肖 雄，孔麗娜，吳銀寶，張文武，羅慶斌*

(1.華南農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，廣東 廣州 510642; 2.廣東溫氏食品集團(tuán)股份有限公司，廣東 新興 527439)

不同季節(jié)對(duì)鵝若干生理和免疫指標(biāo)的影響

肖 雄1，2，孔麗娜1△，吳銀寶1，張文武1，羅慶斌1*

(1.華南農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，廣東 廣州 510642; 2.廣東溫氏食品集團(tuán)股份有限公司，廣東 新興 527439)

為了探討不同溫度對(duì)烏鬃鵝若干生理和免疫指標(biāo)的影響，尋找準(zhǔn)確評(píng)定烏鬃鵝熱耐受性的候選生理和免疫性狀指標(biāo)，以30周齡健康清遠(yuǎn)烏鬃鵝母鵝200只為研究對(duì)象，分別在夏季(35 ℃)和冬季(20 ℃)，采集鵝只的血液樣品，非抗凝血用于測定T3、皮質(zhì)酮含量；抗凝血用于測定H %、L %和H/L值。結(jié)果表明：夏季烏鬃鵝血清中的皮質(zhì)酮含量顯著高于冬季(P<0.05) ，T3含量極顯著高于冬季(P<0.01)；與冬季相比，夏季烏鬃鵝的H%、H/L極顯著升高(P<0.01)，L %極顯著降低(P<0.01)。皮質(zhì)酮和H/L值可以作為評(píng)價(jià)鵝熱耐受性的重要性狀指標(biāo)。

鵝；不同季節(jié)；生理指標(biāo)；免疫指標(biāo)

清遠(yuǎn)烏鬃鵝屬于小型肉用鵝種,飼養(yǎng)歷史悠久[1]，具有優(yōu)異的遺傳特性，產(chǎn)品有很強(qiáng)的市場優(yōu)勢，但由于鵝羽毛細(xì)密、密度大，皮膚沒有汗腺，對(duì)熱應(yīng)激反應(yīng)尤為敏感。動(dòng)物在熱應(yīng)激時(shí)機(jī)體散熱受阻，呼吸活動(dòng)加強(qiáng)，免疫力下降,容易誘發(fā)某些傳染病,出現(xiàn)休克甚至死亡。隨著飼養(yǎng)方式由放養(yǎng)型向集約化高密度飼養(yǎng)的轉(zhuǎn)變，熱應(yīng)激給養(yǎng)鵝生產(chǎn)造成了巨大的損失[2]。高溫除了會(huì)引起動(dòng)物產(chǎn)生熱應(yīng)激外，還可以引發(fā)一系列非特異性全身反應(yīng)。血液生化指標(biāo)的變化是以機(jī)體組織細(xì)胞機(jī)能改變和新陳代謝變化為基礎(chǔ)的，熱應(yīng)激可導(dǎo)致動(dòng)物的血液生化指標(biāo)發(fā)生改變[3]，同時(shí)熱應(yīng)激會(huì)影響動(dòng)物的免疫功能，適當(dāng)?shù)臒釕?yīng)激會(huì)使動(dòng)物免疫功能加強(qiáng)并逐漸適應(yīng)新環(huán)境，但過度的熱應(yīng)激則會(huì)使動(dòng)物的免疫功能下降[4]。

生產(chǎn)上緩解熱應(yīng)激的方法主要集中在改善飼養(yǎng)環(huán)境方面，從遺傳育種角度出發(fā)通過改良鵝只本身的熱耐受性也是抗熱應(yīng)激的有效手段。目前在家禽熱耐受性的研究中，涉及的耐熱指標(biāo)有溫度指標(biāo)、熱存活指標(biāo)、代謝率指標(biāo)、血液生化和免疫指標(biāo)、熱應(yīng)激蛋白(heat stress proteins，HSP)等，目前有關(guān)家禽的這方面研究主要集中在雞上，對(duì)鵝的研究幾乎是空白，并且在準(zhǔn)確評(píng)定熱耐受性的生物標(biāo)記方面還存在意見分歧，所以研究不同溫度條件 對(duì)鵝的生理和免疫指標(biāo)的影響對(duì)探討家禽熱耐受性有著重要的作用。本研究分別在夏季(35 ℃)和冬季(20 ℃)測定了烏鬃鵝純系群體的皮質(zhì)酮、T3和H/L指標(biāo)，通過比較不同溫度下上述3個(gè)指標(biāo)的變化，旨在直觀地了解高溫對(duì)鵝生理和免疫指標(biāo)的影響，為水禽熱應(yīng)激的防控提供一定的參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

清遠(yuǎn)烏鬃鵝母鵝200只由陽江智特奇鵝業(yè)有限公司提供，飼養(yǎng)模式為磚混結(jié)構(gòu)鵝舍和水陸運(yùn)動(dòng)場，按照正常飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行飼養(yǎng)管理。

1.2 血樣采集

在夏季(2009年9月20日上午10∶00整)，室外環(huán)境溫度為35 ℃時(shí)，對(duì)種鵝(30周齡)進(jìn)行翅下靜脈采血，并記錄采樣種鵝的腳號(hào)。同年在冬季(2009年11月15日上午10∶00整)，室外溫度20 ℃時(shí)，利用腳號(hào)記錄對(duì)同一只種鵝(38周齡)進(jìn)行翅下靜脈采血。兩次均采集非抗凝血1～2 mL，血清用于測定三碘甲腺原氨酸(T3)和皮質(zhì)酮；抗凝血1～2 mL，用于測定異嗜性粒細(xì)胞/淋巴細(xì)胞(Heterophil / Lymphocyte,H/L)，H%和L%。

1.3 生理及免疫指標(biāo)測定

1.3.1 T3和皮質(zhì)酮的測定 采非抗凝血直接離心吸取血清，由中山大學(xué)廣州達(dá)瑞抗體中心用T3和皮質(zhì)酮 ELISA 試劑盒檢測，操作按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3.2 H/L的測定 將采集到的抗凝血用瑞氏和吉姆薩復(fù)合染色法對(duì)血涂板染色[5]，鏡檢，按Alfred等[6]的白細(xì)胞分類方法進(jìn)行細(xì)胞分類，并按Campo等[7]的方法進(jìn)行計(jì)數(shù)和計(jì)算。由解放軍458醫(yī)院免疫細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室代測。

1.4 數(shù)據(jù)分析

不同狀態(tài)下生理和免疫指標(biāo)的差異比較采用T檢驗(yàn)，利用SAS 9.0軟件完成分析。

2 結(jié)果與討論

2.1 不同季節(jié)對(duì)烏鬃鵝血液生理指標(biāo)的影響

南方夏季高溫對(duì)動(dòng)物來說是一種不良刺激，動(dòng)物除了進(jìn)行行為等物理調(diào)節(jié)外,還必須改變血漿中某些激素水平以加強(qiáng)化學(xué)調(diào)節(jié)。皮質(zhì)酮是由下丘腦-垂體-腎上腺皮質(zhì)軸(HPA)分泌的一種糖皮質(zhì)激素，對(duì)應(yīng)激產(chǎn)生的生理和行為應(yīng)答有著重要作用。Chen等[8]研究發(fā)現(xiàn)，與正常狀態(tài)相比，熱應(yīng)激(35 ℃)狀態(tài)下，隱性白羽洛克雞血清中皮質(zhì)酮和T3濃度含量極顯著升高。Edens等[9]使雌、雄仔雞突然處于43 ℃ 2 h,每隔30 min屠宰采血,發(fā)現(xiàn)血漿皮質(zhì)類固醇先急劇增加,而后迅速下降。然而也有不同觀點(diǎn)認(rèn)為高溫條件下皮質(zhì)酮上升不顯著或者下降[10-11]。同樣地，其他形式的應(yīng)激也會(huì)改變血漿中皮質(zhì)醇的含量,比如短途運(yùn)輸應(yīng)激會(huì)使小鼠血清中的皮質(zhì)酮水平明顯降低[12]。屠云潔等[13]對(duì)7日齡皖西白鵝進(jìn)行急性冷應(yīng)激，發(fā)現(xiàn)血清的皮質(zhì)醇在冷暴露3 h時(shí)顯著升高,并在冷暴露期間保持高水平。Davis等[14]認(rèn)為雞血漿皮質(zhì)酮含量跟年齡有關(guān)，皮質(zhì)酮在26 wk(產(chǎn)蛋高峰期)和64 wk(產(chǎn)蛋結(jié)束)時(shí)含量最高。關(guān)于皮質(zhì)酮是否能夠作為準(zhǔn)確地評(píng)價(jià)應(yīng)激的指標(biāo)至今都沒有達(dá)成共識(shí)，Minozzi等[15]提出不能單獨(dú)用皮質(zhì)酮的含量來評(píng)價(jià)耐應(yīng)激能力，應(yīng)該結(jié)合其他指標(biāo)綜合考慮。三碘甲狀腺原氨酸(T3)是由下丘腦-垂體-甲狀腺軸分泌的調(diào)節(jié)生長代謝的重要激素。血漿T3水平下降時(shí)，代謝速度減慢，產(chǎn)熱減少，反之亦然。應(yīng)激會(huì)影響血清中T3和T4水平，所以結(jié)合血清中的T3水平和皮質(zhì)酮含量來評(píng)價(jià)耐應(yīng)激能力。高增兵等[16]將288只A A雞分成4組，分別置于25.10、29.98、33.08和36.92 ℃的溫控室內(nèi)，發(fā)現(xiàn)各試驗(yàn)組與對(duì)照組(25.10 ℃)相比,血漿T3濃度先升高后降低。但一些學(xué)者認(rèn)為在熱應(yīng)激條件下雞血漿T3水平會(huì)降低，這樣降低代謝強(qiáng)度從而減少產(chǎn)熱，更好的適應(yīng)高溫環(huán)境[17-19]。Sinurat等[20]也研究表明,隨著環(huán)境溫度的升高，血清中T3 含量逐漸下降，且在35 ℃時(shí)極顯著低于常溫組。

表1 不同季節(jié)烏鬃鵝血液生理指標(biāo)的差異比較Table 1 Comparison of goose with various physiological indices in different seasons

注：括號(hào)內(nèi)數(shù)字表示個(gè)體數(shù)。下同。

Note:Data in brackets indicate individual numbers.The same below.

本研究發(fā)現(xiàn)，夏季烏鬃鵝皮質(zhì)酮含量顯著高于冬季(P<0.05)，血清T3含量極顯著高于冬季(P<0.01)。鵝只在冬季(剛產(chǎn)蛋結(jié)束)正采用人工強(qiáng)制換羽進(jìn)行反季節(jié)繁殖，雖然沒有遭受熱應(yīng)激，但是換羽應(yīng)激會(huì)使皮質(zhì)酮含量升高，所以如果排除換羽應(yīng)激，夏季鵝血清中的皮質(zhì)酮含量應(yīng)該比冬季高很多，也說明換羽應(yīng)激對(duì)烏鬃鵝血清皮質(zhì)酮的影響比熱應(yīng)激小。由甲狀腺分泌的三碘甲狀腺原氨酸(T3)與甲狀腺素(T4)是家禽體內(nèi)非常重要的生長調(diào)控激素，對(duì)家禽的生長、生殖、換羽等均有密切關(guān)系，從而換羽應(yīng)激對(duì)T3的影響比熱應(yīng)激大，所以造成了夏季烏鬃鵝的T3含量比正常溫度下高；夏季鵝只血清中T3水平明顯升高的另一個(gè)原因可能是由于本研究的應(yīng)激條件跟文獻(xiàn)報(bào)道的不完全一樣。文獻(xiàn)報(bào)道的高溫應(yīng)激條件都是人工制造高溫條件或者室內(nèi)模擬晝夜節(jié)律變化的高溫，而本試驗(yàn)則是自然條件下的高溫，它有獨(dú)自的特點(diǎn)，比如晝夜溫差大，一天中溫度變化大等。我們采樣的時(shí)間是在上午10∶00～12∶30，正處于逐漸的升溫階段，正如高增兵等[16]的研究，在這個(gè)短期時(shí)間內(nèi)，鵝只處于急性熱應(yīng)激狀態(tài)，其為適應(yīng)這種不利環(huán)境而增加代謝強(qiáng)度和產(chǎn)熱，故T3升高。而此后因散熱困難，鵝體溫上升快，為減緩體溫過度升高，一方面減少采食量，另一方面降低T3分泌量；當(dāng)鵝只適應(yīng)環(huán)境后，T3分泌漸趨穩(wěn)定。Tao等[19]的觀點(diǎn)也同樣證實(shí)了以上的推測，T3的變化具有晝夜節(jié)律，試驗(yàn)?zāi)M晝夜節(jié)律變化的高溫條件，從采樣的幾個(gè)時(shí)間點(diǎn)來看都存在明顯的隨著溫度的變化而變化。

2.2 不同對(duì)烏鬃鵝免疫指標(biāo)的影響

機(jī)體受到外界刺激時(shí)( 如病原體入侵，熱應(yīng)激等)，淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞在血液中的含量會(huì)下降，異嗜性粒細(xì)胞增加，因此異嗜性粒細(xì)胞(H)與淋巴細(xì)胞(L)的比值升高[21-22]。H/L值的變化與家禽的應(yīng)激程度密切相關(guān),可以作為檢測家禽應(yīng)激程度的一項(xiàng)準(zhǔn)確指標(biāo)[7]。本研究發(fā)現(xiàn)，夏季烏鬃鵝的H/L和H%值均極顯著高于冬季(P<0.01)；而與冬季相比，夏季烏鬃鵝的L%值極顯著降低(P<0.01)。與安麗英[23]、吳春梅等[24]報(bào)道的范圍一致，也與前人的報(bào)道相符。H/L值已經(jīng)作為一個(gè)成熟的評(píng)價(jià)抗逆性的指標(biāo)應(yīng)用到育種上，Al-Murrani等[25]研究表明H/L值高的家系更容易應(yīng)激,多項(xiàng)生產(chǎn)性狀均低于 H/L值低的家系。王存波等[26]利用H/L評(píng)價(jià)不同品種雞的抗應(yīng)激能力，初步表明家禽的抗應(yīng)激能力存在品種間差異。吳春梅等[24]研究發(fā)現(xiàn),北京油雞的H/L值極顯著低于白來航蛋雞，得出北京油雞比白來航蛋雞耐逆性更強(qiáng)。除了熱應(yīng)激，其他應(yīng)激也可導(dǎo)致H/L值升高，比如限飼、冷應(yīng)激、束縛、病毒感染、電擊、氨氣等[27]，同時(shí)H/L值與性別和年齡緊密相關(guān)。本試驗(yàn)的結(jié)果證明了H/L值可以作為評(píng)價(jià)鵝熱耐受性的免疫指標(biāo)。冬季雖然沒有高溫應(yīng)激，但是存在人工強(qiáng)制換羽應(yīng)激，會(huì)使H增加，L減少，H/L值增大，所以夏季烏鬃鵝的H/L值實(shí)際上應(yīng)該比冬季高很多，換羽應(yīng)激對(duì)H/L值的影響沒有熱應(yīng)激大。H/L值可以作為一個(gè)很好的評(píng)價(jià)家禽抗逆性的免疫指標(biāo)。

表2 不同季節(jié)烏鬃鵝免疫指標(biāo)的差異比較Table 2 Comparison of goose with various physiological indices in different seasons

3 結(jié) 論

高溫會(huì)增加鵝外周血中的T3和皮質(zhì)酮含量，同時(shí)也會(huì)使H/L值升高。皮質(zhì)酮和H/L值可以作為評(píng)價(jià)鵝熱耐受性的重要指標(biāo)，但T3是否能作為評(píng)價(jià)耐熱性能的候選指標(biāo)還需進(jìn)一步驗(yàn)證。

[1]林禎平,林 敏,王思慶.廣東鵝品種資源保護(hù)及利用現(xiàn)狀[J].水禽世界,2011(4):7-10.

[2]仲慶振,孫澤威,王 丹,等.急性熱應(yīng)激對(duì)不同品種鵝生長及屠宰性能的影響[J].中國畜牧雜志,2010,46(9):59-61.

[3]董淑麗,王占彬,雷雪芹,等.熱應(yīng)激對(duì)動(dòng)物血液生化指標(biāo)的影響[J].家畜生態(tài),2004,25(2):54-56.

[4]李紅軍,田夏清,徐美娟.動(dòng)物應(yīng)激的研究進(jìn)展[J].飼料研究,2006(10):6-11.

[5]董書魁,賈天寵.改良的MGG染色液[J].北京軍區(qū)醫(yī)藥,1996,8(1):77.

[6]Alfred M L,Casimir J.Atlas of avian hematology[M].Washington: United States Department of Agriculture,1961.

[7]Campo J L,Davila S G.Estimation of heritability for heterophil: lymphocyte ratio in chickens by restricted maximum likelihood effects of age,sex,and crossing [J].Poultry Science,2002,81(10):1 448-1 453.

[8]Chen Z Y,Gan J K,Xiao X,et al.The association of SNPs in Hsp90beta gene 5' flanking region with thermo tolerance traits and tissue mRNA expression in two chicken breeds[J].Molecular biology reports,2013,40(9):5 295-5 306.

[9]Edens F W.Adrenal cortical insufficiency in young chickens exposed to a high ambient temperature[J].Poultry science,1978,57(6):1 746-1 750.

[10]Gould N R,Siegel H S.Effect of corticotrophin and heat on corticosteroid-binding capacity and serum corticosteroid in white Rock chicken[J].Poultry science,1985,84:144-148.

[11]傅玲玉,周慶堂,章懷云,等.高溫對(duì)產(chǎn)蛋雞的血液生化反應(yīng)[J].中國畜牧雜志,1988(6): 12-15.

[12]胡 櫻,楊 斐.小鼠短途運(yùn)輸應(yīng)激及其營養(yǎng)干預(yù)的研究[J].實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué),2012(3): 15-19.

[13]屠云潔,耿照玉,蘇一軍,等.急性冷應(yīng)激對(duì)皖西白鵝某些神經(jīng)內(nèi)分泌活動(dòng)的影響[J].江西農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2009,21(9):150-152.

[14]Davis G S,Anderson K E,Carroll A S.The effects of long-term caging and molt of Single Comb White Leghorn hens on heterophil to lymphocyte ratios,corticosterone and thyroid hormones[J].Poultry Science,2000,79(4):514-518.

[15]Minozzi G H,Parmentier K S,Grasteau M,et al.Correlated effects of selection for immunity in White Leghorn chicken lines on natural antibodies and specific antibody responses to KLH and M.butyricum[J].BMC genetics,2008,9:5.

[16]高增兵,傅偉龍,蔣宗勇,等.高溫環(huán)境對(duì)肉雞生產(chǎn)性能和血漿甲狀腺激素、胰島素水平的影響[J].華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),1999,20(1):26-31.

[17]楊 琳,杜 榮,張子儀.環(huán)境溫度對(duì)雞飼糧代謝能測值及血漿中甲狀腺激素濃度的影響[J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào),1993,24(6):494-499.

[18]顧憲紅,王新謀.高溫對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能和血漿皮質(zhì)酮、甲狀腺素、孕酮水平的影響[J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào),1995,26(2):109-115.

[19]Tao X,Zhang Z Y,Dong H,et al.Responses of thyroid hormones of market-size broilers to thermoneutral constant and warm cyclic temperatures[J].Poultry Science,2006,85(9):1 520-1 528.

[20]Sinurat A P,Balnave D,Mcdowell G H.Growth performance and concentrations of thyroid hormones and growth hormone in plasma of broilers at high temperatures[J].Australian journal of biological sciences,1987,40(4):443-450.

[21]Gross W B,Siegel H S.Evaluation of the heterophil /lymphocyte ratio as a measurement of stress in chickens[J].Avian Diseases,1983,27(4):972-979.

[22]Stevenson J R,Taylor R.Effects of glucocorticoid and antiglucocorticoid hormones on leukocyte numbers and function[J].International journal of immunopharmacology,1988,10(1):1-6.

[23]安麗英.獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)診斷[M].北京:中國農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社,2000:152-156.

[24]吳春梅,趙桂蘋,文 杰,等.中國北京油雞和引進(jìn)白來航蛋雞免疫性狀的比較[J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào),2007,38(12):1 383-1 388.

[25]Al-Murrani W K,Al-Rawi A J,Al-Hadithi M F,et al.Association between heterophil / lymphocyte ratio,a marker of 'resistance' to stress,and some production and fitness traits in chickens[J].British poultry science,2006,47(4):443-448.

[26]王存波,常國斌,包文斌,等.利用H/L值分析雞抗應(yīng)激能力差異[J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào),2009,41(7):8 -10.

[27]Gross W B,Siegel P B.Effects of initial and second periods of fasting on heterophil / lymphocyte ratio and body weight[J].Avian Diseases,1986,30(2):345-346.

EffectsofSeasonalDifferenceonPhysiologicalandImmuneIndicesofGoose

XIAO Xiong1,2,KONG Li-na1,WU Yin-bao1,ZHANG Wen-wu1,LUO Qing-bin1*

(1.SouthChinaAgricultureUniversity,Guangzhou510642,China；2.GuangdongWensfoodgroupLimitedbyShareLtd,Xinxing527439,China)

This study was designed to explore the effects of different temperature on several physiological and immune indices of Wuzong goose.30-week-old female Wuzong gooses (n=200) were selected and blood samples were obtained at summer(35 ℃) and winter(20 ℃),respectively,then repackaged into blood collection tubes.Blood serum was used to measure T3 and corticosterone content,and the anticoagulation was to determine H%,L% and H/L value.The result indicated that compared with the winter,the T3 and corticosterone content of blood serum in Wuzong goose increased extremely significantly (P<0.01) or significantly (P<0.05) at summer.Moreover,the H%,H/L value rose significantly (P<0.01) and the L% decreased significantly (P<0.01).The corticosterone and H/L values were important indexes to judge thermal tolerance of goose.

goose; different season; physiological index; immune index

2013-12-21，

2014-01-12

廣東省教育部產(chǎn)學(xué)研結(jié)合項(xiàng)目(2009B090300088)

肖 雄(1984-)，男，四川宜賓人，碩士，從事家禽生產(chǎn)與管理工作；△與第一作者同等貢獻(xiàn)。

*[通訊作者]羅慶斌(1969-)男，四川雅安人，副教授，碩士生導(dǎo)師，研究方向?yàn)榧仪萁】叼B(yǎng)殖與安全生產(chǎn)。E-mail: qbluo@scau.edu.cn

S811.6

A

1005-5228(2014)07-0045-04