徐 英，王李莉，周 強，鄧 聰，陳 波，黃海櫻，林 楨，楊 靜，夏少梅（.西藏林芝地區(qū)人民醫(yī)院檢驗科 860000；.南方醫(yī)科大學檢驗系008級，廣州 5060；.廣州醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院檢驗科，廣州 5060）

2型糖尿病是現(xiàn)階段最主要和增長最快的糖尿病類型，占整個糖尿病人群的90%以上［1］。其發(fā)病率逐年上升，WHO預測糖尿病的發(fā)病率將從1995年的4.0%發(fā)展至2025年的5.4%［2］。2型糖尿病是由于遺傳和環(huán)境因素共同導致的胰島素相對或絕對缺乏及不同程度的胰島素抵抗（insulin resistance，IR），使體內碳水化合物、脂肪及蛋白質代謝發(fā)生紊亂［3－4］。研究表明，抵抗素（rs）的多個單核苷酸位點存在多態(tài)性（SNP），且在不同國家、不同種族中有很大差異。單核苷酸多態(tài)性包括單個堿基的轉換、插入、缺失等［5－6］。血清rs1862513位點在國外人群中有一定的多態(tài)性?，F(xiàn)將廣東地區(qū)人群該基因位點多態(tài)性的相關研究報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2010年10月至2011年10月廣州醫(yī)學院第二附屬醫(yī)院收治的新診斷為2型糖尿病的患者182例為治療組，其中男95例，女87例，平均年齡（64±12）歲。排除1型糖尿病，繼發(fā)性2型糖尿病患者，嚴重肝腎功能不全及其他內分泌代謝疾病患者。收集同期健康體檢者191例為健康對照組，其中男70例，女121例，平均年齡（62±11）歲。

1.2 實驗儀器 實驗用儀器有日立7600全自動生化分析儀；羅氏E411全自動電化學發(fā)光免疫分析儀；STAR全自動樣本工作站；FAME全自動酶免分析儀；MassARRAY實驗平臺；MassARRAY 384孔雙頭聚合酶鏈反應擴增儀；MassARRAY質譜檢測儀；MassARRAY點樣儀。

1.3 實驗試劑 實驗試劑為葡萄糖氧化酶試劑盒（中生北控生物科技股份有限公司）；胰島素診斷試劑盒［羅氏診斷產品（上海）有限公司］；抵抗素檢測試劑盒（美國RapidBio Lab公司）；iPLEX反應試劑（美國Sequenom公司）；SpectroCHIP生物芯片（美國Sequenom公司）；HOTSTART taq酶（美國Se－quenom公司）；SAP酶（美國Sequenom公司）；純化瓊脂（美國Sequenom公司）。

1.4 方法

1.4.1 抵抗素SNP基因位點的選擇 根據NCBI數據庫提供的數據檢索，綜合國內外文獻報道及資料，得出rs1862513位點在國外2型糖尿病患者中有一定的多態(tài)性。

1.4.2 標本采集與處理 所有受試者均隔夜空腹8h以上，清晨抽取靜脈血兩管共6mL。一支干燥管（3mL），3 000r／min，14.2cm，離心15min，進行血清分離，該血清用于空腹血糖（FBG）、空腹胰島素（FIN）水平的檢測，并移取200 μL血清置－20℃低溫保存，以用于抵抗素的批量檢測。另一支為乙二胺四乙酸二鉀（EDTA－K2）抗凝血（3mL），充分搖勻以徹底抗凝，－20℃存放，以用作rs1862513單核苷酸多態(tài)性分析之用。

1.4.3 指標測定 FBG測定采用葡萄糖氧化酶法，F(xiàn)IN測定采用化學發(fā)光法。根據國際通用的穩(wěn)態(tài)模式評估法，計算IRI，IRI＝FBG×FIN／22.5［7］。血清抵抗素測定采用雙抗夾心ELISA兩步法測定。rs1862513位點基因型的檢測由深圳華大基因研究院完成。

1.5 統(tǒng)計學處理 采用SPSS17.0分析軟件進行數據處理。對抵抗素以及胰島素抵抗指數進行單樣本Kolmogorov－Smirnov檢驗正態(tài)性分析，以抵抗素為自變量，IRI為因變量進行相關性回歸分析?；蛐腿后w符合程度用Hardy－Weinberg遺傳平衡定律檢驗，計數資料基因型頻率在2型糖尿病組與健康對照組間的差異比較采用行×列表資料的雙側χ2檢驗?；蛐团c疾病相關性分析通過logistic回歸分析，以比值比（OR）和95%置信區(qū)間（CI）表示相對危險度。所有統(tǒng)計資料均以雙側概率檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 抵抗素與胰島素抵抗指數 單樣本Kolmogorov－Smirnov檢驗分別檢測抵抗素水平與胰島素抵抗指數的正態(tài)性分布。采用Pearson相關性分析，r＝0.709，P＜0.05。抵抗素水平與胰島素抵抗指數在P＝0.05（雙側）上顯著相關。

2.2 rs1862513位點基因型頻率 rs1862513位點基因型頻率已達到遺傳平衡，具有群體代表性。其中χ2＝4.645，P＝0.098，rs1862513位點C／G基因型的分布頻率差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），見表1。

表1 兩組rs1862513（C／G）基因型頻率比較

表2 rs1862513（C／G）基因型與2型糖尿病的危險度分析

2.3 logistic回歸分析 GG純合子患病率是CC純合子患病率的1.375倍，OR＝1.375，95%CI：0.575～3.285，基因型間危險度差異無統(tǒng)計學意義（P＝0.473）。見表2。

3 討 論

糖尿病是世界上普遍危害人類健康的慢性疾病之一。作為糖尿病的主要類型，2型糖尿病是一種具明顯異質性的多因素、多基因遺傳病，其遺傳方式和發(fā)病機制十分復雜，許多微小基因的變異都會增加其發(fā)病率［8］。近年來的研究認為，抵抗素是2型糖尿病的重要信號分子［9－10］。抵抗素為2型糖尿病的發(fā)病機制和治療提供了一個新的方向［11］。本研究發(fā)現(xiàn)，抵抗素與胰島素抵抗指數呈顯著的正相關關系，與文獻研究結果一致［12－17］。

有研究表明，人抵抗素基因編碼區(qū)由326個堿基組成，編碼108個氨基酸殘基組成的抵抗素蛋白。羧基端有一獨特的富含半胱氨酸的高度重復序列CX（12）CX（8）CXCX（3）CX（10）CXCXCX（9）CC，占12%［10］。 據NCBI數據庫顯示，rs1862513位點基因型存在C→G的突變，由此推測其可能影響抵抗素的表達水平以及生物活性，進而影響到抵抗素相關疾?。ㄈ缣悄虿。┑陌l(fā)生、發(fā)展與轉歸。

對于抵抗素基因多態(tài)性在2型糖尿病研究中的重要性各界未達成一致的共識。本研究中，通過對2型糖尿病抵抗素基因1862513位點的檢測，證實該位點單核苷酸多態(tài)性存在C→G的突變而呈現(xiàn)3種基因型：CC型、CG型和GG型；研究結果發(fā)現(xiàn)該位點基因型頻率在廣東地區(qū)2型糖尿病組和健康對照組間差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），表明了該位點抵抗素基因多態(tài)性與廣東地區(qū)2型糖尿病間無相關性。周強等［18］研究發(fā)現(xiàn)，脂聯(lián)素＋45位點多態(tài)性與2型糖尿病關系密切，該基因變異可能在2型糖尿病的發(fā)病過程中起了重要作用。董艷等［19］研究顯示7個抵抗素基因的單核苷酸多態(tài)性基因頻率在華東地區(qū)2型糖尿病和健康對照組中差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。Sentinclli等［20］研究發(fā)現(xiàn)，意大利人＋1326G／C位存在1個單核苷酸多態(tài)性，而且該單核苷酸多態(tài)性的等位基因頻率在意大利人2型糖尿病中和肥胖間差異也無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。本研究在危險度分析的研究結果中顯示，rs1862513位點的各種基因型結果差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），可能與2型糖尿病的發(fā)生無關。在廣東地區(qū)2型糖尿病患者中，rs1862513位點的各基因型之間發(fā)生2型糖尿病風險無差異，rs1862513可能不是2型糖尿病的易感基因。

目前國內外學者普遍認為2型糖尿病為一類多種不同病因所致的代謝綜合征，人們對該疾病的發(fā)病機制及影響因素的認識仍較膚淺，抵抗素基因多態(tài)性與2型糖尿病的關系亦僅是初步研究。此次研究證實其與廣東地區(qū)2型糖尿病無相關性，可能原因為抵抗素基因多態(tài)性在不同國家、不同地區(qū)中與2型糖尿病的關系亦不一致，該位點可能不是廣東地區(qū)2型糖尿病患者的易感基因。

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