趙 瑛，劉 琳，黃坤杰，李 蔚，王亞賢，李 倫

(1.哈爾濱商業(yè)大學(xué)藥學(xué)院，哈爾濱150076;2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，哈爾濱150088)

傳統(tǒng)中藥與現(xiàn)代中藥提取的指導(dǎo)思想不同.這使得許多傳統(tǒng)中藥在制成現(xiàn)代中藥制劑過(guò)程中制備工藝發(fā)生變化[1].工藝變化必定導(dǎo)致有效成分含量和配比的變化，進(jìn)而影響方劑的功能主治.本文以芎麻湯為模型方劑，分別按傳統(tǒng)制備方法和“相似相溶”理論指導(dǎo)下的現(xiàn)代制備方法制備芎麻湯，以其中阿魏酸和天麻素含量及配比變化為指標(biāo)，研究不同制備工藝對(duì)方劑有效成分含量和配比的影響，以期為芎麻湯的新藥創(chuàng)制及現(xiàn)代復(fù)方中藥的質(zhì)量控制、主效應(yīng)的確定及配伍規(guī)律研究提供科學(xué)依據(jù).

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器

高效液相色譜儀:Alletch Plus Chromatography HPLC;泵:Alletch 426 Plus Pump;檢測(cè)器:LINEAR UV IS 201;工作站:N2010;微量進(jìn)樣器:7725i.

1.2 實(shí)驗(yàn)藥品及試劑

川芎購(gòu)自哈爾濱世一堂藥材公司，經(jīng)哈爾濱商業(yè)大學(xué)藥學(xué)院楊玉山老師鑒定為傘形科植物川芎Ligusticum chuanxiong Hort.的干燥根莖;天麻購(gòu)自哈爾濱三棵樹(shù)中藥材市場(chǎng)，經(jīng)哈爾濱商業(yè)大學(xué)藥學(xué)院楊玉山鑒定為蘭科植物天麻Gastrodia elata BI.的干燥塊莖.阿魏酸對(duì)照品(購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢驗(yàn)所，0773－200910);天麻素對(duì)照品(購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所，807－200904);色譜純:HPLC用甲醇、乙腈(色譜純，美國(guó)Dikma公司).

1.3 芎麻湯水煎液的制備

分別準(zhǔn)確稱取川芎藥材20 g，天麻5 g.粉碎為粗粉.分別加入12倍量的蒸餾水浸泡45 min分別置于圓底燒瓶中，水浴加熱(溫度＜80℃)，至微沸(5～7個(gè)氣泡/min).保持微沸狀態(tài)煎煮40 min，4層紗布過(guò)濾，收集濾液，濾渣再按上述方法煎煮30 min.4層紗布過(guò)濾，收集濾液.合并濾液并濃縮至每毫升藥液相當(dāng)于原藥材0.25 g，備用.

1.4 芎麻湯乙醇回流提取液的制備

1.4.1 川芎乙醇回流提取液的制備

準(zhǔn)確稱取川芎藥材20 g，粉碎為粗粉，加入12倍量90%的乙醇，于低于80℃的溫度條件下連續(xù)回流提取2次，每次提取3 h.8層紗布過(guò)濾，收集并合并濾液，減壓回收乙醇進(jìn)行濃縮，濃縮至每毫升藥液相當(dāng)于原藥材 0.25 g，備用[2].

1.4.2 天麻乙醇回流提取液的制備

準(zhǔn)確稱取天麻藥材5 g，粉碎為粗粉，加入8倍量10%的乙醇，于低于80℃的溫度條件下回流提取3次，每次提取3 h.8層紗布過(guò)濾，收集并合并濾液，減壓回收乙醇進(jìn)行濃縮，濃縮至每毫升藥液相當(dāng)于原藥材 0.25 g，置于冰箱中備用[3].

1.5 溶液的配制

阿魏酸對(duì)照品溶液:精密稱定阿魏酸適量，分別置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋定容，搖勻，即得阿魏酸質(zhì)量濃度為2.0 mg/mL的儲(chǔ)備液.分別精密量取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液適量，置于同一個(gè)容量瓶中用甲醇稀釋成質(zhì)量濃度分別為 0.025、0.05、0.10、0.20、0.40 mg/mL 的阿魏酸對(duì)照品溶液，置于冰箱(－20℃)保存.

天麻素對(duì)照品溶液:精密稱定天麻素適量，分別置10 mL量瓶中，加水溶解并稀釋定容，搖勻，即得天麻素質(zhì)量濃度為2.0 mg/mL的儲(chǔ)備液.分別精密量取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液適量，置于同一個(gè)容量瓶中用水稀釋成質(zhì)量濃度分別為 0.10、0.15、0.20、0.25、0.30 mg/mL的天麻素對(duì)照品溶液，置于冰箱(－20℃)保存.

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜分析條件

色譜柱:Symmetry C18柱(4.6 mm ×150 mm，5 μm);阿魏酸流動(dòng)相:甲醇－1%冰醋酸水溶液(30∶70，V/V);流速:1 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng):310 nm.天麻素流動(dòng)相:乙腈 －0.05%磷酸水溶液(1∶99，V/V);流速:1 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng):220 nm.柱溫:室溫.

2.2 系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)

分別取上述制備好的阿魏酸對(duì)照品溶液、川芎供試品溶液、天麻素對(duì)照品溶液和天麻供試品各20 μL，注入高效液相色譜儀測(cè)試.阿魏酸的保留時(shí)間為 10.8 min.天麻素的保留時(shí)間為 3.073 min，如圖1、2所示.理論板數(shù)以阿魏酸計(jì)不低于5 000，相鄰未知色譜峰與阿魏酸色譜峰的分離度大于1.5.

圖1 阿魏酸對(duì)照品及川芎樣品色譜圖

圖2 阿魏酸對(duì)照品及川芎樣品色譜圖

2.4 線性關(guān)系的考察

分別吸取上述對(duì)照品溶液20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測(cè)定峰面積.以峰面積值(Y)對(duì)質(zhì)量濃度(X)進(jìn)行線性回歸，得阿魏酸回歸方程為:Y=70 380 667.90X+4 431 193.38，R=0.999 9.天麻素回歸方程為:Y=61 234 880X+12 202 899.20，R=0.999 9.表明阿魏酸進(jìn)樣質(zhì)量濃度在0.025～0.4 mg/mL范圍內(nèi)，天麻素進(jìn)樣質(zhì)量濃度在0.10～0.30 mg/mL范圍內(nèi)，質(zhì)量濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系.

2.6 精密度實(shí)驗(yàn)

取同一對(duì)照品溶液20 μL，按色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣5次，結(jié)果阿魏酸和天麻素的RSD值分別為0.54%和 0.47%.

2.7 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取同一對(duì)照品溶液，于12 h內(nèi)每間隔2 h測(cè)定一次，按色譜條件，分別進(jìn)樣20 μL.測(cè)得阿魏酸和天麻素的RSD值分別為2.33%和1.89%，對(duì)照品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定.

2.8 重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)

取同一批樣品5份，按色譜條件，分別各進(jìn)樣20 μL，測(cè)得阿魏酸和天麻素的RSD值分別為0.56%和0.62%.

2.9 回收率實(shí)驗(yàn)

取已測(cè)得質(zhì)量濃度的樣品溶液5份，分別與對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液等量混合，依上述方法測(cè)定阿魏酸和天麻素的平均回收率分別為99.87%和100.13%，RSD值分別為0.89%和0.91%.

2.10 質(zhì)量濃度測(cè)定

芎麻湯是由川芎和天麻按4∶1的比例組成.本實(shí)驗(yàn)對(duì)芎麻湯中的川芎、天麻進(jìn)行單獨(dú)提取，分別取已制備川芎及天麻水煎液和乙醇回流提取液供試品溶液，按色譜條件，取樣20 μL，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，確定阿魏酸及天麻素的峰面積，分別平行測(cè)定3次.確定不同工藝芎麻湯中阿魏酸、天麻素的質(zhì)量濃度及其配比關(guān)系.研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不同工藝提取的芎麻湯中阿魏酸、天麻素質(zhì)量濃度發(fā)生了逆轉(zhuǎn)性變化.傳統(tǒng)水煎液中天麻素質(zhì)量濃度高于阿魏酸質(zhì)量濃度，而改用乙醇回流提取后阿魏酸質(zhì)量濃度高于天麻素質(zhì)量濃度.見(jiàn)表1.

表1 不同提取工藝對(duì)芎麻湯中阿魏酸、天麻素質(zhì)量濃度及其配比結(jié)果

3 討論

芎麻湯由川芎、天麻兩味藥組成.其中阿魏酸、天麻素為其主要活性成分.由于阿魏酸與天麻素屬于極性不同的兩類化合物，按照“相似相溶”原理，分別以90%和10%乙醇提取，阿魏酸和天麻素質(zhì)量濃度最高，這與芎麻湯的傳統(tǒng)水煎煮制法有較大差別[4].亦即其提取工藝發(fā)生了較大變化.這種情況普遍存在于傳統(tǒng)方劑制成現(xiàn)代中藥制劑的過(guò)程中[5].本文研究顯示，采用不同提取工藝提取芎麻湯，不僅其中主要有效成分質(zhì)量濃度發(fā)生了變化，且配比關(guān)系也發(fā)生了逆轉(zhuǎn)性變化.

根據(jù)方劑學(xué)理論，同一處方，隨組成藥物量的不同，其功效也將發(fā)生變化.而藥量的變化歸根到底是藥物所含活性成分的變化.中藥的化學(xué)成分是方劑發(fā)揮療效的根本，所以這種量和配比關(guān)系的變化，勢(shì)必導(dǎo)致方劑藥理作用的變化，甚至形成功能主治不同的新方劑.即可能造成方劑作用譜和/或主效應(yīng)已發(fā)生改變.因此筆者認(rèn)為，在現(xiàn)代中藥的研制過(guò)程中(包括經(jīng)方、時(shí)方、驗(yàn)方)，不僅要重視有效成分質(zhì)量濃度的變化，還應(yīng)關(guān)注各有效成分間的配比關(guān)系，并考慮到由此帶來(lái)的方劑主效應(yīng)可能發(fā)生的變化，不應(yīng)一概按原方討論組方原理，確定功能主治.同時(shí)醫(yī)藥法規(guī)對(duì)中藥固體制劑質(zhì)量控制要求除應(yīng)控制最終劑型中君藥主要成份含藥量外，也應(yīng)將君、臣等藥有效成分之間的比例關(guān)系列入考察范圍內(nèi).

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