魏昌玲

野菊花提取物耐缺氧能力實(shí)驗(yàn)研究

魏昌玲

野菊花；耐缺氧；心肌缺氧；小鼠

野菊花為雙子葉植物，在我國(guó)大部分地區(qū)廣泛分布，主要化學(xué)成分有萜類、揮發(fā)油和野菊花黃酮類[1]。具有疏風(fēng)、清熱、明目、解毒的功效，主要治療頭痛、眩暈、目赤、心胸?zé)?、療瘡、腫毒等癥[2]。近代研究表明，野菊花有抗病原微生物、保護(hù)心肌、降血壓、抗氧化等藥理作用[3]。為進(jìn)一步了解野菊花的藥理作用，本文對(duì)野菊花的耐缺氧能力進(jìn)行了初步研究。

1 材料與試劑

1.1 動(dòng)物 昆明種小鼠，雌雄各半，體重18～22 g，由泰邦科技生物有限公司提供，動(dòng)物合格證號(hào)：20030011。

1.2 藥品 野菊花由濟(jì)寧邦爾中藥飲品有限公司（批號(hào)：20130321）；鹽酸異丙腎上腺素（iso）由上海禾豐制藥有限公司提供（批號(hào)為：5E20010）。

1.3 儀器 動(dòng)物耐缺氧與耗氧量動(dòng)態(tài)變化同步測(cè)定裝置、電子天平、秒表。

2 方法

2.1 野菊花提取物制備 稱取野菊花300 g加適量水浸泡6 h，煎煮40 min，過(guò)濾，去濾渣，再次加適量水，煎煮40 min過(guò)濾，合并兩次濾液濃縮至折合生藥1.0 g/ml，4 ℃低溫保存?zhèn)溆谩?/p>

2.2 耗氧量的測(cè)定 將受試小鼠放入耗氧量測(cè)定裝置內(nèi)，調(diào)整液面高度至定量管0刻度，關(guān)閉通氣管，使裝置密閉，立刻記錄實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)間，每隔5 min記錄一次定量?jī)?nèi)液面上升高度，作為小鼠的累積耗氧量，連續(xù)觀察30 min，并記錄從裝置密閉至小鼠呼吸停止的時(shí)間為小鼠的缺氧存活時(shí)間[4]。

2.3 常壓耐缺氧實(shí)驗(yàn)

2.3.1 動(dòng)物分組及給藥 將小鼠禁食16 h后按體重隨機(jī)分為四組，分別為對(duì)照組給予0.9%氯化鈉注射液（30 ml/kg），野菊花提取液小劑量組（5.0 g/kg）、中劑量組（12.5 g/kg）、大劑量組（25.0 g/kg），每組10只，雌雄各半。各藥物組灌胃給藥，容量為0.2 ml/10g，每天給藥1次，連續(xù)3 d[6]。

2.3.2 方法 最后一次灌胃40 min后，照上述方法測(cè)定耗氧量。記錄開(kāi)始時(shí)間，密切觀察小鼠的反應(yīng)。并記錄5、10、15、20、30 min時(shí)液面上升的高度，作為小鼠的累計(jì)耗氧量；小鼠死亡時(shí)液面上升的高度即為存活期總耗氧量；記錄小鼠從裝置密閉至呼吸停止的時(shí)間，即為小鼠缺氧存活時(shí)間；用不同時(shí)間的累計(jì)耗氧量減掉前一次的累計(jì)耗氧量，即為各時(shí)間段的耗氧量。

2.4 減壓耐缺氧實(shí)驗(yàn) 照上述方法分組與給藥，最后一次給藥40 min后，四組小鼠均腹腔注射鹽酸異丙腎上腺素（ISO）20 ml/kg，10 min后，放進(jìn)缺氧裝置中，記錄5、10、15、20、30 min時(shí)液面上升高度和小鼠死亡時(shí)間，以及死亡時(shí)液面上升高度[7]。

2.5 小鼠急性腦缺血及失血性休克實(shí)驗(yàn) 照上述方法分組與給藥，最后一次灌胃40 min后，在小鼠耳后部迅速斷頭，造成腦部急性缺血，在斷頭后的同時(shí)，觀察小鼠張口呼吸次數(shù)，并記下呼吸停止時(shí)間。小鼠斷頭后，同時(shí)迅速剖開(kāi)小鼠的胸部，暴露心臟，以心室停跳為指標(biāo)，觀察小鼠心臟搏動(dòng)時(shí)間。

2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 野菊花提取物對(duì)正常小鼠存活時(shí)間及耗氧量的影響 野菊花提取物中、大劑量組均可延長(zhǎng)小鼠存活時(shí)間，降低前20 min的累計(jì)耗氧量；大劑量組野菊花水提液明顯降低前10 min的耗氧量；并且耐缺氧程度與野菊花提取物有劑量成正相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)圖1～4。

3.2 對(duì)異丙腎上腺素致心肌耗氧增加小鼠耐缺氧能力的影響 對(duì)異丙腎上腺素致心肌耗氧增加的小鼠，中、大劑量組野菊花提取物能明顯增加小鼠的耐缺氧能力，降低前5 min的耗氧量，提高小鼠的存活時(shí)間，并且小鼠的耐缺氧程度與野菊花水提液劑量成正相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)圖5～7。

3.3 對(duì)腦缺血小鼠耐缺氧能力的影響 對(duì)腦缺氧小鼠，野菊花中、大劑量組與對(duì)照組比較，能明顯增加小鼠的呼吸次數(shù)、呼吸時(shí)間、心搏時(shí)間，并且耐缺氧程度與野菊花提取物濃度成正相關(guān)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

圖1 野菊花對(duì)四組小鼠死亡時(shí)累計(jì)耗氧量的影響

圖2 野菊花對(duì)四組小鼠死亡時(shí)累計(jì)耗氧量與存活時(shí)間的影響

圖3 野菊花對(duì)四組小鼠各時(shí)間段耗氧量的影響

圖4 野菊花對(duì)ISO致心肌耗氧量增加四組小鼠的累計(jì)耗氧量的影響

圖5 野菊花對(duì)ISO致心肌耗氧量增加四組小鼠死亡累計(jì)耗氧量、存活時(shí)間的影響

圖6 野菊花對(duì)ISO致心肌耗氧量增加四組小鼠各時(shí)間段耗氧量的影響

圖7 野菊花對(duì)急性腦缺血性缺氧四組小鼠的影響

4 討論

缺氧對(duì)機(jī)體是一種緊張性刺激，影響機(jī)體各種代謝，特別是影響機(jī)體的氧化供能，最終會(huì)導(dǎo)致心、腦等主要器官缺氧供能不足而死亡。由于吸入氣體中氧分壓低而引起缺氧，從而使動(dòng)脈血氧分壓下降，以致于動(dòng)脈血氧含量減少，最終導(dǎo)致機(jī)體死亡[5]。

對(duì)于正常小鼠，耗氧量測(cè)定結(jié)果表明，野菊花水提物有增強(qiáng)耐缺氧作用可能主要與減少單位時(shí)間內(nèi)的耗氧量有關(guān)，但野菊花水提物提高小鼠的耐缺氧能力具有劑量依賴性。對(duì)于異丙腎上腺 素致心肌耗氧量增加小鼠的耗氧量測(cè)定結(jié)果表明，在心肌耗氧情況下，更高濃度的野菊花水提物的耐缺氧能力更加明顯。灌胃12.5 g/kg、25.0 g/kg劑量可顯降低耗氧量并延長(zhǎng)小鼠存活時(shí)間。對(duì)于腦缺氧的小鼠，灌胃12.5 g/kg、25.0 g/kg的中、大劑量組能明顯增加小鼠的呼吸時(shí)間、呼吸次數(shù)，延長(zhǎng)心搏時(shí)間。

本實(shí)驗(yàn)證明，野菊花提取物有增強(qiáng)小鼠耐缺氧能力的作用，為野菊花藥物資源的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。不過(guò)野菊花增強(qiáng)耐缺氧能力的作用機(jī)制有待于進(jìn)一步研究。

[1] 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥典委員會(huì)編.中華人民共和國(guó)藥典[M].北京:化學(xué)上業(yè)出版社,2010:120-120.

[2] 吳釘紅,楊立偉,蘇薇薇.野菊花化學(xué)成分及藥理研究進(jìn)展[J].中藥材,2009,27(2):142-144.

[3] 陳傳千,沈艷平,屈躍丹,等.野菊花提取物藥理作用的研究進(jìn)展[J].吉林醫(yī)藥學(xué)院院報(bào),2010,3(31):175-176.

[4] 孔燕芳,周艷梅,閆艷倉(cāng),等.正交試驗(yàn)優(yōu)選野菊花中總黃酮的提取工藝[J].中國(guó)藥房,2013,24(43):4068-4069.

[5] 馬艷,汪宇,康萬(wàn)軍,等.蛹蟲(chóng)草口服液對(duì)小鼠耐缺氧和抗疲勞作用[J].中國(guó)藥師,2012,12(10):1376-1377.

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