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抗原負(fù)載的樹突狀細(xì)胞對(duì)食管鱗癌細(xì)胞體外殺傷作用的實(shí)驗(yàn)研究

2014-06-01 12:30:52劉玉俠王啟文盧衛(wèi)平段北野
關(guān)鍵詞:食道癌樹突食道

趙 鑫,劉玉俠,常 穎,王啟文*,盧衛(wèi)平,王 寶,段北野

(1.吉林省腫瘤醫(yī)院,吉林長(zhǎng)春130012;2.吉林省腫瘤防治研究所,吉林長(zhǎng)春130012)

抗原負(fù)載的樹突狀細(xì)胞對(duì)食管鱗癌細(xì)胞體外殺傷作用的實(shí)驗(yàn)研究

趙 鑫1,劉玉俠2,常 穎1,王啟文1*,盧衛(wèi)平1,王 寶1,段北野2

(1.吉林省腫瘤醫(yī)院,吉林長(zhǎng)春130012;2.吉林省腫瘤防治研究所,吉林長(zhǎng)春130012)

近年來(lái),生物治療由于它抗腫瘤的獨(dú)特特點(diǎn),在惡性腫瘤的治療中發(fā)揮著重要作用。樹突狀細(xì)胞(Dendritic Cells,DC)作為腫瘤生物治療中的一種,近年來(lái)研究的比較多,尤其在遞呈抗原抗腫瘤方面。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)抗原負(fù)載的DC對(duì)食道癌細(xì)胞體外殺傷作用進(jìn)行研究。

1 材料和方法

1.1 材料淋巴細(xì)胞分離液(比重1.078)購(gòu)于中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院血研所科技公司;GM-CSF,TNF-α,IL-4購(gòu)于Peprotech公司;IMDM培養(yǎng)基購(gòu)于賽默飛世爾生物化學(xué)制品有限公司;胎牛血清購(gòu)于北京元亨;MTT購(gòu)于Sigma公司。Ecap-109細(xì)胞購(gòu)于中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)研究所。

1.2 外周血單核細(xì)胞的分離用淋巴細(xì)胞分離液(比重1.078)分離人外周血單核細(xì)胞,然后將分離的外周血單核細(xì)胞用含10%FCS的IMDM培養(yǎng)液調(diào)細(xì)胞濃度為1×106/ml,放入細(xì)胞培養(yǎng)瓶中,進(jìn)行培養(yǎng)。

1.3 樹突狀細(xì)胞的體外誘導(dǎo)、培養(yǎng)以上分離的單核細(xì)胞培養(yǎng)1天后,進(jìn)行細(xì)菌污染檢測(cè)后,加入細(xì)胞因子GM-CSF100ng/ml,IL-4 50ng/ml,TNF-α10 ng/ml,37℃,5%CO2條件下在培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),每3天半量換液并補(bǔ)加細(xì)胞因子,誘導(dǎo)DC生成。

1.4 Ecap-109細(xì)胞抗原的制備用含10%FCS的IMDM的培養(yǎng)液培養(yǎng)人食道鱗癌細(xì)胞Ecap-109至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,用0.25%胰酶消化后,放入恒溫水浴箱,43℃,2h進(jìn)行熱休克,結(jié)束后用超聲細(xì)胞破碎儀破碎30min,15 000rpm,離心1h,取上清作為腫瘤抗原。

1.5 抗原濃度測(cè)定用紫外分光光度計(jì)測(cè)定提取抗原的OD值,用下列公式計(jì)算抗原濃度:抗原(蛋白)濃度(mg/ml)=1.45×OD280-0.74× OD260。

1.6 腫瘤抗原負(fù)載DC將提取的腫瘤抗原(20 μg/ml)與培養(yǎng)6天的DC共同培養(yǎng),3天后進(jìn)行殺傷活性實(shí)驗(yàn)。

1.7 抗原負(fù)載的DC及DC對(duì)Ecap-109細(xì)胞殺傷活性實(shí)驗(yàn)

1.7.1 復(fù)蘇、培養(yǎng)Ecap-109細(xì)胞 將Ecap-109細(xì)胞從液氮中取出,復(fù)溫,洗滌后,用含10%胎牛血清的IMDM培養(yǎng)Ecap-109細(xì)胞至指數(shù)生長(zhǎng)期,然后用0.25%胰酶消化,用IMDM培養(yǎng)液洗滌后,計(jì)數(shù)細(xì)胞數(shù)為5×104/ml,接種到96孔細(xì)胞培養(yǎng)板,每孔100μl。

1.7.2 將培養(yǎng)的DC、抗原負(fù)載的DC計(jì)數(shù)細(xì)胞數(shù)為1.25×106/ml,按以下設(shè)計(jì)加入到已經(jīng)加入Ecap-109細(xì)胞并貼壁的96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中,效應(yīng)細(xì)胞(DC、抗原負(fù)載的DC細(xì)胞)與靶細(xì)胞(Ecap-109)的比例為25∶1,每組實(shí)驗(yàn)設(shè)6復(fù)孔,培養(yǎng)48h。培養(yǎng)結(jié)束前4h加入MTT(5μg/ml),20μl/孔。培養(yǎng)結(jié)束后,吸去培養(yǎng)板中的上清,每孔加150μl DMSO,振蕩混勻,上酶標(biāo)儀測(cè)OD值(492nm)。實(shí)驗(yàn)分組:①DC對(duì)照;②DC+Ag對(duì)照;③DC+Ecap-109;④DC+Ag+Ecap-109;⑤Ecap-109對(duì)照。

1.8 殺傷活性計(jì)算公式100%。

1.9統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SPSS V16.0軟件,采用t檢驗(yàn)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理。

2 結(jié)果

負(fù)載抗原的DC以及DC對(duì)人食道癌細(xì)胞株Ecap-109的殺傷作用,見表1。從表中抗原看出,負(fù)載抗原的DC對(duì)Ecap-109的殺傷作用明顯高于未負(fù)載抗原的DC(P<0.01)。

表1 負(fù)載抗原的DC以及DC對(duì)人食道癌細(xì)胞株Ecap-109的殺傷作用

3 討論

食道鱗癌的治療以手術(shù)切除為主,輔以化療和放療,但其遠(yuǎn)期療效仍不理想。ESCC患者就診時(shí)多已發(fā)展為晚期,手術(shù)難以完全切除,而放、化療不僅對(duì)造血系統(tǒng)、消化系統(tǒng)等產(chǎn)生嚴(yán)重毒性作用,最終還可能誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生免疫耐受。近年來(lái)腫瘤生物治療已經(jīng)成為腫瘤治療的一種新手段,以DC疫苗活化CTL發(fā)揮抗腫瘤效應(yīng)為基礎(chǔ)的免疫治療取得了初步成果[1-3],這對(duì)食道鱗癌的治療具有深遠(yuǎn)的意義。

生物治療的細(xì)胞有很多種,包括20世紀(jì)80年代初的LAK細(xì)胞,TIL細(xì)胞以及發(fā)展到現(xiàn)在的NK細(xì)胞,γδT細(xì)胞,T細(xì)胞,CIK細(xì)胞,DC細(xì)胞等,它們的作用原理相同,但是作用機(jī)制及效果不盡相同。樹突狀細(xì)胞(Dendritic Cells,DC)作為腫瘤生物治療中的一種,近年來(lái)研究的比較多,尤其在遞呈抗原抗腫瘤方面[4-6],并且都得到了較好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)抗原負(fù)載的DC對(duì)食道癌細(xì)胞體外殺傷作用的研究,尋找一種對(duì)食道鱗癌細(xì)胞有效的生物治療方法,為食道鱗狀細(xì)胞癌的治療提供一種新的治療手段。

DC是體內(nèi)功能最強(qiáng)的抗原遞呈細(xì)胞,它能攝取、加工和遞呈腫瘤抗原,促使細(xì)胞毒T細(xì)胞(CTL)和T輔助細(xì)胞(Th)發(fā)揮抗腫瘤作用。

TIDC(tumor infiltrating dendritic cell)是浸潤(rùn)至腫瘤及其附近轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)內(nèi)的樹突狀細(xì)胞,它的數(shù)量和功能可以反映機(jī)體的免疫狀態(tài)。研究發(fā)現(xiàn)[7],食道癌組織中CD1α和CD83的表達(dá)低于正常黏膜組織,而CD1α是DC的特異標(biāo)志,CD83是DC成熟的標(biāo)志,說(shuō)明食道癌組織DC的表達(dá)低于正常食道黏膜組織,轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)的DC數(shù)目少于正常淋巴結(jié),表明食道鱗癌患者機(jī)體全身或局部轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中免疫能力下降,也說(shuō)明DC在抗腫瘤免疫中的重要作用。

熱休克蛋白(heat shock protein,HSP)是一個(gè)大的蛋白質(zhì)家族,在細(xì)胞中起分子伴侶作用。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn),這一家族除了具有重要的分子伴侶功能外,還參與細(xì)胞抗損傷、分化等作用,其中的HSP70在抗腫瘤免疫反應(yīng)中發(fā)揮著重要作用。HSP70可以與抗原肽結(jié)合并能夠?qū)⑴c其結(jié)合的抗原多肽通過(guò)內(nèi)源性途徑傳遞給MHC I類分子,引起特異性的T細(xì)胞活化,發(fā)揮抗腫瘤作用[8]。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)體外誘導(dǎo)DC生成,并用熱休克方法提取的熱休克蛋白70-抗原肽作為抗原,與DC共同培養(yǎng),對(duì)食道鱗癌細(xì)胞Ecap-109進(jìn)行體外殺傷實(shí)驗(yàn)研究,證明無(wú)論是DC還是負(fù)載抗原的DC對(duì)Ecap-109均有較強(qiáng)的殺傷作用,其中負(fù)載抗原的DC對(duì)Ecap-109具有更強(qiáng)的殺傷作用(P<0.01),證明從食道鱗癌細(xì)胞Ecap-109中提取的熱休克蛋白70抗原肽可以作為腫瘤抗原增強(qiáng)DC的抗腫瘤功能。

[1]楊靜悅,曹大勇,劉文超,等.L-18基因增強(qiáng)腫瘤抗原致敏DC誘導(dǎo)的CTL特異性殺傷肝癌細(xì)胞[J].中國(guó)腫瘤生物治療雜志,2009,16(1)55.

[2]Gilboa E.DC-based cancer vaccines[J]J Clin Invest,2007,117(5):1195.

[3]Curti A,Tosi P,Comoli P.et al.Phase I/II clinical trial of sequential subcutaneous and intravenous delivery of dendritic cell vaccination for refractory multiple myeloma using patient specific tumor idiotype protein or idiotype(VDJ)-derived class I restricted peptides[J].Br J haematol,2007,139(3):415.

[4]趙立波,李 才,周維國(guó),等.樹突狀細(xì)胞負(fù)載的腫瘤抗原肽疫苗抗腦膠質(zhì)瘤作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué),2009,13(1):21.

[5]劉玉俠,于 鴻,張振武,等.熱休克蛋白70激發(fā)樹突狀細(xì)胞抗肝癌作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué),2010,14(12):1969.

[6]盧衛(wèi)平,賈春祎,王啟文,等.HSP70-抗原肽負(fù)載的DCs對(duì)肺癌細(xì)胞殺傷作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)誤診學(xué)雜志,2011,11(24):5807.

[7]王 雷,單保恩,劉 亮,等.食管鱗癌和轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織中CD1α和CD83的表達(dá)及其臨床意義[J].中國(guó)腫瘤生物治療雜志,2009,16(4):401.

[8]Nair SK,Synder D,Rous BT,et al.Regression of tumors in mice vaccinated with professional antigen-presenting cells pulsed with tumor extracts[J].Int J Cancer,1997,70:706.

2013-09-28)

1007-4287(2014)10-1599-02

*通訊作者

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