張丹　陶燕鐸　顏學(xué)偉　曹緯國(guó)　王剛

摘要：采用單因素試驗(yàn)與正交試驗(yàn)相結(jié)合優(yōu)化小葉黑柴胡（Bupleurum smithii Wolff var. parvifolium Shan et Y. Li）總皂苷的提取工藝，考察了提取溫度、提取溶劑pH、乙醇濃度、料液比（g/mL，下同）、提取次數(shù)和提取時(shí)間對(duì)小葉黑柴胡總皂苷得率的影響。結(jié)果表明，小葉黑柴胡總皂苷的較優(yōu)提取工藝條件為料液比1∶10，乙醇濃度80%，提取次數(shù)3次，提取時(shí)間1.0 h，提取溫度80 ℃，提取溶劑pH為9。該工藝條件下，小葉黑柴胡總皂苷的得率為2.78%。驗(yàn)證試驗(yàn)表明該工藝穩(wěn)定可行，可為小葉黑柴胡的深入研究提供參考。

關(guān)鍵詞：小葉黑柴胡（Bupleurum smithii Wolff var. parvifolium Shan et Y. Li）；總皂苷；提取工藝；正交試驗(yàn)

中圖分類號(hào)：R284.2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2014）05-1139-03

柴胡為常用中藥之一，中國(guó)藥典[1]規(guī)定柴胡藥材基源為柴胡（Bupleurum chinense DC.）和狹葉柴胡（Bupleurum scorzonerifdium Willd.），近年來(lái)柴胡藥材需求量較大，資源緊張，導(dǎo)致柴胡藥材價(jià)格不斷攀升，急需擴(kuò)大藥用資源。小葉黑柴胡（Bupleurum smithii Wolff var. parvifolium Shan et Y. Li）主要分布于青海、寧夏、甘肅、山西和內(nèi)蒙古等地，資源量較大，為青海、寧夏等地商品柴胡的主流品種[2]。其皂苷類成分與柴胡相似[3]，重慶醫(yī)科大學(xué)中藥化學(xué)成分研究組前期研究表明小葉黑柴胡中柴胡皂苷a的含量可達(dá)到0.5%以上[4]，遠(yuǎn)高于藥典柴胡藥材的標(biāo)準(zhǔn)，具有較大的開(kāi)發(fā)利用價(jià)值。

本研究擬建立小葉黑柴胡中柴胡總皂苷的較優(yōu)提取工藝，為純化制備高純度的小葉黑柴胡總皂苷奠定基礎(chǔ)，提高小葉黑柴胡的生產(chǎn)附加值，以達(dá)到對(duì)高原特色生物資源深度開(kāi)發(fā)利用的目的。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 原料與試劑 小葉黑柴胡（購(gòu)于青海西寧，經(jīng)中國(guó)科學(xué)院西北高原生物研究所梅麗娟副研究員鑒定為小葉黑柴胡（Bupleurum smithii Wolff var. parvifolium Shan et Y. Li）。

柴胡皂苷a標(biāo)準(zhǔn)品（中國(guó)藥品生物制品鑒定所提供，批號(hào)：110777-200507）；香蘭素、甲醇、95%乙醇、冰醋酸、正丁醇、高氯酸等均為分析純。

1.1.2 儀器與設(shè)備 UV-1800型分光光度計(jì)（上海箐華科技儀器有限公司）；數(shù)顯三用恒溫水浴箱（江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）；F-80型高速粉碎機(jī)（金壇市金城國(guó)勝實(shí)驗(yàn)儀器廠）；AL204型電子分析天平（瑞士梅特勒-托利多）。

1.2 方法[5-8]

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備 精密稱取柴胡皂苷a標(biāo)準(zhǔn)品9.6 mg，置10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻即得。

1.2.2 供試品溶液的制備 精密稱取小葉黑柴胡粗粉5.0 g，置具塞三角瓶中，加入80%乙醇溶液100 mL，稱定質(zhì)量，浸泡過(guò)夜后超聲提取60 min，冷卻至室溫后稱重，用80%乙醇溶液補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻后過(guò)濾，精密量取續(xù)濾液10 mL濃縮至干后，加甲醇溶解、轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶并定容，作為供試品溶液。

1.2.3 最大吸收波長(zhǎng)的測(cè)定 取柴胡皂苷a標(biāo)準(zhǔn)品溶液和供試品溶液各0.2 mL，分別置10 mL具塞比色管中，揮發(fā)干溶劑后，各加入0.2 mL 5%香草醛-冰醋酸溶液和0.8 mL高氯酸，搖勻，60 ℃恒溫水浴加熱20 min，取出后置冰水浴中冷卻15 min，再加入5 mL冰醋酸，搖勻，在200～800 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描。

1.2.4 線性關(guān)系的考察 分別精密量取柴胡皂苷a標(biāo)準(zhǔn)品溶液0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8 mL，置10 mL具塞比色管中，按照“1.2.3”操作顯色，以第1管做空白對(duì)照，于“1.2.3”確定的最大吸收波長(zhǎng)下分別測(cè)定其吸光度，計(jì)算線性回歸方程。

1.2.5 小葉黑柴胡總皂苷含量的測(cè)定 精密量取供試品溶液0.5 mL置于10 mL具塞比色管中，按照“1.2.3”方法顯色后，于“1.2.3”確定的最大吸收波長(zhǎng)下測(cè)定其吸光度，并依據(jù)線性回歸方程計(jì)算樣品中總皂苷的含量。

1.2.6 單因素試驗(yàn)

1）考察提取溫度對(duì)小葉黑柴胡總皂苷得率的影響。稱取小葉黑柴胡粗粉3份，每份約5.0 g，置圓底燒瓶中各加入40 mL 80%的乙醇溶液，分別在70、80、90 ℃ [9]下各回流提取3次，每次1.0 h。合并3次提取液，濃縮至干，加甲醇溶解、轉(zhuǎn)移并定容至100 mL容量瓶中，過(guò)濾，取續(xù)濾液按照“1.2.5”方法測(cè)定并計(jì)算樣品中總皂苷的含量。

2）考察提取溶劑pH對(duì)小葉黑柴胡總皂苷得率的影響。稱取小葉黑柴胡粗粉3份，每份約5.0g，置圓底燒瓶中各加入40 mL 80%的乙醇溶液，分別用濃度為30%的氨水調(diào)整其pH為7.0、8.0、9.0，于80 ℃水浴下各回流提取3次，每次1.0 h。合并3次提取液，濃縮至干，加甲醇溶解、轉(zhuǎn)移并定容至100 mL容量瓶中，過(guò)濾，取續(xù)濾液按照“1.2.5”方法測(cè)定并計(jì)算樣品中總皂苷的含量。

1.2.7 正交試驗(yàn) 選取影響小葉黑柴胡總皂苷提取效果的乙醇濃度（A）、料液比（B）（g/mL，下同）、提取次數(shù)（C）及提取時(shí)間（D）作為考察因素，提取溫度與提取溶劑pH的設(shè)定依據(jù)“1.2.6”試驗(yàn)結(jié)果，以小葉黑柴胡總皂苷的得率為考察指標(biāo)，選用L9（34）正交試驗(yàn)考察各因素對(duì)小葉黑柴胡總皂苷提取效果的影響。正交試驗(yàn)因素與水平見(jiàn)表1。

1.2.8 驗(yàn)證試驗(yàn) 分別精密稱取3份小葉黑柴胡藥材，每份20.0 g，依據(jù)單因素試驗(yàn)與正交試驗(yàn)結(jié)果優(yōu)選的工藝條件提取小葉黑柴胡總皂苷，測(cè)定并計(jì)算其含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 最大吸收波長(zhǎng)的確定

依據(jù)“1.2.3”操作，結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)品和供試品溶液顯色后均在612 nm處有較大吸收，因此選擇612 nm為測(cè)定波長(zhǎng)。

2.2 線性關(guān)系的考察

依據(jù)“1.2.4”測(cè)定結(jié)果，以吸光度值A(chǔ)為縱坐標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)品溶液濃度C為橫坐標(biāo)計(jì)算，求得回歸方程：A=2.195 C+0.129，r=0.999 2，線性范圍為0.096～0.768 mg/mL。

2.3 小葉黑柴胡總皂苷含量測(cè)定結(jié)果

依據(jù)“1.2.5”操作，結(jié)果測(cè)得小葉黑柴胡藥材中總皂苷的含量為2.81%。

2.4 單因素試驗(yàn)結(jié)果與分析

2.4.1 提取溫度對(duì)小葉黑柴胡總皂苷得率的影響 按照“1.2.6”項(xiàng)下提取溫度對(duì)柴胡總皂苷提取的影響試驗(yàn)操作并測(cè)定，70、80、90 ℃ 3個(gè)提取溫度條件下，小葉黑柴胡總皂苷的得率分別為1.70%、2.24%和1.56%，由此可見(jiàn)提取溫度對(duì)小葉黑柴胡總皂苷的得率影響較大，其中80 ℃為較優(yōu)提取溫度。

2.4.2 提取溶劑pH對(duì)小葉黑柴胡總皂苷得率的影響 試驗(yàn)結(jié)果表明，在提取溶劑pH分別為8、9、10 的條件下，小葉黑柴胡總皂苷的得率分別為2.44%、2.48%和2.39%，由此可見(jiàn)提取溶劑pH也是影響小葉黑柴胡總皂苷提取效果的因素之一，其中提取溶劑pH為9時(shí)提取效果較好。

2.3 正交試驗(yàn)結(jié)果與分析

按照“1.2.7”正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，以柴胡總皂苷的得率為考察指標(biāo)，優(yōu)選小葉黑柴胡總皂苷提取工藝條件，其結(jié)果見(jiàn)表2，方差分析結(jié)果見(jiàn)表3。

由表2極差分析結(jié)果可知，各因素的主次順序?yàn)镃、B、D、A，表明提取次數(shù)對(duì)小葉黑柴胡總皂苷提取效果的影響最大。小葉黑柴胡總皂苷提取的較優(yōu)工藝條件組合為A3B3C3D1，結(jié)合單因素試驗(yàn)結(jié)果，得小葉黑柴胡總皂苷較優(yōu)提取工藝為：料液比1∶10，乙醇濃度80%，提取次數(shù)3次，提取時(shí)間1.0 h，提取溫度80 ℃，提取溶劑pH為9。由表3方差分析結(jié)果可知，因素C作用顯著，其他因素作用不顯著，與極差分析結(jié)果相同。

2.4 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

依據(jù)“1.2.8”項(xiàng)下操作，按照“1.2.5”項(xiàng)下測(cè)定，結(jié)果測(cè)得小葉黑柴胡總皂苷的得率分別為2.75%、2.81%和2.78%，平均為2.78%，表明該工藝穩(wěn)定可行。

3 小結(jié)與討論

由于影響柴胡皂苷類成分提取的因素較多，本試驗(yàn)采取單因素試驗(yàn)與正交試驗(yàn)相結(jié)合考察了提取溫度、提取溶劑pH、乙醇濃度、料液比、提取次數(shù)和提取時(shí)間等因素對(duì)小葉黑柴胡總皂苷得率的影響，確定了小葉黑柴胡總皂苷的較優(yōu)提取工藝為料液比1∶10，乙醇濃度80%，提取次數(shù)3次，提取時(shí)間1.0 h，提取溫度80 ℃，提取溶劑pH為9。對(duì)該工藝條件進(jìn)行了驗(yàn)證試驗(yàn)，小葉黑柴胡總皂苷的得率為2.78%，表明該工藝穩(wěn)定可行，可為小葉黑柴胡的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供依據(jù)。分析正交試驗(yàn)中各因素對(duì)小葉黑柴胡總皂苷提取的影響可知，提取次數(shù)對(duì)其影響最大，其次單因素考察時(shí)發(fā)現(xiàn)提取溫度對(duì)其影響較大，與正交試驗(yàn)中隨提取時(shí)間增長(zhǎng)小葉黑柴胡總皂苷的得率反而下降的結(jié)果相吻合，可能與柴胡皂苷類成分在高溫條件下不穩(wěn)定有關(guān)，因此在生產(chǎn)過(guò)程中需引起重視。與已知其他研究結(jié)果[9-11]相比較，青海產(chǎn)小葉黑柴胡中總皂苷的含量明顯高于其他地區(qū)柴胡中總皂苷的含量，可能與青藏高原特殊的生態(tài)環(huán)境有關(guān)，高原生態(tài)條件苛刻，藥用植物生長(zhǎng)緩慢，相關(guān)次生代謝產(chǎn)物含量較高。前期研究也表明小葉黑柴胡與柴胡及狹葉柴胡中皂苷類成分相似，同時(shí)小葉黑柴胡為西北地區(qū)商品柴胡的主流品種之一，資源量豐富，具有較大的開(kāi)發(fā)價(jià)值，可深入研究。

參考文獻(xiàn)：

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典（2010版），Ⅰ部[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010.263.

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[11] 李媛媛，秦雪梅，王玉慶，等.柱前衍生化法評(píng)價(jià)不同品種和產(chǎn)地柴胡藥材和飲片的質(zhì)量[J].中國(guó)中藥雜志，2008，33（3）：237-240.

1.2.8 驗(yàn)證試驗(yàn) 分別精密稱取3份小葉黑柴胡藥材，每份20.0 g，依據(jù)單因素試驗(yàn)與正交試驗(yàn)結(jié)果優(yōu)選的工藝條件提取小葉黑柴胡總皂苷，測(cè)定并計(jì)算其含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 最大吸收波長(zhǎng)的確定

依據(jù)“1.2.3”操作，結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)品和供試品溶液顯色后均在612 nm處有較大吸收，因此選擇612 nm為測(cè)定波長(zhǎng)。

2.2 線性關(guān)系的考察

依據(jù)“1.2.4”測(cè)定結(jié)果，以吸光度值A(chǔ)為縱坐標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)品溶液濃度C為橫坐標(biāo)計(jì)算，求得回歸方程：A=2.195 C+0.129，r=0.999 2，線性范圍為0.096～0.768 mg/mL。

2.3 小葉黑柴胡總皂苷含量測(cè)定結(jié)果

依據(jù)“1.2.5”操作，結(jié)果測(cè)得小葉黑柴胡藥材中總皂苷的含量為2.81%。

2.4 單因素試驗(yàn)結(jié)果與分析

2.4.1 提取溫度對(duì)小葉黑柴胡總皂苷得率的影響 按照“1.2.6”項(xiàng)下提取溫度對(duì)柴胡總皂苷提取的影響試驗(yàn)操作并測(cè)定，70、80、90 ℃ 3個(gè)提取溫度條件下，小葉黑柴胡總皂苷的得率分別為1.70%、2.24%和1.56%，由此可見(jiàn)提取溫度對(duì)小葉黑柴胡總皂苷的得率影響較大，其中80 ℃為較優(yōu)提取溫度。

2.4.2 提取溶劑pH對(duì)小葉黑柴胡總皂苷得率的影響 試驗(yàn)結(jié)果表明，在提取溶劑pH分別為8、9、10 的條件下，小葉黑柴胡總皂苷的得率分別為2.44%、2.48%和2.39%，由此可見(jiàn)提取溶劑pH也是影響小葉黑柴胡總皂苷提取效果的因素之一，其中提取溶劑pH為9時(shí)提取效果較好。

2.3 正交試驗(yàn)結(jié)果與分析

按照“1.2.7”正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，以柴胡總皂苷的得率為考察指標(biāo)，優(yōu)選小葉黑柴胡總皂苷提取工藝條件，其結(jié)果見(jiàn)表2，方差分析結(jié)果見(jiàn)表3。

由表2極差分析結(jié)果可知，各因素的主次順序?yàn)镃、B、D、A，表明提取次數(shù)對(duì)小葉黑柴胡總皂苷提取效果的影響最大。小葉黑柴胡總皂苷提取的較優(yōu)工藝條件組合為A3B3C3D1，結(jié)合單因素試驗(yàn)結(jié)果，得小葉黑柴胡總皂苷較優(yōu)提取工藝為：料液比1∶10，乙醇濃度80%，提取次數(shù)3次，提取時(shí)間1.0 h，提取溫度80 ℃，提取溶劑pH為9。由表3方差分析結(jié)果可知，因素C作用顯著，其他因素作用不顯著，與極差分析結(jié)果相同。

2.4 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

依據(jù)“1.2.8”項(xiàng)下操作，按照“1.2.5”項(xiàng)下測(cè)定，結(jié)果測(cè)得小葉黑柴胡總皂苷的得率分別為2.75%、2.81%和2.78%，平均為2.78%，表明該工藝穩(wěn)定可行。

3 小結(jié)與討論

由于影響柴胡皂苷類成分提取的因素較多，本試驗(yàn)采取單因素試驗(yàn)與正交試驗(yàn)相結(jié)合考察了提取溫度、提取溶劑pH、乙醇濃度、料液比、提取次數(shù)和提取時(shí)間等因素對(duì)小葉黑柴胡總皂苷得率的影響，確定了小葉黑柴胡總皂苷的較優(yōu)提取工藝為料液比1∶10，乙醇濃度80%，提取次數(shù)3次，提取時(shí)間1.0 h，提取溫度80 ℃，提取溶劑pH為9。對(duì)該工藝條件進(jìn)行了驗(yàn)證試驗(yàn)，小葉黑柴胡總皂苷的得率為2.78%，表明該工藝穩(wěn)定可行，可為小葉黑柴胡的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供依據(jù)。分析正交試驗(yàn)中各因素對(duì)小葉黑柴胡總皂苷提取的影響可知，提取次數(shù)對(duì)其影響最大，其次單因素考察時(shí)發(fā)現(xiàn)提取溫度對(duì)其影響較大，與正交試驗(yàn)中隨提取時(shí)間增長(zhǎng)小葉黑柴胡總皂苷的得率反而下降的結(jié)果相吻合，可能與柴胡皂苷類成分在高溫條件下不穩(wěn)定有關(guān)，因此在生產(chǎn)過(guò)程中需引起重視。與已知其他研究結(jié)果[9-11]相比較，青海產(chǎn)小葉黑柴胡中總皂苷的含量明顯高于其他地區(qū)柴胡中總皂苷的含量，可能與青藏高原特殊的生態(tài)環(huán)境有關(guān)，高原生態(tài)條件苛刻，藥用植物生長(zhǎng)緩慢，相關(guān)次生代謝產(chǎn)物含量較高。前期研究也表明小葉黑柴胡與柴胡及狹葉柴胡中皂苷類成分相似，同時(shí)小葉黑柴胡為西北地區(qū)商品柴胡的主流品種之一，資源量豐富，具有較大的開(kāi)發(fā)價(jià)值，可深入研究。

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[9] 王 鵬，賈凌云，孫啟時(shí)，等.不同產(chǎn)地柴胡中柴胡皂苷的含量測(cè)定[J].沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2004，21（3）：193-195.

[10] 王 鵬，王玉生，劉 斌.不同產(chǎn)地柴胡中總皂苷及柴胡皂苷a含量測(cè)定[J].中國(guó)藥物與臨床，2008，8（3）：228-229.

[11] 李媛媛，秦雪梅，王玉慶，等.柱前衍生化法評(píng)價(jià)不同品種和產(chǎn)地柴胡藥材和飲片的質(zhì)量[J].中國(guó)中藥雜志，2008，33（3）：237-240.

1.2.8 驗(yàn)證試驗(yàn) 分別精密稱取3份小葉黑柴胡藥材，每份20.0 g，依據(jù)單因素試驗(yàn)與正交試驗(yàn)結(jié)果優(yōu)選的工藝條件提取小葉黑柴胡總皂苷，測(cè)定并計(jì)算其含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 最大吸收波長(zhǎng)的確定

依據(jù)“1.2.3”操作，結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)品和供試品溶液顯色后均在612 nm處有較大吸收，因此選擇612 nm為測(cè)定波長(zhǎng)。

2.2 線性關(guān)系的考察

依據(jù)“1.2.4”測(cè)定結(jié)果，以吸光度值A(chǔ)為縱坐標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)品溶液濃度C為橫坐標(biāo)計(jì)算，求得回歸方程：A=2.195 C+0.129，r=0.999 2，線性范圍為0.096～0.768 mg/mL。

2.3 小葉黑柴胡總皂苷含量測(cè)定結(jié)果

依據(jù)“1.2.5”操作，結(jié)果測(cè)得小葉黑柴胡藥材中總皂苷的含量為2.81%。

2.4 單因素試驗(yàn)結(jié)果與分析

2.4.1 提取溫度對(duì)小葉黑柴胡總皂苷得率的影響 按照“1.2.6”項(xiàng)下提取溫度對(duì)柴胡總皂苷提取的影響試驗(yàn)操作并測(cè)定，70、80、90 ℃ 3個(gè)提取溫度條件下，小葉黑柴胡總皂苷的得率分別為1.70%、2.24%和1.56%，由此可見(jiàn)提取溫度對(duì)小葉黑柴胡總皂苷的得率影響較大，其中80 ℃為較優(yōu)提取溫度。

2.4.2 提取溶劑pH對(duì)小葉黑柴胡總皂苷得率的影響 試驗(yàn)結(jié)果表明，在提取溶劑pH分別為8、9、10 的條件下，小葉黑柴胡總皂苷的得率分別為2.44%、2.48%和2.39%，由此可見(jiàn)提取溶劑pH也是影響小葉黑柴胡總皂苷提取效果的因素之一，其中提取溶劑pH為9時(shí)提取效果較好。

2.3 正交試驗(yàn)結(jié)果與分析

按照“1.2.7”正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，以柴胡總皂苷的得率為考察指標(biāo)，優(yōu)選小葉黑柴胡總皂苷提取工藝條件，其結(jié)果見(jiàn)表2，方差分析結(jié)果見(jiàn)表3。

由表2極差分析結(jié)果可知，各因素的主次順序?yàn)镃、B、D、A，表明提取次數(shù)對(duì)小葉黑柴胡總皂苷提取效果的影響最大。小葉黑柴胡總皂苷提取的較優(yōu)工藝條件組合為A3B3C3D1，結(jié)合單因素試驗(yàn)結(jié)果，得小葉黑柴胡總皂苷較優(yōu)提取工藝為：料液比1∶10，乙醇濃度80%，提取次數(shù)3次，提取時(shí)間1.0 h，提取溫度80 ℃，提取溶劑pH為9。由表3方差分析結(jié)果可知，因素C作用顯著，其他因素作用不顯著，與極差分析結(jié)果相同。

2.4 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

依據(jù)“1.2.8”項(xiàng)下操作，按照“1.2.5”項(xiàng)下測(cè)定，結(jié)果測(cè)得小葉黑柴胡總皂苷的得率分別為2.75%、2.81%和2.78%，平均為2.78%，表明該工藝穩(wěn)定可行。

3 小結(jié)與討論

由于影響柴胡皂苷類成分提取的因素較多，本試驗(yàn)采取單因素試驗(yàn)與正交試驗(yàn)相結(jié)合考察了提取溫度、提取溶劑pH、乙醇濃度、料液比、提取次數(shù)和提取時(shí)間等因素對(duì)小葉黑柴胡總皂苷得率的影響，確定了小葉黑柴胡總皂苷的較優(yōu)提取工藝為料液比1∶10，乙醇濃度80%，提取次數(shù)3次，提取時(shí)間1.0 h，提取溫度80 ℃，提取溶劑pH為9。對(duì)該工藝條件進(jìn)行了驗(yàn)證試驗(yàn)，小葉黑柴胡總皂苷的得率為2.78%，表明該工藝穩(wěn)定可行，可為小葉黑柴胡的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供依據(jù)。分析正交試驗(yàn)中各因素對(duì)小葉黑柴胡總皂苷提取的影響可知，提取次數(shù)對(duì)其影響最大，其次單因素考察時(shí)發(fā)現(xiàn)提取溫度對(duì)其影響較大，與正交試驗(yàn)中隨提取時(shí)間增長(zhǎng)小葉黑柴胡總皂苷的得率反而下降的結(jié)果相吻合，可能與柴胡皂苷類成分在高溫條件下不穩(wěn)定有關(guān)，因此在生產(chǎn)過(guò)程中需引起重視。與已知其他研究結(jié)果[9-11]相比較，青海產(chǎn)小葉黑柴胡中總皂苷的含量明顯高于其他地區(qū)柴胡中總皂苷的含量，可能與青藏高原特殊的生態(tài)環(huán)境有關(guān)，高原生態(tài)條件苛刻，藥用植物生長(zhǎng)緩慢，相關(guān)次生代謝產(chǎn)物含量較高。前期研究也表明小葉黑柴胡與柴胡及狹葉柴胡中皂苷類成分相似，同時(shí)小葉黑柴胡為西北地區(qū)商品柴胡的主流品種之一，資源量豐富，具有較大的開(kāi)發(fā)價(jià)值，可深入研究。

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