吳永勇

【摘要】 目的：分析探討血管內(nèi)皮抑素及堿性成纖維細(xì)胞生長因子在人胃癌組織中的表達(dá)情況。方法：選取來本院就診的36例胃癌患者，采用免疫組化SP法檢測患者胃癌組織中血管內(nèi)皮抑素和堿性成纖維細(xì)胞生長因子的表達(dá)水平。結(jié)果：發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移胃癌患者其胃癌組織中的血管內(nèi)皮抑素陽性表達(dá)率分別為46.7%、81.0%。堿性成纖維細(xì)胞生長因子陽性表達(dá)率分別為93.3%、61.9%，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：血管內(nèi)皮抑素及堿性成纖維細(xì)胞生長因子是人胃癌組織腫瘤血管的生成過程中的重要調(diào)節(jié)因子，兩者的消長關(guān)系可能與胃癌的發(fā)生發(fā)展等生物學(xué)行為相關(guān)。

【關(guān)鍵詞】 血管內(nèi)皮抑素； 堿性成纖維細(xì)胞生長因子； 胃癌

【Abstract】 Objective：To investigate and analyze the expression of somatostatin and alkaline endothelial fibroblast growth factor in human gastric cancer.Method：36 patients with gastric cancer in our hospital were selected，they were detected by immunohistochemical SP method in patients with gastric cancer tissue endostatin and basic fibroblast growth factor expression.Result：The positive expression of endostatin in lymph node metastasis and no lymph node metastasis in gastric cancer patients with gastric carcinoma were 46.7%，81.0%，respectively.Basic fibroblast growth factor expression rates were 93.3%，61.9%，the differences were statistically significant（P<0.05）.Conclusion：Somatostatin and alkaline endothelial fibroblast growth factor are the important regulator of tumor angiogenesis in human gastric cancer tissue generation process in the growth，the relationship between them may be related to the occurrence and development of the biological behavior of gastric carcinoma.

【Key words】 Endostatin； Basic fibroblast growth factor； Gastric cancer

First-authors address：The People's Hospital of Heyuan City，Heyuan 517000，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2014.22.052

胃癌是最為常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一，具有較高的發(fā)病率以及致死率，對人類健康及生命造成嚴(yán)重的影響[1-2]。因此，胃癌的早期診斷以及監(jiān)測其浸潤轉(zhuǎn)移具有重要的臨床意義。研究證實(shí)，腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移依賴于血管生成，而血管生成的過程是被血管生成促進(jìn)因子和抑制因子的平衡所調(diào)控的[3-6]。堿性成纖維細(xì)胞生長因子是一種存在于胞質(zhì)中的血管生成促進(jìn)因子，可通過自分泌或者旁分泌的方式參與腫瘤血管生成的調(diào)節(jié)[7-8]。而血管內(nèi)皮抑素是1997年發(fā)現(xiàn)的一種血管生成抑制因子，可通過直接作用于VEGF受體Flt-1或KDR阻斷VEGF受體及下游分子磷酸化來抑制腫瘤血管生成[9-11]。本研究采用免疫組化SP法檢測患者胃癌組織中血管內(nèi)皮抑素和堿性成纖維細(xì)胞生長因子的表達(dá)水平，旨在分析探討兩者在胃癌的發(fā)生發(fā)展過程中的相互關(guān)系，為胃癌的早期診斷及治療提供有價值的參考依據(jù)，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2009年5月-2013年10月在本院就診的胃癌患者36例，其中男20例，女16例，年齡23～76歲，平均（56.50±3.15）歲；伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者15例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者21例；高分化16例，低分化20例。

1.2 方法 對36例患者手術(shù)切除的胃癌組織用10%的福爾馬林固定，用石蠟包埋，然后做4μm厚切片。采用免疫組化SP法檢測患者胃癌組織中血管內(nèi)皮抑素和堿性成纖維細(xì)胞生長因子的表達(dá)水平。具體步驟如下：（1）將切邊脫蠟水化：將切片置于60 ℃烤箱中烤片60 min，用二甲苯及梯度酒精逐級脫蠟，然后置于雙蒸水中中分水化5 min，用PBS沖洗切片3次，5 min/次。（2）每張切片滴加過氧化氫溶液50 μL，室溫孵育10 min，用PBS沖洗切片3次，3 min/次。（3）將切片浸于檸檬酸緩沖溶液中，置于微波爐中，加熱至沸騰后，關(guān)閉微波爐，10 min后，再次置于微波爐中加熱至沸騰。然后取出，待冷卻至室溫后，用PBS沖洗切片3次，3 min/次。（4）甩棄切片上的PBS溶液，每張切片滴加羊血清50 μL，室溫孵育15 min。（5）棄去多余血清，每張切片加相應(yīng)一抗50 μL，

4 ℃孵育過夜。（6）棄去一抗，用PBS沖洗切片3次，5 min/次。甩棄PBS，每張切片加相應(yīng)二抗50 μL，室溫孵育30 min。用PBS沖洗切片3次，3 min/次。（7）甩棄PBS溶液，每張切片加鏈霉菌-親和素50 μL，室溫孵育30 min。用PBS沖洗切片3次，3 min/次。（8）DAB顯色，水洗終止。（9）蘇木精復(fù)染90 s～2 min。（10）梯度酒精脫水后，二甲苯透明，然后用中性樹膠進(jìn)行封片。endprint

1.3 觀察指標(biāo) 對于血管內(nèi)皮抑素及堿性成纖維細(xì)胞生長因子采用半定量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行陽性判斷，即依據(jù)細(xì)胞染色強(qiáng)度以及染色細(xì)胞所占的面積之和進(jìn)行判斷[12]。血管內(nèi)皮抑素蛋白陽性判定：血管內(nèi)皮抑素蛋白為胞漿著色。陽性細(xì)胞染色評分：無著色為0分，淡黃色為1分，棕褐色為3分。血管內(nèi)皮抑素染色細(xì)胞面積評定：陰性為0分，<25%細(xì)胞著色為1分，25%～50%細(xì)胞著色為2分，>50%細(xì)胞著色為3分。堿性成纖維細(xì)胞生長因子染色細(xì)胞面積評定：陰性為0分，10%細(xì)胞著色為1分，11%～50%細(xì)胞著色為2分，>50%細(xì)胞著色為3分。若細(xì)胞染色強(qiáng)度以及染色細(xì)胞所占的面積之和>2，則為陽性表達(dá)，≤2則為陰性表達(dá)[13]。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 17.0軟件對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，計數(shù)資料采用 字2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

經(jīng)免疫組化染色發(fā)現(xiàn)，不同分化程度的胃癌組織中血管內(nèi)皮抑素及堿性成纖維細(xì)胞生長因子的表達(dá)均無顯著性差異。發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移胃癌患者其胃癌組織中的血管內(nèi)皮抑素陽性表達(dá)率分別為46.7%、81.0%。堿性成纖維細(xì)胞生長因子陽性表達(dá)率分別為93.3%、61.9%，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表1。

3 討論

血管內(nèi)皮抑素及堿性成纖維細(xì)胞生長因子是胃癌血管生成過程中的兩個重要的調(diào)節(jié)因子[12-13]。本研究中發(fā)現(xiàn)，伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移胃癌患者其胃癌組織中的血管內(nèi)皮抑素陽性表達(dá)率分別為46.7%、81.0%。堿性成纖維細(xì)胞生長因子陽性表達(dá)率分別為93.3%、61.9%，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織中，血管內(nèi)皮抑素的陽性表達(dá)率低（46.7%），而堿性成纖維細(xì)胞生長因子的陽性表達(dá)率高（93.9%）；無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織中血管內(nèi)皮抑素的陽性表達(dá)率高（81.0%），而堿性成纖維細(xì)胞生長因子的陽性表達(dá)率低（61.9%），這表明，兩者的消長關(guān)系可能與胃癌的發(fā)生發(fā)展等生物學(xué)行為相關(guān)。

參考文獻(xiàn)

[1]鄒小農(nóng)，孫喜斌，陳萬青，等.2003-2007年中國胃癌發(fā)病與死亡情況分析[J].腫瘤，2012，32（2）：109-114.

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[3]常衛(wèi)華，趙治國，張艷鴻，等.胃癌組織中血管內(nèi)皮抑素及微血管密度測定[J].鄭州大學(xué)學(xué)報，2005，40（3）：502-503.

[4]李慧，雒文彬.Endostatin、bFGF在舌鱗癌中的表達(dá)及臨床意義[J].中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2010，14（6）：859-861.

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[6]王勝，黃宣，徐笑紅，等.胃癌患者血清水平與臨床及預(yù)后的關(guān)系[J].實(shí)用腫瘤雜志，2006，21（6）：549-550.

[7]賈寶輝，史成章，劉偉，等.血小板衍生內(nèi)皮細(xì)胞生長因子在胃癌中的表達(dá)及其與血管生成[J].腫瘤防治雜志，2003，10（10）：1062-1065.

[8] Riedel F，Gotte K，Oulmi Y，et al.Immunocytochemical localization of basic fibroblast growth factor in squarrnous celt carcinomas of the head and neck[J].Anticancer Res，2001，21（3B）：1873-1878.

[9]秦艷芳，向春儉，楊紅宇，等.堿性成纖維細(xì)胞生長因子與腫瘤[J].國外醫(yī)學(xué)：腫瘤學(xué)分冊，2001，28（4）：256-259.

[10]劉棟才，李永國，楊竹林，等.VEGFmRNA和bFGFmRNA在胃癌組織中的表達(dá)及其意義[J].湖南醫(yī)學(xué)，2001，18（6）：410-412.

[11]Rieard-Blum S，F(xiàn)emud O，Lortat-Jacob H，et al.Characterization of endostatin binding to heparin and heparan sulfate by surface plasmon rcsona_rlce and molecular modeling[J].Biol Chem，2004，279（4）：2927-2936.

[12]丁旭青，韓玉培.食管鱗癌p53、TSP-1、VEGF表達(dá)與腫瘤血管生成[J].中國腫瘤外科雜志，2009，1（4）：209-211.

[13]陳凜，李濤.胃癌綜合治療現(xiàn)狀與進(jìn)展[J].世界華人消化雜志，2008，16（6）：571-574.

（收稿日期：2014-05-17） （本文編輯：歐麗）endprint

1.3 觀察指標(biāo) 對于血管內(nèi)皮抑素及堿性成纖維細(xì)胞生長因子采用半定量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行陽性判斷，即依據(jù)細(xì)胞染色強(qiáng)度以及染色細(xì)胞所占的面積之和進(jìn)行判斷[12]。血管內(nèi)皮抑素蛋白陽性判定：血管內(nèi)皮抑素蛋白為胞漿著色。陽性細(xì)胞染色評分：無著色為0分，淡黃色為1分，棕褐色為3分。血管內(nèi)皮抑素染色細(xì)胞面積評定：陰性為0分，<25%細(xì)胞著色為1分，25%～50%細(xì)胞著色為2分，>50%細(xì)胞著色為3分。堿性成纖維細(xì)胞生長因子染色細(xì)胞面積評定：陰性為0分，10%細(xì)胞著色為1分，11%～50%細(xì)胞著色為2分，>50%細(xì)胞著色為3分。若細(xì)胞染色強(qiáng)度以及染色細(xì)胞所占的面積之和>2，則為陽性表達(dá)，≤2則為陰性表達(dá)[13]。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 17.0軟件對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，計數(shù)資料采用 字2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

經(jīng)免疫組化染色發(fā)現(xiàn)，不同分化程度的胃癌組織中血管內(nèi)皮抑素及堿性成纖維細(xì)胞生長因子的表達(dá)均無顯著性差異。發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移胃癌患者其胃癌組織中的血管內(nèi)皮抑素陽性表達(dá)率分別為46.7%、81.0%。堿性成纖維細(xì)胞生長因子陽性表達(dá)率分別為93.3%、61.9%，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表1。

3 討論

血管內(nèi)皮抑素及堿性成纖維細(xì)胞生長因子是胃癌血管生成過程中的兩個重要的調(diào)節(jié)因子[12-13]。本研究中發(fā)現(xiàn)，伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移胃癌患者其胃癌組織中的血管內(nèi)皮抑素陽性表達(dá)率分別為46.7%、81.0%。堿性成纖維細(xì)胞生長因子陽性表達(dá)率分別為93.3%、61.9%，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織中，血管內(nèi)皮抑素的陽性表達(dá)率低（46.7%），而堿性成纖維細(xì)胞生長因子的陽性表達(dá)率高（93.9%）；無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織中血管內(nèi)皮抑素的陽性表達(dá)率高（81.0%），而堿性成纖維細(xì)胞生長因子的陽性表達(dá)率低（61.9%），這表明，兩者的消長關(guān)系可能與胃癌的發(fā)生發(fā)展等生物學(xué)行為相關(guān)。

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[4]李慧，雒文彬.Endostatin、bFGF在舌鱗癌中的表達(dá)及臨床意義[J].中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2010，14（6）：859-861.

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[12]丁旭青，韓玉培.食管鱗癌p53、TSP-1、VEGF表達(dá)與腫瘤血管生成[J].中國腫瘤外科雜志，2009，1（4）：209-211.

[13]陳凜，李濤.胃癌綜合治療現(xiàn)狀與進(jìn)展[J].世界華人消化雜志，2008，16（6）：571-574.

（收稿日期：2014-05-17） （本文編輯：歐麗）endprint

1.3 觀察指標(biāo) 對于血管內(nèi)皮抑素及堿性成纖維細(xì)胞生長因子采用半定量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行陽性判斷，即依據(jù)細(xì)胞染色強(qiáng)度以及染色細(xì)胞所占的面積之和進(jìn)行判斷[12]。血管內(nèi)皮抑素蛋白陽性判定：血管內(nèi)皮抑素蛋白為胞漿著色。陽性細(xì)胞染色評分：無著色為0分，淡黃色為1分，棕褐色為3分。血管內(nèi)皮抑素染色細(xì)胞面積評定：陰性為0分，<25%細(xì)胞著色為1分，25%～50%細(xì)胞著色為2分，>50%細(xì)胞著色為3分。堿性成纖維細(xì)胞生長因子染色細(xì)胞面積評定：陰性為0分，10%細(xì)胞著色為1分，11%～50%細(xì)胞著色為2分，>50%細(xì)胞著色為3分。若細(xì)胞染色強(qiáng)度以及染色細(xì)胞所占的面積之和>2，則為陽性表達(dá)，≤2則為陰性表達(dá)[13]。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 17.0軟件對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，計數(shù)資料采用 字2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

經(jīng)免疫組化染色發(fā)現(xiàn)，不同分化程度的胃癌組織中血管內(nèi)皮抑素及堿性成纖維細(xì)胞生長因子的表達(dá)均無顯著性差異。發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移胃癌患者其胃癌組織中的血管內(nèi)皮抑素陽性表達(dá)率分別為46.7%、81.0%。堿性成纖維細(xì)胞生長因子陽性表達(dá)率分別為93.3%、61.9%，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表1。

3 討論

血管內(nèi)皮抑素及堿性成纖維細(xì)胞生長因子是胃癌血管生成過程中的兩個重要的調(diào)節(jié)因子[12-13]。本研究中發(fā)現(xiàn)，伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移胃癌患者其胃癌組織中的血管內(nèi)皮抑素陽性表達(dá)率分別為46.7%、81.0%。堿性成纖維細(xì)胞生長因子陽性表達(dá)率分別為93.3%、61.9%，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織中，血管內(nèi)皮抑素的陽性表達(dá)率低（46.7%），而堿性成纖維細(xì)胞生長因子的陽性表達(dá)率高（93.9%）；無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織中血管內(nèi)皮抑素的陽性表達(dá)率高（81.0%），而堿性成纖維細(xì)胞生長因子的陽性表達(dá)率低（61.9%），這表明，兩者的消長關(guān)系可能與胃癌的發(fā)生發(fā)展等生物學(xué)行為相關(guān)。

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[6]王勝，黃宣，徐笑紅，等.胃癌患者血清水平與臨床及預(yù)后的關(guān)系[J].實(shí)用腫瘤雜志，2006，21（6）：549-550.

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[9]秦艷芳，向春儉，楊紅宇，等.堿性成纖維細(xì)胞生長因子與腫瘤[J].國外醫(yī)學(xué)：腫瘤學(xué)分冊，2001，28（4）：256-259.

[10]劉棟才，李永國，楊竹林，等.VEGFmRNA和bFGFmRNA在胃癌組織中的表達(dá)及其意義[J].湖南醫(yī)學(xué)，2001，18（6）：410-412.

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[13]陳凜，李濤.胃癌綜合治療現(xiàn)狀與進(jìn)展[J].世界華人消化雜志，2008，16（6）：571-574.

（收稿日期：2014-05-17） （本文編輯：歐麗）endprint