胡哲源，朱超，江華Δ，汪匯，韓童，張文俊

（1.第二軍醫(yī)大學(xué)長征醫(yī)院整形外科，上海200003；2.解放軍第四一一醫(yī)院腎內(nèi)科，上海200081）

重組人內(nèi)皮抑素聯(lián)合順鉑化療對惡性黑色素瘤MVD及VEGF的影響探究

胡哲源1，朱超2，江華1Δ，汪匯1，韓童1，張文俊1

（1.第二軍醫(yī)大學(xué)長征醫(yī)院整形外科，上海200003；2.解放軍第四一一醫(yī)院腎內(nèi)科，上海200081）

目的探究重組人內(nèi)皮抑素聯(lián)合順鉑化療對惡性黑色素瘤微血管的密度（microvessel density，MVD）及內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）的影響。方法選取第二軍醫(yī)大學(xué)長征醫(yī)院整形科收治的預(yù)手術(shù)惡性黑色素瘤患者80例，隨機(jī)分為2組，其中對照組40例，給予順鉑30mg／m2，第1天和第8天靜滴，為1個周期，間隔3周重復(fù)，共治療2個周期；實驗組40例，在對照組治療的基礎(chǔ)上加用重組人內(nèi)皮抑素（恩度）15 mg／d靜滴。治療結(jié)束后，對比治療前后患者黑色素瘤組織中MVD及VEGF的表達(dá)水平及臨床療效。結(jié)果治療前2組MVD和VEGF計數(shù)差異無統(tǒng)計學(xué)意義；治療后，與對照組比較，實驗組MVD和VEGF計數(shù)均顯著降低（P＜0.05）；治療后，實驗組的有效率（87.5%）顯著高于對照組（70.0%），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論重組人內(nèi)皮抑素聯(lián)合順鉑化療能夠明顯降低惡性黑色素瘤組織中MVD及VEGF的表達(dá)，提高臨床療效。

重組人內(nèi)皮抑素；惡性黑色素瘤；MVD；VEGF

惡性黑色素瘤（malignantmelanoma，MM）是由于遺傳因素、環(huán)境因素共同影響而引起的一種發(fā)生在皮膚或者其他器官黑色素細(xì)胞的腫瘤［1］。本病臨床表現(xiàn)為壓痛、瘙癢、出血、潰瘍等，老年人癥狀較年輕人為重［2］。本病多發(fā)于45～60歲人群，男性稍高于女性，據(jù)調(diào)查統(tǒng)計［3］，我國惡性黑色素瘤患者的發(fā)病率從2000年的0.2萬／10萬上升至2004年的1萬／10萬，并有逐年上升趨勢。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，人們更加重視本病防治及預(yù)后，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)多采取單純手術(shù)切除、放療、化療等療法［4］，但效果并不理想，仍有較高的復(fù)發(fā)率和死亡率。研究發(fā)現(xiàn)［5］，重組人內(nèi)皮抑素（恩度）聯(lián)合順鉑化療能夠明顯增強(qiáng)順鉑的療效，其可以通過抑制微血管的形成，阻止小鼠黑色素瘤的生長［6］。本文旨在通過觀察治療前后惡性黑色素瘤MVD及VEGF的表達(dá)水平和臨床療效，來探究重組人內(nèi)皮抑素聯(lián)合順鉑化療對惡性黑色素瘤的治療效果，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2011年6月～2014年6月于第二軍醫(yī)大學(xué)長征醫(yī)院以惡性黑色素瘤為診斷而收入院患者80例，采用隨機(jī)數(shù)字表分為實驗組和對照組。實驗組40例，其中男23例，女17例，平均年齡（50.1±6.3）歲，平均病程（1.1±0.5）年；對照組40例，其中男25例，女15例，平均年齡（51.7±5.9）歲，平均病程（1.3±0.6）年。2組患者的一般資料相仿，差異無統(tǒng)計學(xué)意義?；颊咦栽竻⑴c本實驗，并簽署知情同意書。方案獲得本院倫理委員會批準(zhǔn)并全過程跟蹤。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn) 依靠ABCDE鑒別診斷體系［7］：A：不對稱；B：皮損邊界不規(guī)整；C：皮損色彩復(fù)雜；D：皮損直徑＞6mm；E：皮損高于皮膚、不斷發(fā)展。符合上述五條者可經(jīng)病理學(xué)檢查確診。

1.3 納入標(biāo)準(zhǔn) 經(jīng)組織病理學(xué)檢查確診為惡性黑色素瘤；病程1～2年；按1969年Clark侵襲深度分級屬于Ⅰ-Ⅲ級；按1970年Breslow垂直厚度分級屬＜1.5皮膚惡性黑色素瘤［8］；未經(jīng)治療的患者。

1.4 排除標(biāo)準(zhǔn) 經(jīng)過手術(shù)或放、化療治療；存在淋巴結(jié)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移；心臟、肝、膽嚴(yán)重疾?。黄渌麗盒阅[瘤；神志異常；對研究中所用藥物過敏；因各種原因不能完成實驗的患者。

1.5 治療方法 對照組參照臨床用藥指南［9］，給予順鉑治療，給予順鉑30mg／m2，溶于250mL 5%葡萄糖注射液中，靜脈滴注，于第1天、第8天使用作為1個周期，間隔3周重復(fù)，共治療2個周期；實驗組在對照組治療的基礎(chǔ)上加用重組人內(nèi)皮抑素（恩度）15mg／d，溶于500mL 0.9%氯化鈉注射液中，靜脈滴注，從治療周期第1天開始，連續(xù)給藥14 d，治療2個周期，于治療前后均進(jìn)行穿刺獲得黑色素瘤組織，分別觀察黑色素瘤組織中MVD及VEGF的表達(dá)水平及臨床療效。注意事項：用藥期間，禁食生冷辛辣等刺激性食物，戒煙酒，保持患者情緒穩(wěn)定。

1.6 觀察指標(biāo)及檢測方法 將黑色素瘤組織常規(guī)固定、包埋，制成厚度為4μM的切片；采用免疫組化染色法對組織切片進(jìn)行染色，由2名高年資的病理醫(yī)師在高倍鏡下對切片進(jìn)行觀察、統(tǒng)計，并核對結(jié)果。

1.6.1 MVD表達(dá)測定：利用Weidner技術(shù)對MVD進(jìn)行計數(shù)，在400倍顯微鏡下，將胞質(zhì)或胞膜內(nèi)存在棕黃色染色區(qū)的細(xì)胞作為1個微血管，選取3個微血管分布最集中的區(qū)域，用計算機(jī)系統(tǒng)統(tǒng)計200倍光鏡下選定區(qū)域內(nèi)微血管數(shù)目，并計算平均數(shù)。

1.6.2 VEGF表達(dá)測定：VEGF陽性細(xì)胞是指胞質(zhì)、胞漿或者胞膜被染成黃色或棕黃色的細(xì)胞。采用400倍光學(xué)顯微鏡進(jìn)行觀察，選取3個視野，利用網(wǎng)格計數(shù)法對視野內(nèi)的陽性細(xì)胞進(jìn)行統(tǒng)計，之后計算其平均數(shù)，作為VEGF陽性細(xì)胞數(shù)目。

1.6.3 臨床療效判定：根據(jù)WHO療效評價標(biāo)準(zhǔn)，將臨床療效分為3個標(biāo)準(zhǔn)［10］：顯效：腫瘤全部消失；有效：腫瘤縮小≥50%；無效：腫瘤縮?。?0%或無變化或增大。同時分別計算2組患者的總有效率。

1.7 統(tǒng)計學(xué)方法 采用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS19.0進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，正態(tài)計量數(shù)據(jù)采用“±s”表示，組間比較采用t檢驗；計數(shù)資料用率表示，采用χ2檢驗；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 治療前后2組患者M(jìn)VD和VEGF表達(dá)比較 治療前2組MVD、VEGF計數(shù)差異均無統(tǒng)計學(xué)意義；治療后，與對照組比較，實驗組MVD計數(shù)、VEGF計數(shù)均顯著降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05，見表1，圖1）。

表1 治療前后2組患者M(jìn)VD計數(shù)和VEGF計數(shù)比較Tab.1 Comparison MVD count and VEGF count of two groups patients before and after treatment

圖1 MVD與VEGF染色結(jié)果（×400）Fig.1 Staining results of MVD and VEGF（×400）

2.2 2組臨床療效比較 治療后，實驗組的總有效率（87.5%）顯著高于對照組（70.0%），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05，見表3）。

表3 治療后2組患者臨床療效比較［n（%）］Tab.3 Comparison clinical efficacy of two groups patients after treatment［n（%）］

3 討論

資料顯示［10］，隨著社會發(fā)展，環(huán)境的日益破壞，黑色素瘤的發(fā)病率不斷升高，由于其惡性程度及死亡率較高，逐漸受到醫(yī)學(xué)界的廣泛關(guān)注。重組人內(nèi)皮抑素是一種抑制新生血管產(chǎn)生的生物制品，作為靶向治療的藥物進(jìn)入人們的視線。順鉑是臨床廣泛應(yīng)用的抗癌藥物，研究顯示其能夠阻礙微血管的增殖，誘導(dǎo)微血管凋亡［11］。有研究表明重組人內(nèi)皮抑素和順鉑聯(lián)合，具有協(xié)同作用，可以明顯的抑制小鼠惡性黑色素瘤的發(fā)展，與本文的臨床研究結(jié)果一致。

本研究結(jié)果顯示，治療前2組MVD計數(shù)和VEGF計數(shù)差異無統(tǒng)計學(xué)意義；治療后，與對照組比較，實驗組MVD計數(shù)和VEGF計數(shù)均顯著降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），提示重組人內(nèi)皮抑素聯(lián)合順鉑化療，相對于單獨應(yīng)用順鉑，能夠更有效地降低VEGF和MVD的表達(dá)，阻礙腫瘤細(xì)胞增殖；這與張詩武［12］報道顯示的重組人內(nèi)皮抑素在體內(nèi)競爭性的與VEGF受體結(jié)合，抑制VEGF表達(dá)；同時順鉑直接消滅腫瘤細(xì)胞，減少VEGF分泌，2者協(xié)同作用，使療效增強(qiáng)的結(jié)果相吻合；治療后，實驗組的有效率（87.5%）顯著高于對照組（70.0%），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），提示2藥合用具有更好的臨床療效。

綜上所述，重組人內(nèi)皮抑素聯(lián)合順鉑化療能夠明顯降低惡性黑色素瘤組織中MVD及VEGF的表達(dá)，提高療效。

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（編校：譚玲）

Effect of recombinant human endostatin combined w ith cisp latin chemotherapy on MVD and VEGF in malignantmelanoma

HU Zhe-yuan1，ZHU Chao2，JIANG Hua1Δ，WANG Hui1，HAN Tong1，ZHANGWen-jun1

（1.Plastic Surgery，ChangZheng Hospital，Second Military Medical University，Shanghai200003，China；2.Department of Nephrology，No.411 Hospital of People Liberation Army，Shanghai200081，China）

ObjectiveTo study the effect of recombinant human endostatin combined with cisplatin on the chemotherapy of MVD and VEGF in malignantmelanoma.Methods80 patients with malignantmelanoma tumor in our hospital were selected and random ly divided into two groups，40 patients of control group were treated with cisplatin，30 mg／m2，the first and eighth days of intravenous drip as 1 cycles，the interval of 3 weeks to repeat，a total of 2 cycles of treatment；40 cases in the experimental group were added recombinant human endostatin（En Du）15mg／d static drops on the basis of control group.After treatment，the expression level of MVD and VEGF and clinical efficacy were measured and compared between two groups.ResultsThere was no significant difference ofMVD countand VEGF countbetween two groups before treatment.After treatment，compared with control group，the MVD count and VEGF count in experimental group decreased significantly（P＜0.05）；the effective rate in experimental group（87.5%）was significantly higher than control group（70.0%），the difference was significant（P＜0.05）.ConclusionRecombinant human endostatin combined with cisplatin chemotherapy can significantly reduce the expression of MVD and VEGF in the tissues ofmalignantmelanoma and improve the therapeutic effect.

malignantmelanoma；recombinant human endostatin；MVD；VEGF

R622

A

1005－1678（2014）09－0030－03

第二軍醫(yī)大學(xué)2013年創(chuàng)新實驗基金（SCMR－C1305）

胡哲源，男，住院醫(yī)師，研究方向：體表器官的美容與整形，E-mail：huzy1985＠sina.com；江華，通信作者，男，主任醫(yī)師，研究方向：器官再造與美容整形，E-mail：ivansmmu＠163.com。