何曉燕，喬淑芬，苗婷婷

(通化師范學院 生命科學學院，吉林 通化 134002)

HPLC法測定長白山牛皮杜鵑中綠原酸的含量*

何曉燕，喬淑芬，苗婷婷

(通化師范學院 生命科學學院，吉林 通化 134002)

采用色譜柱為Aglient ZORBAX SB-C18(250mm×4.6mm，5μm)，流動相為乙腈-0.4%磷酸溶液(15: 85)，檢測波長327nm，流速為1.0ml·min-1，柱溫為25℃的色譜條件，建立一種測定長白山牛皮杜鵑中綠原酸含量的HPLC方法．結(jié)果表明：綠原酸在0.513～10.26μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關系，平均回收率為98.9%．該測定方法，簡便快捷、結(jié)果準確、重現(xiàn)性好．

牛皮杜鵑；綠原酸；HPLC

牛皮杜鵑(RhododendronchrysanthumPall.)為杜鵑花科植物，又稱牛皮茶、高山茶等[1]．具有較高的觀賞價值，廣泛分布于長白山海拔1300～2600m的高山上，對高海拔有較強的適應性[2]．牛皮杜鵑主要含有黃酮類及單寧酸類化合物[3]，其中蘆丁具有抗炎、抗病毒、鎮(zhèn)痛、降低毛細血管通透性引起的出血癥等方面的作用．目前國內(nèi)外有關牛皮杜娟的化學成分研究報道很少．本文擬通過對長白山牛皮杜鵑進行化學成分的提取，測定其所含綠原酸的含量[4-6]，以探尋一種簡便、有效的HPLC測定方法，為今后進一步研究開發(fā)牛皮杜鵑的應用價值奠定基礎．

1 實驗材料、儀器與試藥

1.1 實驗材料

牛皮杜鵑葉，采自于長白山，經(jīng)通化師范學院生命科學學院周繇教授鑒定．干燥粉碎，備用．

1.2 儀器與試藥

Agilent1100型高效液相色譜儀(美國安捷倫儀器有限公司)；FA1104電子分析天平；KQ-500型超聲波清洗器(昆山市超聲波儀器有限公司)．綠原酸對照品購自于中國藥品生物制品檢定所(批號為110753-200413)，乙腈(色譜純)，磷酸(分析純)，娃哈哈純凈水，其它試劑均為分析純．

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：AgilentZORBAXSB-C18(250mm×4.6mm，5μm)；流動相為乙腈-0.4%磷酸溶液(15:85)；檢測波長為327nm；流速1.0ml·min-1；柱溫:25℃．

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取綠原酸對照品5.130mg，用甲醇溶解，制成濃度為0.513mg·ml-1的對照品溶液．

2.3 供試品溶液的制備

取牛皮杜鵑粉末1g，精密稱定，置于錐形瓶中，精密加入50ml的70%乙醇，稱定質(zhì)量，超聲提取30min后取出，放冷，再稱定質(zhì)量，用70%乙醇補足減失的質(zhì)量，搖勻，0.23μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液，備用．

2.4 線性范圍考察

精密吸取綠原酸對照品溶液1、5、10、15、20μl，依次進樣，記錄峰面積．以進樣量(μl)為橫坐標，以峰面積為縱坐標，得回歸方程為Y=700.86X+25.711(r=0.9995)，結(jié)果表明綠原酸在0.513～10.26μg范圍內(nèi)線性關系良好．

2.5 精密度試驗

精密吸取綠原酸對照品溶液10μl，連續(xù)進樣5次，記錄峰面積，計算得RSD值為1.06%，表明儀器精密度較好．

2.6 重現(xiàn)性試驗

取同一批牛皮杜鵑粉末約1g，按2.3項方法制備供試品溶液6份，分別進樣20μl，記錄峰面積．測得RSD值為1.32%，表明重現(xiàn)性較好．

2.7 穩(wěn)定性試驗

精密吸取同一供試品溶液，分別在0、2、4、8、12、24h進樣20μl，記錄峰面積，測得RSD值為2.36%．表明在24h內(nèi)供試品的穩(wěn)定性較好．

2.8 加樣回收試驗

取已知含量的牛皮杜鵑粉末約1g，共6份，于每份中加入綠原酸對照品溶液2ml，按2.3項方法制備供試品溶液，分別進樣20μl，記錄峰面積．計算綠原酸平均回收率為98.9%，表明回收良好．結(jié)果見表1．

表1 綠原酸加樣回收試驗(n=6)

2.9 樣品含量測定

精密吸取按2.3項方法制備的供試品溶液20μl，按上述色譜條件進行測定，計算得出綠原酸的含量為0.754mg·g-1．見圖1、圖2．

3 討論

綠原酸具有較強的生物活性，具有廣泛的抗菌作用，為臨床上祛風除濕、強筋壯骨的物質(zhì)基礎．本文首次建立了長白山牛皮杜鵑中綠原酸的HPLC含量測定方法，此法簡便快捷、結(jié)果準確、重現(xiàn)性好．此外，筆者也曾對長白山牛皮杜鵑的不同溶劑提取物的抗炎鎮(zhèn)痛活性進行了系統(tǒng)研究，結(jié)果表明此方面的活性較強．因此綠原酸作為其活性的物質(zhì)基礎，對其進行質(zhì)量控制是完全必要，這也為今后進一步系統(tǒng)研究牛皮杜鵑的化學成分奠定基礎．

圖1 綠原酸對照品的HPLC

圖2 牛皮杜鵑供試品的HPLC

[1]于秋艷,宗成文,趙金偉,等.長白山牛皮杜鵑組培苗與野生苗藥用成分含量分析[J].湖北農(nóng)業(yè)科學, 2010,49(11):2892-2894.

[2]欒志慧,邵殿坤,楊麗娟,等.不同海拔長白山牛皮杜鵑葉片適應性結(jié)構的對比分析[J].北方園藝,2013(19):80-83.

[3]于秋艷.牛皮杜鵑組培快繁技術及有效成分研究[D].延吉:延邊大學,2010.

[4]何小珍,郭玉,徐小娜,等.野菊不同部位綠原酸和3,5-二咖啡酰奎尼酸的含量測定[J].中國實驗方劑學雜志,2012,18(11):72-75.

[5]]劉起中,曹珊,李波.金銀花飲料中綠原酸HPLC法的測定[J].食品與藥品,2006,8(1):47- 49.

[6]胡彥武，張虹，孫仁爽，等.HPLC法測定金銀忍冬莖中綠原酸的含量[J].通化師范學院學報，2009，30(4): 56-57.

(責任編輯:陳衍峰)

Determination of Chlorogenic Acid inRhododendronchrysanthumPall. by HPLC

HE Xiao-yan, QIAO Shu-fen, MIAO Ting-ting

(CollegeofLifeSciences,TonghuaNormalUniversity,Tonghua,Jilin134002,China)

The chlorogenic acid inRhododendronchrysanthumPall.wasdeterminedwithHPLC.ThechlorogenicacidwasseparatedonAglientZORBAXSB-C18column(250mm×4.6mm,5μm),themobilephasewasacetonitrile-0.4%phosphoricacidsolution(15:85),andthedetectionwavelengthwas327nm,thevolumeflowwas1.0ml·min-1,thevolumetemperaturewas25℃.Theresultshowedthatthecalibrationcurvewaslinearintherangeof0.513～10.26μg.

RhododendronchrysanthumPall.;chlorogenicacid;HPLC

2013-10-15

何曉燕(1972-),女,吉林通化人,碩士,教授,生命科學學院院長．

吉林省教育廳"十二五"科學技術研究項目(吉教科合字[2012]第360號).

R286

A

1008-7974(2014)01-0009-02