★ 文萬江 何平清 何純斌 楊明 張明明

(1.江西濟(jì)民可信藥業(yè)有限公司 江西 宜春 336000；2.江西中醫(yī)藥大學(xué) 江西 南昌 330004)

三味檀香口服液是在《內(nèi)蒙古成藥標(biāo)準(zhǔn)》收載的“贊丹-3湯”基礎(chǔ)上改劑型而成[1]，處方由檀香、肉豆蔻和廣栆三味藥組成，功能主治為清熱、補(bǔ)心。用于清心熱、心悸、煩躁不安，適用于冠心病心絞痛，具有清熱、健心之功能，用于心悸，心熱，煩躁不安等癥[2]。廣棗具有行氣活血、養(yǎng)心安神之功效，是三味檀香散中的君藥，檀香具有行心溫中，開胃止痛，歸脾、胃、肺經(jīng)，具有調(diào)和藥性增加療效的作用，是復(fù)方中的使藥，他們的組合形成了“君-使對(duì)藥”，符合中藥復(fù)方的組方原理[3]，三味檀香口服液制備工藝以蒙醫(yī)藥理論為指導(dǎo)，應(yīng)用現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)和方法進(jìn)行劑型選擇和工藝設(shè)計(jì)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 高效液相色譜儀(安捷倫1260，VWD紫外檢測(cè)器)。

1.2 試藥 三味檀香口服液(江西濟(jì)民可信藥業(yè)有限公司)；肉豆蔻；檀香；廣棗；原兒茶酸對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)110809-200604)，甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 揮發(fā)油提取時(shí)間的考察 將肉豆蔻和檀香粗碎成粗粉，取按處方比例準(zhǔn)備肉豆蔻和檀香粗粉3份，加入4倍的水，加熱蒸餾，收集揮發(fā)油，藥渣備用，結(jié)果見表1。結(jié)果表明，3h已經(jīng)將藥材中大部分提出。

表1 不同時(shí)間對(duì)揮發(fā)油提取的影響 /mL

2.2 廣棗提取工藝優(yōu)化

2.2.1 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì) 以原兒茶酸為指標(biāo)，重點(diǎn)考察乙醇濃度，乙醇用量和回流的時(shí)間3個(gè)因素，每個(gè)因素選擇3個(gè)水平，采用L9(34)正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)表，以原兒茶酸轉(zhuǎn)移率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，優(yōu)化處方提取工藝，正交設(shè)計(jì)因素水平表見表2。

表2 正交設(shè)計(jì)因素水平表

2.2.2 樣品制備 取廣棗粗粉130g，按L9(34)正交設(shè)計(jì)表要求試驗(yàn)，測(cè)定提取液中原兒茶酸含量，計(jì)算原兒茶酸轉(zhuǎn)移率。正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果見表3、表4。

表3 正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果

表4 提取方差分析

F0.05(2,2)=19.000。

由結(jié)果可知，以原兒茶酸轉(zhuǎn)移率為考察指標(biāo)，采用極差直觀分析顯示影響因素大小為A>B>C；方差分析結(jié)果表明，A因素具有顯著影響，根據(jù)K值，因素B應(yīng)選水平2，考慮節(jié)能，因素C選水平1，最佳提取工藝為A2B2C1即提取乙醇濃度為70%，6倍量回流2次，每次2h。

2.2.3 提取工藝驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) 取同批藥材廣棗(粉碎成粗粉)3份，每份130按優(yōu)選的提取工藝進(jìn)行提取，測(cè)得結(jié)果見表5。結(jié)果表明該提取工藝穩(wěn)定可靠。

表5 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

2.3 藥渣的煎煮條件的選擇 取廣棗、肉豆蔻、檀香三種藥渣加水煎煮，考察不同時(shí)間點(diǎn)出膏率為指標(biāo)，結(jié)果見圖1。結(jié)果顯示8倍水煎煮2h，既節(jié)能又能將藥渣中的成分全部提取。

圖1 不同加水倍數(shù)對(duì)出膏率的影響

2.4 水提取液醇沉濃度的選擇 取煎煮液靜置6h，抽濾，濾液真空濃縮，濃縮液分為3份，用乙醇分別調(diào)整為50%，65%，75%進(jìn)行醇沉24 h，按照工藝制備口服液，留樣1個(gè)月，對(duì)澄明度進(jìn)行觀察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)醇沉濃度為50%，有沉淀。醇沉濃度為65%，75%的口服液經(jīng)放置仍澄清，從經(jīng)濟(jì)的角度考慮，以65%乙醇濃度為佳。

2.5 吐溫的種類的選擇 為了保證口服液的澄清度符合要求，實(shí)驗(yàn)通過對(duì)吐溫-20、吐溫-60、吐溫-80等非離子表面活性劑的篩選，確定吐溫-20與揮發(fā)油混溶加入口服液中的效果最佳，確定比列為揮發(fā)油與吐溫20以1∶6。

2.6 三味檀香口服液的制備 廣棗粗粉用70%乙醇回流提取兩次，濾過，藥渣備用，回收乙醇得藥液；檀香與肉豆蔻粗粉混合，用水蒸氣法回流提取揮發(fā)油，分出揮發(fā)油，密閉保存，藥渣備用；兩藥渣混合，水煮，濾過，合并濾液，靜置5～6h，取上清液，濃縮，放置室溫，醇沉，攪拌，靜置24h，濾過，濾液減壓回收乙醇，得水煮濃縮液；將廣棗醇提物藥液與水煮濃縮藥液合并，加蒸餾水至體積約為1 000mL，室溫用濾菌板抽濾，濾液加入山梨酸至濃度為0.2%，加入甜菊糖至濃度為0.3%，將所提揮發(fā)油與吐溫20以1∶6攪拌混勻，緩慢加入藥液中(70℃)，強(qiáng)烈攪拌，用蒸餾水定容至體積1 000mL，灌裝，滅菌，即得。

3 質(zhì)量研究

3.1 原兒茶酸含量測(cè)定[4]

3.1.1 色譜條件 C18色譜柱(4.6mm×250mm,5μm)；流動(dòng)相：甲醇-水(含2.5%醋酸)(10∶90)，流速為1mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為260nm；柱溫為30℃；進(jìn)樣量10μL。理論板數(shù)按原兒茶酸峰計(jì)算應(yīng)不低于2500，結(jié)果見圖2。

A.對(duì)照品；B.供試品溶液；1.原兒茶酸

3.1.2 對(duì)照品溶液的制備 對(duì)照品溶液的制備取原兒茶酸對(duì)照品適量，精密稱定，加流動(dòng)相溶解，制成每1mL含0.05mg的溶液，即得。

3.1.3 供試品溶液制備 準(zhǔn)確量取本品10mL，置蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，殘?jiān)恿鲃?dòng)相溶解并轉(zhuǎn)移至10mL量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，即得。

3.1.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 分別精密吸取原兒茶酸對(duì)照品貯備液適量(12.5mg加流動(dòng)相稀釋到50mL)加流動(dòng)相稀釋，分別制成0.025，0.05，0.075，0.100，0.125mg/mL的原兒茶酸溶液進(jìn)樣10μL，測(cè)定原兒茶酸的峰面積。以峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，濃度為橫坐標(biāo)(X)，建立回歸方程：Y=17525X+10.23(r=0.9998)。表明濃度在0.025～0.125mg/mL間與峰面積有良好的線性關(guān)系。

3.1.5 精密度試驗(yàn) 取對(duì)照品溶液一份連續(xù)進(jìn)樣6次，每次10μL，測(cè)定原兒茶酸峰面積，RSD為0.36%。

3.1.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一份供試品溶液分別在0,2，4,6,8,10，12 h各進(jìn)樣10μL，測(cè)定原兒茶酸的峰面積，RSD為0.33%，表明供試品溶液在10h內(nèi)穩(wěn)定。

3.1.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同1份樣品，按3.1.3項(xiàng)下供試品溶液的制備方法分別制備6份，測(cè)定原兒茶酸的含量，RSD=1.08%。

3.1.8 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量的三味檀香口服液樣品(批號(hào)：130601，含量：0.052mg/mL)5 mL，6份，每份加入原兒茶酸對(duì)照品(按原兒茶酸計(jì)為0.0512mg/mL)5 mL，樣品及對(duì)照品的加入量見表7，按3.1.3項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制備并測(cè)定。

表7 加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n=6)

4 討論

4.1 廣棗70%乙醇對(duì)廣棗總黃酮進(jìn)行了完全的提取，以原兒茶酸作為指標(biāo)，優(yōu)化了工藝，同時(shí)對(duì)肉豆蔻和檀香采用水蒸汽提取揮發(fā)油，確定了揮發(fā)油與吐溫-20的比例為1∶6，制備的三味檀香口服液澄明度符合要求，為口服液中存在大量的揮發(fā)油提供了思路。

4.2 建立了三味檀香口服液的原兒茶酸的含量測(cè)定方法，適合對(duì)三味檀香口服液的質(zhì)量控制，在色譜條件篩選中，加入2.5%的醋酸作為流動(dòng)相，原兒茶酸的色譜峰尖銳，對(duì)稱，無干擾。

[1]鄧麗嘉,顧維彰.蒙藥贊丹·古日班的方劑研究[J].內(nèi)蒙古中醫(yī)藥,1989(01):3-5.

[2]梁楊靜,蘭薇,桑柏,等.三味檀香散的藥理研究進(jìn)展[J].云南民族大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2010，19(2)：86-89.

[3]桑柏.“廣棗-檀香”君——使對(duì)藥的效應(yīng)物質(zhì)研究[D].西北大學(xué),2010.

[4]張志斌,吳佩穎,祁慶,等.HPLC測(cè)定復(fù)方四季青片中原兒茶酸、原兒茶醛的含量[J].中成藥2004,26(9):33-35.