韓 飛 張 曼 張 周 王晶鈺

（1.楊凌職業(yè)技術(shù)學(xué)院，陜西楊凌 712100；2.西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，陜西楊凌 712100）

甲硝唑（Metronidazole MTZ）又稱為甲硝咪唑或滅滴靈，化學(xué)名稱為1-（β-羥乙基）-2-甲基-5-硝基咪唑，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如圖1。甲硝唑是畜牧生產(chǎn)中最常用的一種硝基咪唑類藥物，具有抗厭氧菌和抗原蟲作用[1]。

圖1 甲硝唑的化學(xué)結(jié)構(gòu)式

1 藥理作用

甲硝哇是不帶電荷的小分子化合物，可通過擴(kuò)散進(jìn)入微生物體內(nèi)。甲硝唑的硝基在無氧環(huán)境中還原成氨基，生成有生物活性的高細(xì)胞毒的中間體。該中間體與細(xì)菌的DNA反應(yīng)，阻斷其轉(zhuǎn)錄和復(fù)制而顯示抗厭氧菌的作用，但對需氧菌或兼性厭氧菌無效[2]。甲硝唑還廣泛應(yīng)用于生殖道滴蟲病，家禽的組織滴蟲病，犬、貓、馬的賈地鞭毛蟲病。

甲硝唑?qū)箙捬蹙钚员容^實(shí)驗(yàn)（表1）證明，甲硝唑?qū)Ｐ詤捬蹙忻黠@的抗菌作用，如擬桿菌屬（包括脆弱擬桿菌）、梭形桿菌屬、梭狀芽抱桿菌屬（包括破傷風(fēng)桿菌）、部分真桿菌、消化球菌和消化鏈球菌[3]。

表1 甲硝唑?qū)捬跷⑸锏腗IC90（μg/ml）比較

2 藥動(dòng)學(xué)特征

甲硝唑口服吸收較好，生物利用度較高?？诜? h后，吸收達(dá)80%以上，空胃與進(jìn)食后服用，未發(fā)現(xiàn)其生物利用度有明顯差異。甲硝唑可以通過血腦屏障，在膽汁、羊水、胎盤、唾液、尿液、膿液、精液和腦脊液中均可出現(xiàn)有效濃度。甲硝唑主要在肝臟中代謝，通過母體化合中的代謝產(chǎn)物與葡萄糖醛酸結(jié)合，氧化成為酸性物質(zhì)并進(jìn)一步降解為小分子化合物[4]。甲硝唑代謝產(chǎn)物和原形藥主要經(jīng)腎臟隨尿液排到體外，少數(shù)（6%～15%）經(jīng)糞便排出?？傮w排出量占給藥量的60%～80%，其中原形藥不足10%[5]。

丁祖銳[6]等采用紫外分光光度法測定家兔體內(nèi)甲硝唑血藥濃度，結(jié)果表明，口服與靜注給藥均符合二室模型?？诜紫踹蚱?.381 h出現(xiàn)血藥峰濃度，消除半衰期為4.903 h；靜脈注射甲硝唑葡萄糖液后，其消除半衰期為4.680 h，二者的生物利用度均為0.66。高蘇莉[7]等經(jīng)小鼠尾靜脈給藥后，得到甲硝唑的主要?jiǎng)恿W(xué)參數(shù)：消除半衰期為1.26 h、中央室分布容積為0.76 L/kg、表觀分布容積為32.32（mg/L）·h以及體清除率為0.62 L/（kg·h）。任國蓮[8]等將甲硝唑片劑口服飼喂健康犬，采用反相高效液相色譜法（RP-HPLC）測定犬血漿中甲硝唑的濃度，結(jié)果表明，藥峰時(shí)間為（1.4±0.5）h，峰濃度為（15.0±1.8）μg/ml，半衰期為（3.8±0.7）h。

3 殘留檢測

甲硝唑?yàn)楂F醫(yī)臨床和畜牧養(yǎng)殖業(yè)做出了重要貢獻(xiàn)，但由此產(chǎn)生的動(dòng)物體內(nèi)藥物殘留，不僅給動(dòng)物的生存與福利帶來危害，而且間接地威脅著人類的健康與生活質(zhì)量。近年來，我國水產(chǎn)品、畜產(chǎn)品和農(nóng)產(chǎn)品等在食品出口時(shí)因藥物殘留檢測技術(shù)壁壘屢屢遭遇打擊，造成了不可估量的經(jīng)濟(jì)損失。因此，分析動(dòng)物食品中藥物殘留超標(biāo)的原因，闡明藥物殘留的危害性，并建立合適的藥物殘留檢測方法是十分必要的。

3.1 殘留超標(biāo)原因

第1，在動(dòng)物飼養(yǎng)過程中，飼養(yǎng)員由于缺乏相關(guān)的甲硝唑用量及用法知識(shí)，沒有嚴(yán)格遵守甲硝唑的使用對象、使用劑量以及使用期限等規(guī)定。第2，甲硝唑的休藥期與其在動(dòng)物體內(nèi)的殘留量和消除率密切相關(guān)，而且與給藥途徑、給藥劑量和動(dòng)物種類有關(guān)，而大多數(shù)養(yǎng)殖戶幾乎不按照規(guī)定執(zhí)行休藥期。第3，動(dòng)物發(fā)病時(shí)，養(yǎng)殖戶急于治療，以減少經(jīng)濟(jì)損失，誤以為用藥量越大，疾病恢復(fù)得越快。

3.2 毒副作用

甲硝唑的副作用最常見的是消化道反應(yīng)，如惡心、厭食、嘔吐、腹瀉、腹痛等，療程較長時(shí)，消化道反應(yīng)會(huì)明顯增多[9]。服用甲硝唑后，動(dòng)物尿液常呈現(xiàn)紅棕色，劑量過大時(shí)，還會(huì)出現(xiàn)白細(xì)胞數(shù)量減少甚至神經(jīng)癥狀，但通?？梢阅瓦^[10]。甲硝唑可引起皮膚過敏反應(yīng)，如皮膚紅斑、潮紅、瘙癢、水泡浮腫等，停藥后消失。甲硝唑易穿透血腦屏障，使神經(jīng)系統(tǒng)中毒，并能透過乳腺屏障和胎盤屏障，因此妊娠早期和哺乳期的動(dòng)物不宜使用。Elizondo[11]等報(bào)道了長期大劑量飼喂家兔、大鼠、小鼠甲硝唑時(shí)，三者均發(fā)生致癌作用。

3.3 殘留檢測方法

為了控制獸藥在動(dòng)物食品中的殘留量，保障食品衛(wèi)生安全，農(nóng)業(yè)部于1999年發(fā)布17號(hào)文《動(dòng)物性食品中獸藥最高殘留限量》規(guī)定：洛硝噠唑、二甲硝咪唑、甲硝唑在所有食品動(dòng)物可食用組織中的最高殘留量為零，即不允許甲硝唑在動(dòng)物食品中有殘留。目前，甲硝唑在動(dòng)物體內(nèi)殘留檢測的方法主要有高效液相色譜法（HPLC）、質(zhì)譜聯(lián)用法和免疫分析技術(shù)等。

3.3.1 高效液相色譜法

甲硝唑是硝基咪唑類抗生素，含有硝基咪唑共軛結(jié)構(gòu)，在紫外條件下具有強(qiáng)烈的吸收功能。因此，高效液相色譜法檢測甲硝唑在動(dòng)物體內(nèi)的殘留時(shí)大多使用紫外檢測器。

艾霞[12]等建立了草魚皮膚、肌肉組織中檢測甲硝唑殘留的高效液相色譜法，紫外檢測波長為325 nm，皮膚、肌肉組織中的最低定量限均為1 μg/kg，結(jié)果表明，甲硝唑在0.01～50.00 mg/L濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)為0.999 9；皮膚、肌肉組織中的甲硝唑平均回收率分別為75%和69%，日間變異系數(shù)均低于15%。劉書慶[13]等建立了豬和雞肌肉組織中檢測甲硝唑殘留的高效液相色譜法，紫外檢測波長為325 nm，豬和雞肌肉中甲硝唑的最低檢測限為1 μg/kg，結(jié)果表明，甲硝唑在0.012 5～5.000 0 μg/ml濃度范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為0.9998；二者肌肉中甲硝唑的絕對回收率為74.4%～81.6%，日間變異系數(shù)不超過5%。沈建忠[14]等建立了家禽肌肉組織中檢測二硝基咪唑、洛硝噠唑、甲硝唑殘留的高效液相色譜法，檢測波長為320 nm，其中甲硝唑的最低檢測限為0.5 ng/g，結(jié)果表明，甲硝唑在15.0～750.0 ng/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)為0.998；肉雞肌肉組織中的平均回收率為89.8%，變異系數(shù)為2.8%～6.9%。汪紀(jì)倉[15]等建立了豬肌肉、腎臟、肝臟和脂肪中檢測甲硝唑、地美硝唑和洛硝唑等硝基咪唑類藥物殘留的高效液相色譜法，檢測波長為320 nm，其中甲硝唑在腎臟和肝臟中的最低檢測限為1.0 μg/kg，在脂肪和肌肉組織中為0.5 μg/kg，結(jié)果表明，甲硝唑在0.005～2.0 μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)為0.999 8；平均回收率為62.4%～82.7%，變異系數(shù)為9.6%～10.3%。

3.3.2 質(zhì)譜聯(lián)用法

普通的色譜分析法只能進(jìn)行色譜峰大小、保留時(shí)間的定量分析，不能鑒定殘留組分的結(jié)構(gòu)。而質(zhì)譜可對殘留樣品進(jìn)行高效分離和較強(qiáng)的結(jié)構(gòu)鑒定，適用于難揮發(fā)、極性強(qiáng)、熱不穩(wěn)定和殘留度濃低的藥物。

權(quán)伍英[16]等建立了雞蛋中檢測甲硝唑殘留量的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，最低定量限為0.05 μg/kg，檢測線性濃度范圍為0.05～25 μg/kg，相關(guān)系數(shù)為0.998 1；3個(gè)添加水平的平均回收率為98.1%～107%，相對偏差低于14%。王海[17]等建立了豬組織中檢測硝基咪唑類藥物殘留量的高效液相色譜-質(zhì)譜法，豬皮下組織、腎臟、肝臟和肌肉中的檢測限為0.5～1μg/kg，其中甲硝唑檢測線性濃度范圍為0.5～250 μg/L，相關(guān)系數(shù)為0.9999；在3個(gè)添加水平下測得回收率：皮下組織為63.59%～79.54%，腎臟為65.21%～72.52%，肝臟為64.99%～78.62%，肌肉為63.34%～83.73%，相對偏差為4.30%～8.91%。

3.3.3 免疫分析技術(shù)

免疫分析技術(shù)是一種以抗原、抗體的可逆性、特異性結(jié)合反應(yīng)為基礎(chǔ)的分析技術(shù)，可將藥物分子以半抗原的形式與蛋白載體共價(jià)偶聯(lián)制成人工抗原，引發(fā)動(dòng)物免疫應(yīng)答，產(chǎn)生活性物質(zhì)識(shí)別并結(jié)合藥物分子。通過標(biāo)記抗體或半抗原，利用標(biāo)記物的化學(xué)、物理、生物放大作用，定性、定量檢測樣品中藥物的殘留物。該技術(shù)具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、分析成本低、分析容量大、方法快捷等優(yōu)點(diǎn)。

何萬洋[18]等通過篩選硝基咪唑類藥物的單克隆抗體，采用ELISA檢測方法研制出了檢測雞肉中硝基咪唑類藥物殘留的試劑盒。該試劑盒的最低檢測限為0.04μg/kg，其中甲硝唑在2個(gè)添加水平的平均回收率為82.7%～96.7%，批內(nèi)變異系數(shù)為7.8%～13.4%，批間變異系數(shù)分別為13.5%和12.4%。

4 小結(jié)

甲硝唑在體內(nèi)吸收迅速而完全，蛋白結(jié)合率低于5%，在體液和組織中分布廣泛。藥動(dòng)學(xué)特征表明甲硝唑半衰期較長，能在體內(nèi)保持有效濃度。甲硝唑主要經(jīng)尿液排出體外，因此，養(yǎng)殖場內(nèi)的動(dòng)物服用甲硝唑后，尿液應(yīng)進(jìn)行有效處理，減少周圍的微生物對甲硝唑的耐藥性，從而降低微生物耐藥性對人體健康帶來的潛在威脅。甲硝唑的不良反應(yīng)也是非常明顯，尤其是在食品動(dòng)物中的殘留，不僅危害動(dòng)物健康，也會(huì)對人們的生活產(chǎn)生潛在的不良影響。分析甲硝唑殘留原因，減少殘留來源的同時(shí)，應(yīng)加強(qiáng)動(dòng)物組織中藥物的殘留檢測。由于甲硝唑的硝基咪唑共軛結(jié)構(gòu)具有強(qiáng)烈的紫外吸收，紫外液相色譜儀測定甲硝唑殘留較為常見，國內(nèi)外也有很多文獻(xiàn)進(jìn)行報(bào)道，但其檢測限較高；而氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法的衍生化過程繁瑣復(fù)雜，液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法雖可進(jìn)行多組定量分析和高效分離，但操作繁瑣且費(fèi)用較高，推廣難度較大；免疫分析技術(shù)操作簡單、靈敏度高、費(fèi)用較低，但此技術(shù)尚不成熟，國內(nèi)外的相關(guān)報(bào)道也較少。因此，甲硝唑的殘留檢測方法應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況需要進(jìn)行適當(dāng)?shù)姆治觥?yōu)化。

[1]Baggot JD，Wilson WD，Hietala S.Clinical pharmacolinetics of metronidazole in horses [J ]. J Vet Pharmacol Therap，1988，（11）：417-420.

[2]溫玉麟，張瑞文.新的一類抗厭氧微生物藥物一硝基咪哇類化合物[J].醫(yī)藥工業(yè)，1985，（7）：36-41.

[3]熊德鑫，祝小楓，盛志勇.替硝哇對厭氧菌體外抗菌活性的研究[J].中國抗生素雜志，1997，22：472-476.

[4]Adams H.R. Pharmacology and Therapeutics（8thedition）[M].USA：lowa State University Press，2001：993-994.

[5]Boggot J D，Wilson W D，Hietala S. Clinical pharmacolinetics of metronidazole in horses. J. Vet. Pharmacol. Therap，1988，（11）：417-420.

[6]丁祖銳，秦玉華，方鳳琴.甲硝唑藥物動(dòng)力學(xué)研究[J].中國藥學(xué)雜志，1991，26（2）：88-90.

[7]高蘇莉，顧宜，黃寶文.替硝唑與甲硝唑?qū)捬蹙淖饔眉捌渌巹?dòng)學(xué)比較[J].第四軍醫(yī)大學(xué)報(bào)，2004，25（10）：901-903.

[8]任國蓮，白克華，吳婧，等.反相高效液相色譜法測定犬血漿中甲硝唑濃度[J].山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，39（12）：1109-1111.

[9]吳志全，夏高輝，王浩，等.甲硝唑毒副作用49例報(bào)告[J].實(shí)用外科雜志，1989，9：275.

[10]陳杖榴.主編.獸醫(yī)藥理學(xué)（第三版）[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2009，348-349.

[11]Elizondo G，Gonsebatt M E，Salazar A M. Genotoxic ects of metronidazole. Mutation Research，1996，370：75-80.

[12]艾霞，王大菊，張叢蘭，等.高效液相色譜法檢測草魚可食用組織中甲硝唑的殘留[J].天津農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，12（2）：10-14.

[13]劉書慶，王大菊，秦大偉.HPLC法測定甲硝唑在雞和豬肌肉組織中的殘留[J].山東輕工業(yè)學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，19（3）：5-8.

[14]沈建忠，項(xiàng)新華，張躍，等.家禽肌肉組織中硝基咪唑類藥物殘留高效液相色譜檢測研究[J].中國農(nóng)業(yè)科學(xué)，2003，36（6）：700-703.

[15]汪紀(jì)倉，王大菊，高小龍，等.高效液相色譜法檢測豬組織中硝基咪唑類藥物殘留[J].中國農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008，41（10）：3318-3325.

[16]權(quán)伍英，欒燕，谷晶，等.雞蛋中甲硝唑殘留的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測方法研究[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2007，17（2）：231-233.

[17]王海，劉素英，單吉浩，等.高效液相色譜-質(zhì)譜法測定豬組織中硝基咪唑類藥物殘留量[J].中國獸醫(yī)雜志，2005，39（12）：8-11.

[18]何萬洋，萬宇平，祝旋，等.雞肉中硝基咪唑類藥物殘留ELISA檢測試劑盒的研制[J].中國家禽，2011，33（7）：31-34.