趙亞娟 孫孟甜 楊振麗

HCVAb-IgG陽性與HCV-RNA載量的關(guān)系探討

趙亞娟 孫孟甜 楊振麗

目的 研究丙肝抗體IgG(HCVAb-IgG)陽性者其丙肝病毒核酸(HCV-RNA)載量的陽性率,并探討其與HCV-IgG的S/CO值之間的關(guān)系。方法 HCVAb-IgG采用ELISA法, HCV-RNA采用熒光定量PCR法。結(jié)果 統(tǒng)計248例HCVAb-IgG陽性者, HCV-RNA陽性150例, 陽性率60.5%；同時統(tǒng)計HCVAb-IgG 的S/CO值, 觀察其與HCV-RNA結(jié)果的相關(guān)性。結(jié)論 HCV-RNA陽性率與HCVAb-IgG的S/CO值一致, 但HCV-RNA含量與HCVAb-IgG S/CO值無顯著相關(guān)性(P＞0.05), 不能以S/CO值衡量HCV-RNA結(jié)果。

丙型肝炎病毒；丙型肝炎病毒抗體；丙型肝炎病毒核酸載量

丙型肝炎病毒(HCV)是急慢性丙型肝炎及非甲非乙型肝炎的主要病原體, 其極易引起該病慢性化, 少數(shù)患者易發(fā)展為肝硬化及肝癌［1］, 因此早期診斷和發(fā)現(xiàn)感染者很重要。目前丙型肝炎病毒抗體(HCVAb-IgG)及丙型肝炎病毒核酸(HCV-RNA)載量是診斷丙型肝炎的主要病原學指標, HCVAb-IgG間接反映HCV的感染和既往感染, HCV-RNA反映了患者血清中是否存在病毒血癥［2］。臨床上習慣檢測HCVAb-IgG作為有無HCV感染的初篩, 陽性者再進一步檢測病毒載量的多少以決定是否需抗病毒治療。在此作者回顧了2年來HCVAb-IgG陽性者所測HCV-RNA的陽性率及與HCVAb-IgG的S/CO值的關(guān)系, 總結(jié)報告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取248例2012年1月~2013年12月本院的所有PCR法HCV-RNA檢測數(shù)據(jù)和同期ELISA測HCVAb-IgG的數(shù)據(jù)做統(tǒng)計分析。其中男172例, 女76例。年齡2個月~84歲。

1. 2 試劑與方法

1. 2. 1 HCVAb-IgG檢測 使用北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司提供的試劑盒檢測, 用酶標儀雙波長測定各孔OD值,測得的結(jié)果OD值>4定為陽性。

1. 2. 2 HCV-RNA檢測 采用上?？迫A生物藥業(yè)股份有限公司提供的試劑盒及質(zhì)控品, 核酸提取及反應體系的配制嚴格按照說明書操作。結(jié)果判斷：測定結(jié)果<103IU/ml報告低于檢測下限；103~107IU/ml 的樣本按照測定結(jié)果直接報告。

1. 3 儀器 艾德康全自動酶免一體機, Roche LightCycler 1.5擴增儀。

1. 4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS11.0統(tǒng)計學軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標準差( x-±s)表示, 采用t檢驗；計數(shù)資料采用χ2檢驗。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2. 1 不同HCVAb-IgG的 S/CO值與HCV-RNA陽性率對應關(guān)系見表1。248例HCVAb-IgG陽性樣本中, HCV-RNA陽性150例, 陽性率占60.5%。這與文獻報道的60%~70%相一致［3］。隨著HCVAb-IgG S/CO的增大, HCV-RNA陽性率有增高的趨勢, 但不是如某些報道統(tǒng)計的在高S/CO值陽性率可達到100%［4］, 在高S/CO值, 仍有約32%的樣本HCVRNA結(jié)果為陰性。在RNA陰性組也有不少高于陽性組的S/ CO值。

表1 不同HCVAb-IgG(S/CO)值與HCV-RNA陽性率(n, %)

2. 2 不同HCVAb-IgG的 S/CO值與HCV-RNA載量比較,見表2。在低HCVAb-IgG S/CO段仍有高的HCV-RNA載量值, 在高S/CO段也有低的載量值, 即HCV-RNA載量不隨著HCVAb-IgG的S/CO值的增大而一定增高。故不能以S/ CO值衡量HCV-RNA結(jié)果的高低。這與陳作芬等［5］報道的HCV-RNA含量與HCVAb的S/CO值無顯著相關(guān)性一致。

表2 不同HCVAb-IgG(S/CO)值與HCV-RNA載量

3 討論

丙型肝炎是HCV經(jīng)血液傳播的一種病毒感染性疾病。HCV感染的病原學檢測是診斷和治療決策的唯一依據(jù)。ELISA法檢測HCVAb是目前我國判斷丙肝的常規(guī)方法,是HCV感染初篩的首選指標, 但HCVAb陽性只說明患者可能曾經(jīng)感染過HCV, 不能區(qū)別現(xiàn)癥感染或既往感染, 又因HCVAb產(chǎn)生后可長期存在, 對診斷和治療的評價意義不大。HCV-RNA的檢測是HCV存在的最直接、最敏感和最特異的指標, 可提示HCV是否存在及是否在體內(nèi)復制。在初篩HCVAb-IgG陽性后再檢測HCV-RNA更合理。實際工作中二者檢測不一致的原因既有檢驗方法的局限性, 也有疾病及不同個體的差異, 具體分述如下。

3. 1 影響HCVAb-IgG檢測的因素

3. 1. 1 HCVAb-IgG檢測采用ELISA法, 該法影響因素較多,如血清中的纖維蛋白原、加樣時間的長短、溫育時間、洗板的過程, 都是造成假陽性的原因。

3. 1. 2 HCVAb-IgG檢測的是IgG抗體, 自身免疫性疾病等患者標本含有某些干擾因素(類風濕因子、補體、高濃度的非特異性免疫球蛋白、交叉反應物質(zhì)等)時會導致假陽性結(jié)果。

3. 2 與PCR檢測相關(guān)的因素

3. 2. 1 HCVAb陽性提示機體可能有HCV感染史, 但當機體病毒被清除, 病情處于恢復期, HCV-RNA可能為陰性, 而抗體卻會持續(xù)存在較長時間。

3. 2. 2 HCVAb-IgG是檢測患者血清中針對HCV基因組編碼抗原某區(qū)域而產(chǎn)生的抗體, 而PCR是檢測患者血清中的HCV。第三代ELISA試劑能檢測出針對不同區(qū)域抗原產(chǎn)生的多種抗體, 而PCR法所用引物固定, HCV有顯著的異原性和多變性, 并非同一引物適用于所有HCV毒株, 故當病毒基因變異時本法檢測不出變異的RNA。

3. 2. 3 患者曾使用干擾素抗病毒治療, 干擾和抑制了HCVRNA的復制, 受染肝細胞釋放到外周血循環(huán)中的病毒載量減少, 而抗病毒治療不影響HCVAb的存在。對照了數(shù)例干擾素治療前后的HCV-RNA結(jié)果與HCVAb的S/CO值, 發(fā)現(xiàn)多數(shù)抗病毒治療后病毒載量降低但S/CO值變化不大。提示HCVAb-IgG的S/CO值無法對HCV的感染及治療情況進行動態(tài)檢測。

3. 2. 4 HCV在血液中復制的階段性。雖然肝內(nèi)HCV持續(xù)存在, 但病毒血癥可能出現(xiàn)波動。即血清HCV-RNA呈波浪狀起伏, 當HCV-RNA達波谷時, 檢測結(jié)果即為陰性。

3. 2. 5 PCR靈敏度雖然很高, 但有一定的檢測線性范圍。當病毒載量<103時, 因低于其閾值檢測不到, 故當部分患者血清中HCV量極少時, 雖處于復制期, 低于檢測閾值也會顯示陰性結(jié)果。

綜上所述, ELISA法檢測HCVAb-IgG在初步的丙肝診斷中因操作簡單成本低, 作為初篩的意義大, 其地位不可取代。熒光定量PCR能夠查明抗體陽性者體內(nèi)的HCV復制水平, 以便確定是否需要進行抗病毒治療, 或預測及評價抗病毒治療的效果, 兩種檢測的聯(lián)合在臨床上具有重要的使用價值及臨床意義, 是完善診斷、評價療效比較有益的方式。

［1］ 黃秀瓊, 吳英.110例丙肝患者HCV-RNA載量及抗-HCV與肝功能指標的相關(guān)性研究.國際檢驗醫(yī)學雜志, 2012, 33(15): 1809-1810.

［2］ 王茉莉, 姜濤, 潘煜, 等. HCV感染患者436例丙型肝炎病毒載量與抗-HCV及ALT異常的關(guān)系.中國老年學雜志, 2011, 31(5):770-772.

［3］ 孫軍紅, 張永樂, 王巧燕, 等.抗-HCV抗體檢測與熒光定量RT-PCR檢測在丙型肝炎診斷中的比較.中國衛(wèi)生檢驗雜志, 2009, 19(7):1562.

［4］ 羅娜.抗-HCV(OD/CO)值與HCV-RNA陽性率及載量深析.國際醫(yī)藥衛(wèi)生導報, 2012, 18(1):82-84.

［5］ 陳作芬, 曹永平.丙肝患者治療前后HCV-RNA與抗-HCV及丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶水平的分析.檢驗醫(yī)學與臨床, 2010, 7(12): 1175-1177.

2014-08-29］

467000 平頂山市平煤集團總醫(yī)院檢驗科