冉江華等

摘要 [目的] 掌握遵義市規(guī)模養(yǎng)豬場大腸桿菌的耐藥情況， 為貴州省動物源性細菌監(jiān)測提供數(shù)據(jù)。[方法]采集遵義市規(guī)模養(yǎng)豬場豬肛門拭子和總排污池新鮮糞便（或污水棉拭子）樣品335份， 分離出陽性大腸桿菌。采用微量肉湯稀釋法對分離的大腸桿菌進行耐藥性檢測。[結果] 分離并鑒定到334株陽性大腸桿菌，分離的大腸桿菌對7種抗菌藥物的耐藥率依次為：磺胺間甲氧嘧啶鈉>土霉素>恩諾沙星>頭孢噻呋>氟苯尼考>環(huán)丙沙星>慶大霉素，多重耐藥性主要集中在4耐、5耐、6耐和7耐。[結論] 遵義市規(guī)模養(yǎng)豬場大腸桿菌的耐藥性嚴重及多重耐藥性正在惡化，且豬場總排污池大腸桿菌對各藥物的耐藥性皆高于豬肛門拭子。

關鍵詞大腸桿菌；耐藥性；微量肉湯稀釋法；MIC

中圖分類號S852.65+1文獻標識碼

A文章編號0517-6611（2014）06-01714-02

Abstract [Objective]The research aimed to master the drug sensitivity of Escherichia coli in largescale farms in Zhunyi City and provide data for monitoring animalderived bacteria in Guizhou Province. [Method] 335 samples of pig anal swab and fresh manure from total sewage pool were collected largescale pig farms in Zhunyi City to isolate positive E. coli. The drug sensitivity of the isolated E. coli was detected by using broth microdilution method. [Result] 334 strains of positive E.coli were identified. The drug sensitivity rates of the isolated E.coli to 7 kinds of antibacterial drugs were as follows： sulfamonomethoxine Sodium>terramycin>enrofloxacin>ceftiofur>florfenicol>ciprofloxacin>gentamicin. Multiple drug resistance was mainly concentrated in 4、5、6 and 7 resistant. [Conclusion] The drug sensitivity of E.coli was serious in largescale pig farms in Zhunyi City and the multiple drug sensitivity was worse. The drug sensitivity of E.coli from total sewage pool was higher than that of swine anal swab.

Key words Escherichia coli； Drug resistance； Broth microdilution method； MIC

隨著抗菌藥物在畜禽養(yǎng)殖業(yè)中的廣泛使用，其不合理使用導致細菌耐藥水平不斷地升高，出現(xiàn)許多高度耐藥和多重耐藥的菌株甚至發(fā)展為“超級細菌”[1]，嚴重降低動物抗感染治療的效果，提高養(yǎng)殖成本。大腸桿菌是人類及動物腸道行在的正常寄殖菌群[2] ，作為條件性致病菌，在環(huán)境中也廣泛存在，其具有接受、儲備和傳播耐藥遺傳因子的能力，是潛在的耐藥基因儲存庫或中介站[3] 。因此，大腸桿菌已成為地區(qū)區(qū)域耐藥性水平和研究的標示菌。

近年來，遵義市養(yǎng)豬業(yè)已從傳統(tǒng)的自繁自養(yǎng)模式升級為規(guī)模化、標準化養(yǎng)殖模式，養(yǎng)殖數(shù)量不斷增加，細菌性疾病的發(fā)生也變得復雜化，導致抗菌藥物的使用及使用效果變得盲目和低效甚至無效。為此，筆者對遵義市5個地區(qū)（縣）25個規(guī)模養(yǎng)豬場分離的334株大腸桿菌進行了生化鑒定和藥敏試驗，旨在掌握遵義市規(guī)模養(yǎng)豬場大腸桿菌的耐藥現(xiàn)狀，為遵義市規(guī)?；B(yǎng)豬場合理、科學、有效用藥提供參考，為貴州省動物源性細菌監(jiān)測提供數(shù)據(jù)。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1器材。電子天平、高壓滅菌鍋、紫外分光光度計、超凈工作臺、恒溫培養(yǎng)箱、96孔培養(yǎng)板等。

1.1.2試劑。CarryBlair運輸培養(yǎng)基、LB肉湯、伊紅美藍瓊脂培養(yǎng)基、營養(yǎng)瓊脂、米勒-海頓肉湯（MHB）和腸桿菌科生化編碼鑒定管等。

1.1.3藥物。磺胺間甲氧嘧啶鈉、土霉素、恩若沙星、頭孢噻呋、氟苯尼考、環(huán)丙沙星、慶大霉素。

1.1.4質控菌株。大腸埃希氏菌質控菌株ATCC25922，購自中國菌種資源保藏中心。

1.2方法

1.2.1樣品的采集。按照“五點分布”原則并兼顧遵義地區(qū)的養(yǎng)殖特點，選取遵義市桐梓縣、匯川區(qū)、紅花崗區(qū)、遵義縣、綏陽縣5個縣區(qū)的25個規(guī)?；B(yǎng)豬場，采集豬肛門拭子及總排污池處的新鮮糞便或污水共335份樣品。

1.2.2大腸桿菌的分離與鑒定。

按照GB/T 4789.62003食品衛(wèi)生微生物學檢驗—致瀉大腸埃希氏菌檢驗進行分離與鑒定。

1.2.3最低抑菌濃度（MIC）測定。按照美國臨床實驗室標準化委員會（CLSI）2009 版推薦的微量肉湯稀釋法測定各菌株對磺胺間甲氧嘧啶鈉、慶大霉素、環(huán)丙沙星、恩諾沙星、土霉素、頭孢噻呋、氟苯尼考的最低抑菌濃度（MIC）。按照美國臨床實驗室標準化委員會（CLSI）2009 版推薦的判定標準及中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所標準（表1）進行耐藥性分析。

為此，各地區(qū)規(guī)模養(yǎng)豬場應根據(jù)該地區(qū)實際情況按照相關標準合理規(guī)范用藥，且相關職能部門應加強對養(yǎng)殖場用藥的宣傳、培訓和監(jiān)督工作，定期對管轄區(qū)域的養(yǎng)殖場耐藥情況進行監(jiān)測和分析，保障人畜健康，推動生態(tài)畜牧業(yè)持續(xù)健康發(fā)展。

（3）該試驗中73株豬場總排污池的大腸桿菌對各藥物耐藥性皆高于261株豬肛門拭子大腸桿菌對各藥物耐藥性和豬場總體耐藥性水平，除對環(huán)丙沙星的耐藥性高出9%以外，對其他藥物的耐藥性均在3.5%以內(nèi)。今后可利用豬場總排污池新鮮糞便（或污水棉拭子）中的大腸桿菌通過藥敏試驗來評估豬場總體耐藥性水平，以避免在進行耐藥性監(jiān)測工作時對豬的應激反應和各養(yǎng)豬場疫病的交叉感染。外界環(huán)境中大腸桿菌耐藥性比豬體內(nèi)大腸桿菌耐藥性微高的原因，是因為外界環(huán)境更適應于細菌間耐藥性的轉移。

參考文獻

[1]

KAIKAINEN V，IKAHEIMO R，KATILA M L.Fimbriation of Escherichia coli stains from patients with urosepsis demonstrated by a commercialag glulinations test[J].Clinical Microbiology，1991，29：221.

[2] WHITE P A，MCLVER C J，RAWLINSON W D.Integrons and gene cassettes in the enterobacteriaceae[J].Antimicrob Agents Chenmother，2001，45（9）：2658-2661.

[3] STUART B LEVY.The challenge of antibiotic resistance [J].Scientific American，1998，278：46-53.

[4] 王冠玉，譚艾娟，呂世明，等.貴州雞源大腸桿菌的分離鑒定及耐藥性測定[J].天津農(nóng)業(yè)科學，2013（2）：26-38.

[5] 夏利寧，趙紅瓊，蘇艷，等.新疆某豬場分離的大腸桿菌對抗生素耐藥性調(diào)查[J].新疆農(nóng)業(yè)科學，2013（12）：2299-2303.

[6] 王紅寧.豬、禽安全生產(chǎn)中主要病原菌耐藥性檢測及控制技術研究進展[J].四川畜牧獸醫(yī)，2003（S1）：59-60.

[7] SABERFAR E，POURAKBARI B，CHABOKDAVAN K，et al.Antimi-crobial susceptibility of Escherichia coli isolated from iranian broiler chicken flocks，2005-2006[J].Appl Poult Res，2008，17：302-304.

[8] 覃開權.湖南省規(guī)?；i場豬源大腸桿菌的耐藥性調(diào)查[J].中國動物檢疫，2011（3）：59-62.

[9] 馬全朝，顧欣，程增青，等.上海市豬源大腸桿菌耐藥性監(jiān)測[J].中國動物檢疫，2009（4）：54-56.

[10] 林居純，卓家珍，蔣紅霞，等.不同地區(qū)豬源和禽源大腸桿菌耐藥性監(jiān)測[J].華南農(nóng)業(yè)大學學報，2009（1）：86-88，93.

[11] 杜向黨，焦顯芹，陳玉霞，等.河南地區(qū)雞豬源大腸桿菌的耐藥性監(jiān)測[J].江西農(nóng)業(yè)大學學報，2008（6）：956-959.

[12] 魏雅靜，林居純，畢師誠，等.四川省不同地區(qū)豬源大腸桿菌耐藥性調(diào)查[J].安徽農(nóng)業(yè)科學，2011（1）：273-274，276.