范成平 左銳 劉學(xué)輝

摘要 [目的]了解安順地區(qū)漂浮育苗TMV病毒發(fā)生規(guī)律以及導(dǎo)致大棚內(nèi)發(fā)生大面積侵染的原因。[方法]于2011～2013年對安順市主要烤煙種植區(qū)（縣）病毒檢出率、育苗點(diǎn)不同大棚煙苗帶毒率以及TMV高發(fā)大棚周邊環(huán)境進(jìn)行調(diào)查。[結(jié)果]安順市各煙區(qū)所有檢測批次的樣品均有一定的帶毒率，不同煙區(qū)煙苗風(fēng)險樣品率及高風(fēng)險樣品率不同，其中紫云縣煙苗TMV陽性檢出率為歷年最高。漂浮苗帶毒率與育苗棚管理水平密切相關(guān)。隨著育苗集約化程度提高，煙苗TMV 陽性檢出率提高，感染TMV的風(fēng)險增大。設(shè)施不齊全、周邊生態(tài)環(huán)境、育苗管理操作不到位為TMV傳播提供了初侵染原和重要途徑，導(dǎo)致煙苗帶毒率大大增加。[結(jié)論]為防治煙草普通花葉病及提高烤煙的產(chǎn)量及品質(zhì)提供了理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞 煙草普通花葉病;發(fā)生規(guī)律;原因分析

中圖分類號 S572 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A 文章編號 0517-6611（2014）33-11784-02

Occurring Situation and Pathogenic Factors of TMV for Tobacco Float Seedling Production in Anshun Area

FAN Cheng-ping1， ZUO Rui2*， LIU Xue-hui3

（1. Anshun Company of Guizhou Tobacco Company， Anshun， Guizhou 561000;2. Guizhou Institute of Biotechnology， Guiyang， Guizhou 550006;3. Guizhou Institute of Plant Protection， Guiyang， Guizhou 550006）

Abstract [Objective] The occurring law and pathogenic factors of TMV for tobacco float seedling production in Anshun area were understand. [Method] The detection rate of TMV from main flue-cured tobacco planting areas， virus carried rate of seedlings in different greenhouses of seedling points and the surrounding environment of TMV high-incidence greenhouse in Anshun were investigated from 2011 to 2013. [Result] All the samples from each tobacco planting area of Anshun had certain virus carried rate; the risk sample rate and high risk sample rate of seedlings were different in different areas， among them the positive detection rate of seedlings TMV from Ziyun County was the highest for each year. The virus carried rate of float seedlings was closely related with management level of greenhouse. With the improvement of seedling intensive degree， the positive detection rate of seedlings TMV increased， and then the risk of TMV infecting increased. The lack of facilities， surrounding environment and the lack of seedling management provided initial infective source and important way for TMV so as to lead the increase of virus carried rate of seedlings. [Conclusion] The results provide theoretical basis for control of TMV and improvement of tobacco yield and quality.

Key words TMV; Occurring law; Cause analysis

基金項(xiàng)目 煙草病毒病防治體系的建立（201118）。

作者簡介 范成平（1980-），男，貴州安順人，助理農(nóng)藝師，從事煙草種植收購工作。*通訊作者，副研究員，從事植物保護(hù)及農(nóng)藥劑型研究。

收稿日期 2014-10-17

煙草普通花葉?。═MV）是世界各國煙草生產(chǎn)上的一類主要病害，在我國煙葉生產(chǎn)中，尤以貴州、云南、河南等省區(qū)受害較重，給煙葉生產(chǎn)帶來嚴(yán)重?fù)p失[1]。煙草病毒病直接影響煙葉的產(chǎn)量、質(zhì)量和種植效益，幼苗期感染或大田初期感染，損失可達(dá)30%～50%[2]。發(fā)生嚴(yán)重時，甚至可能造成煙田絕收。近年來，在貴州省大部分煙區(qū)，TMV的發(fā)生流行呈較快的上升趨勢，安順地區(qū)尤其嚴(yán)重。根據(jù)張崑等對安順市煙草普通花葉病的調(diào)查，田間株發(fā)病率一般為30%～50%，部分田塊煙草花葉病毒病的發(fā)生率高達(dá)90%以上[3]。它的發(fā)生及危害已成為烤煙生產(chǎn)向優(yōu)質(zhì)、適產(chǎn)、高效目標(biāo)邁進(jìn)的一個主要障礙[4-5]。

煙草普通花葉病為系統(tǒng)侵染性病害，煙株根、莖、葉均可帶毒，通過機(jī)械接觸傳播，TMV具有較廣泛的寄主范圍，可侵染36個科的350多種植物[6]，且在常溫條件下致病力可達(dá)數(shù)十年，在干燥病組織內(nèi)存活30年以上[7]。據(jù)報道，剪葉是漂浮育苗中TMV引起的煙草普通花葉病在苗期傳播的最主要、最有效的途徑[8-9]。在苗盤、基質(zhì)和池水中加入的TMV病葉汁液，在育苗過程中也可通過根部侵染煙苗[9]。研究表明，受TMV污染的水源、漂浮盤、營養(yǎng)液、基質(zhì)及周邊雜草不是TMV在漂浮育苗期間傳播的主要途徑，但卻是病毒病傳播的主要初侵染源，是TMV在漂浮育苗中傳播的主要初侵染源[9-11]，剪葉過程中極少量的病苗就會導(dǎo)致煙草普通花葉病毒病的迅速傳播[9]。筆者近3年來對安順地區(qū)1區(qū)3縣主要育苗點(diǎn)共計(jì)4 980個煙草樣品進(jìn)行了病毒檢測，并對發(fā)病嚴(yán)重的大棚進(jìn)行了致病原因分析，以期為提高烤煙的產(chǎn)量和品質(zhì)提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

TMV檢測試劑盒（含TMV包被抗血清、TMV堿性磷酸酶標(biāo)記的酶標(biāo)二抗、顯色底物PNP、陽性質(zhì)控物、ECI緩沖液、PBST緩沖液、GEB緩沖液、Tween-20、96孔酶標(biāo)板）和陰性質(zhì)控物均為美國Agdia公司產(chǎn)品;ELX800酶標(biāo)儀為美國BioTeK公司產(chǎn)品。

1.2 方法

1.2.1

取樣方法。2011～2013年對安順煙區(qū)各個烤煙育苗點(diǎn)進(jìn)行取樣，其中，每個育苗點(diǎn)按小棚數(shù)量的10%～20%進(jìn)行隨機(jī)取樣，單體大棚按每個棚育苗池?cái)?shù)量的50%進(jìn)行隨機(jī)取樣，聯(lián)體大棚每個棚育苗池?cái)?shù)量的100%進(jìn)行隨機(jī)取樣。

采用5點(diǎn)定點(diǎn)取樣，每個點(diǎn)周圍取樣5片中上部整葉，混合為1個煙樣，共計(jì)25片。采用統(tǒng)一樣品袋和記號筆，采集人員進(jìn)入棚群必須使用一次性塑料袋套腳和一次性塑料手套，每采集完1個樣必須更換一次手套。

樣品于移栽前2～7 d進(jìn)行大規(guī)模取樣，樣品煙葉平鋪于樣品袋中并封口保存（若24 h送樣，樣品于4～6 ℃保存）。

1.2.2

TMV檢測方法。

參考Agdia試劑盒的說明書，采用抗原直接包被ELISA法進(jìn)行病毒檢測。在加入PNP底物顯色后，用酶標(biāo)儀在405 nm波長下測量OD值;當(dāng)樣品OD值/陰性對照OD值≥2為陽性結(jié)果。每批樣品于采樣后3 d內(nèi)檢測完畢。

1.2.3

TMV高發(fā)大棚調(diào)查。在TMV高發(fā)大棚進(jìn)行實(shí)地調(diào)研，對大棚周圍環(huán)境、水源進(jìn)行勘察，最后取水樣及周邊植物樣本進(jìn)行TMV病毒檢測。

2 結(jié)果與分析

2.1 安順煙區(qū)煙苗帶毒率檢測分析

2011～2013年，安順市1區(qū)3縣共計(jì)檢測樣品4 980個，2011年1 276個樣品，2012年1 634個樣品，2013年2 070個樣品，TMV陽性檢出率分別為14.66%、21.30%和18.99%。安順市各煙區(qū)所有檢測批次的樣品均有一定的帶毒率，不同煙區(qū)煙苗風(fēng)險樣品率及高風(fēng)險樣品率不同。紫云縣煙苗TMV陽性檢出率為歷年最高，分別為25.90%、29.98%、31.67%;陽性檢出率最低的分別為2011年平壩縣的6.08%、2012年普定縣的10.99%、2013年西秀區(qū)的12.18%。各縣（區(qū)）煙苗TMV陽性檢出率年間有較大差異，紫云縣病毒檢出率呈現(xiàn)逐年增加的趨勢，平壩縣與西秀區(qū)2012年病毒檢出率高于其他2年，普定縣2012年病毒檢出率最低?？傮w而言，2012年平均TMV陽性檢出率高于各年度平均值（表1）。

表1 2011～2013年安順地區(qū)各烤煙種植縣區(qū)樣品檢測結(jié)果

2.2 不同大棚煙苗帶毒率檢測分析

2011～2013年安順烤煙種植區(qū)育苗點(diǎn)包括育苗工場、小拱棚以及插地大棚。對不同棚型煙苗TMV檢測結(jié)果表明，不同棚型培育煙苗TMV帶毒率有明顯差異，小拱棚及插地大棚煙苗TMV陽性檢出率最低，隨著育苗集中度的提高，煙苗感染TMV的風(fēng)險增大。小拱棚以及插地大棚覆蓋面積小，規(guī)?；潭鹊?，基本不進(jìn)行剪葉，病毒檢出率相對較低。育苗工場煙苗覆蓋整個安順烤煙種植區(qū)的70%，規(guī)?；潭雀撸跓熋缫圃郧耙话阋M(jìn)行2～3次剪葉，大大提高了TMV病毒的感染幾率，是重點(diǎn)檢測對象。3年來，對10個主要烤煙育苗工場的樣品檢測結(jié)果顯示，天龍育苗工場歷年來病毒檢出率最低，分別為3.13%、4.55%、2.33%。2011年白石巖育苗工場病毒檢出率最高，為36.26%;2012年馬場育苗工場、白石巖育苗工場均出現(xiàn)嚴(yán)重問題，病毒檢出率均超過68%，所育種苗全部作廢;2013年十字育苗工場和茅坡育苗工場出現(xiàn)較大問題，病毒檢出率高達(dá)41.79%和46.15%（表2）。總體而言，2011年病毒檢出率最低，2012年病毒檢出率最高，主要原因是2012及2013年均出現(xiàn)TMV病毒毀滅性侵染的大棚。

表2 安順主要煙區(qū)育苗工場樣品檢測結(jié)果

注：“-”表示無煙草樣品檢測。

2.3 TMV高發(fā)大棚周邊環(huán)境調(diào)查分析

調(diào)研分析的大棚有：2011年的白石巖育苗工場、毛栗哨育苗工場;2012年的馬場育苗工場、毛栗哨育苗工場、茅坡育苗工場、梅旗育苗工場、黃土育苗工場、白石巖育苗工場;2013年的十字育苗工場、馬場育苗工場、毛栗哨育苗工場、茅坡育苗工場、云盤育苗工場、黃土育苗工場。

經(jīng)實(shí)地調(diào)研結(jié)果分析顯示，2011年白石巖育苗工場及2012年的梅旗育苗工場屬于當(dāng)年建設(shè)的新育苗點(diǎn)，育苗時大棚尚未完全竣工就草草投入使用，環(huán)境比較零亂，消毒設(shè)施不完善，管理不到位，導(dǎo)致TMV大面積侵染。2012年的馬場育苗工場和白石巖育苗工場均不具備獨(dú)立的供水系統(tǒng)，從周邊小河道引水，在河道附近堆積大量上年剩余的煙桿，造成水體污染，水源取樣檢測結(jié)果呈陽性，同時馬場育苗工場還是當(dāng)年新建大棚，管理不到位，導(dǎo)致TMV毀滅性侵染所育煙苗全部報廢。2012～2013年的茅坡育苗工場、黃土育苗工場管理不到位，大棚周圍雜草叢生，經(jīng)采樣檢測部分雜草呈陽性結(jié)果。十字育苗工場與云盤育苗工場2013年病毒檢出率大幅提高，其主要原因可能是技術(shù)人員更替，苗期管理出現(xiàn)問題，如剪葉過程剪葉機(jī)消毒不徹底，導(dǎo)致大面積感染。天龍育苗工廠管理嚴(yán)格，大棚周圍無雜草，育苗過程嚴(yán)把質(zhì)量關(guān)，每一步均做到嚴(yán)格消毒，病毒檢出率一直保持較低水平。毛栗哨育苗工場隨著管理人員意識的提高，以及對周圍環(huán)境及育苗過程的各個環(huán)節(jié)要求的不斷提高，病毒檢出率呈逐年下降趨勢。

3 結(jié)論與討論

通過對2011～2013年安順市煙區(qū)4 980個煙苗樣品進(jìn)行TMV陽性檢測分析顯示，所有檢測批次的樣品均有一定的帶毒率，不同年度間煙苗TMV 陽性檢出率有較大差異，特別是2012年，有2個育苗工場水源出現(xiàn)問題，導(dǎo)致整個工場的煙苗報廢，損失巨大。

對不同大棚煙苗TMV檢測結(jié)果表明，不同棚型培育煙苗TMV帶毒率有明顯差異，小拱棚及插地大棚煙苗TMV陽性檢出率最低，育苗工場病毒檢出率普遍偏高，隨著育苗集中度的提高，煙苗感染TMV的風(fēng)險增大。煙苗帶毒率與育苗集約化程度有密切關(guān)系。小拱棚及插地大棚覆蓋面積小，規(guī)?；潭鹊停静贿M(jìn)行剪葉，病毒檢出率相對較低。育苗工場煙苗覆蓋整個安順烤煙種植區(qū)的70%，規(guī)?；潭雀?，在煙苗移栽前一般要進(jìn)行2～3次剪葉，大大提高了TMV病毒的感染幾率。

通過對各年TMV高發(fā)大棚進(jìn)行實(shí)地調(diào)研，發(fā)現(xiàn)漂浮苗帶毒率與育苗棚管理水平密切相關(guān)。2011年白石巖育苗工場及2012年的梅旗育苗工場和馬場育苗工場屬于新建育苗點(diǎn)，管理不到位，設(shè)施不齊全，導(dǎo)致煙苗帶毒率大大增加。供水設(shè)施應(yīng)獨(dú)立，否則，一旦水源污染，將導(dǎo)致整個育苗工場的煙苗報廢。清理周圍環(huán)境，去除雜草減少初侵染原。剪葉等育苗管理操作是煙草普通花葉病毒病的傳播的重要途徑。隨著剪葉次數(shù)增加，煙苗OD值增大，煙苗帶毒率增加。減少剪葉次數(shù)是降低煙苗帶毒率的有效措施。

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