜菜堿配合使用抗球蟲效果已達(dá)到中等有效水平以上。綠源素與甜菜堿配合使用具有良好的協(xié)同作用，另有試驗(yàn)結(jié)果表明，飼料中添加甜菜堿尤其是與離子載體類抗球蟲藥合用，可明顯改善感染球蟲患雞的生長性能和抵抗力，這一作用與甜菜堿獨(dú)特的生物學(xué)活性密切相關(guān);球蟲感染時(shí)造成腸道粘膜上皮細(xì)胞崩解和腸管發(fā)炎，細(xì)胞內(nèi)K+釋放使血鉀升高，進(jìn)而使血鈉下降，使腸道內(nèi)離子和滲透壓失去平衡［13］，從而達(dá)到抑制球蟲侵害和減輕腸道病變的目的，且有使用方便，長期使用不會(huì)產(chǎn)生毒副作用等優(yōu)點(diǎn)。

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