萬(wàn)大朋++++劉勝武

[摘要] 目的 分析化學(xué)發(fā)光法和酶聯(lián)免疫法在丙肝病毒抗體檢測(cè)中的應(yīng)用價(jià)值。方法 同時(shí)應(yīng)用化學(xué)發(fā)光法和酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)60例丙肝確診感染者和100例健康體檢者的抗丙型肝炎病毒抗體，計(jì)算其陰性符合率、陽(yáng)性符合率以及總符合率，用Kappa檢驗(yàn)計(jì)算待評(píng)價(jià)診斷一致性。選取化學(xué)發(fā)光法初檢驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性的標(biāo)本100例，按照S/CO.值分為低值組（1

[關(guān)鍵詞] 丙型肝炎；抗體；化學(xué)發(fā)光；ELISA

[中圖分類號(hào)] R446.6 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-0742（2014）07（b）-0193-02

丙型肝炎（簡(jiǎn)稱丙肝）是嚴(yán)重威脅人類健康的傳染病之一，主要通過(guò)血液傳染，我國(guó)平均感染率為3.2%，由此估算感染人數(shù)約3 700萬(wàn)。輸血是丙型肝炎病毒（HCV）的主要傳播途徑，目前研究發(fā)現(xiàn)，除丙型肝炎病毒（HCV）急、慢性期患者外，輸血后許多無(wú)癥狀的受血者中也可發(fā)現(xiàn)HCV抗體[1]。當(dāng)前抗-HCV抗體檢測(cè)多采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），結(jié)果受抗原、抗體的變異影響較大，且國(guó)內(nèi)各類抗-HCV檢測(cè)試劑的檢測(cè)性能存在較大差異。近期采用化學(xué)發(fā)光免疫分析（CLIA）檢測(cè)抗-HCV抗體的試劑已進(jìn)入我國(guó)市場(chǎng)，為分析化學(xué)發(fā)光法和酶聯(lián)免疫法在丙肝病毒抗體檢測(cè)中的應(yīng)用價(jià)值?，F(xiàn)分析2012年1月—2013年12月間該院收治的同時(shí)應(yīng)用化學(xué)發(fā)光法和酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)60例丙肝確診感染者的臨床資料，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

60例HCV確診感染者血清標(biāo)本來(lái)自該院的門診和住院患者，其診斷符合2004年中華醫(yī)學(xué)會(huì)傳染病與寄生蟲(chóng)病學(xué)分會(huì)、中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì)聯(lián)合修訂的《丙型肝炎防治指南》的有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)[1]，其中男性33例，女性27例，年齡18～82歲，平均年齡（39.8±4.3）歲，病程3個(gè)月～21年，平均病程（6.5±2.1）年。所有患者均知情同意，簽署知情同意書。100例正常血清標(biāo)本來(lái)自該院自愿參與研究的健康體檢者，其中男性36例，女性24例，年齡18～81歲，平均年齡（39.4±3.9）歲。

1.2 儀器與試劑

ELISA法儀器為瑞士FAME全自動(dòng)酶標(biāo)分析系統(tǒng)，采用廈門新創(chuàng)科技有限公司生產(chǎn)的抗-HCV試劑盒；CLIA法儀器為美國(guó)強(qiáng)生Vitros 3600化學(xué)發(fā)光免疫分析儀，試劑盒為相配套試劑。確認(rèn)試劑（重組免疫印跡法）使用Chiton RIBA-3.0 SIA，Cop Emeryville，CA。

1.3 檢測(cè)結(jié)果判斷

ELISA法：以（0.1×陽(yáng)性對(duì)照平均A 值+陰性對(duì)照平均A值）確定Cut-off值，以檢測(cè)值≥Cut-off值為陽(yáng)性。CLIA法： S/CO.值≥1為陽(yáng)性。確認(rèn)試驗(yàn)：出現(xiàn)2條以上HCV蛋白條帶為陽(yáng)性。

1.4 方法

同時(shí)用ELISA法和CLIA法對(duì)160份樣本進(jìn)行抗HCV抗體檢測(cè)，按說(shuō)明書進(jìn)行操作。另選取100份化學(xué)發(fā)光法初檢結(jié)果陽(yáng)性的標(biāo)本，分為兩組：低值組（1

1.5 統(tǒng)計(jì)方法

用四格表統(tǒng)計(jì)臨床數(shù)據(jù)，并計(jì)算陰性、陽(yáng)性以及總符合率，所得數(shù)據(jù)采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS17.0處理，樣本率以χ2檢驗(yàn)。用Kappa檢驗(yàn)計(jì)算發(fā)光法試劑與ELISA試劑的診斷一致性，按照Kappa系數(shù)大小以極差、微弱、弱、中度、高度和極強(qiáng)對(duì)診斷一致性強(qiáng)度進(jìn)行判斷，極差：Kappa系數(shù)<0；微弱：Kappa系數(shù)0～0.2；弱：Kappa系數(shù)0.21～0.4；中度：Kappa系數(shù)0.41～0.6；高度：Kappa系數(shù)0.61～0.8；極強(qiáng)：Kappa系數(shù)0.81～1.0[2]。

2 結(jié)果

2.1 ELISA和CLIA方法檢測(cè)丙型肝炎病毒抗體結(jié)果的符合性

結(jié)果顯示使用傳統(tǒng)ELISA試劑與化學(xué)發(fā)光方法試劑檢測(cè)抗HCV抗體的診斷一致性較高，臨床檢測(cè)中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表1。

表1 兩種方法檢測(cè)抗HCV抗體結(jié)果的符合性

注： 陽(yáng)性符合率：87.7%，陰性符合率：91.3%，總符合率：90.0%，χ2檢驗(yàn)：χ2=280.000，P=0.000。

2.2 化學(xué)發(fā)光法抗-HCV初檢陽(yáng)性標(biāo)本的RIBA確認(rèn)試驗(yàn)結(jié)果

見(jiàn)表2。

表2 化學(xué)發(fā)光法抗-HCV初檢陽(yáng)性標(biāo)本的RIBA確認(rèn)試驗(yàn)結(jié)果

3 討論

目前廣泛使用的第三代HCV抗體ELISA試劑增加了HCV Ns5區(qū)表達(dá)的蛋白作為抗原，大增加了靈敏度和特異性。但臨床使用該類試劑篩檢HCV感染者，仍存在一定數(shù)量的假陽(yáng)性和假陰性結(jié)果[3]，特別是在HCV低流行率人群中，如無(wú)償獻(xiàn)血者，假陽(yáng)性問(wèn)題一直比較突出。此外，國(guó)內(nèi)常用的HCV抗體酶免試劑皆沒(méi)有灰區(qū)的設(shè)定，試劑盒cutoff值計(jì)算方法各廠家也都不一致，導(dǎo)致國(guó)產(chǎn)試劑盒之間的檢測(cè)性能存在較大的異質(zhì)性，亦是假陽(yáng)性比較多的原因 [4-5]。

在臨床實(shí)驗(yàn)室中檢驗(yàn)中，需先對(duì)使用的方法和程程序進(jìn)行評(píng)估，確定其符合要求后才可正式使用。Kappa檢驗(yàn)是用于分析計(jì)數(shù)資料和等級(jí)分組資料一致性檢驗(yàn)中的一種方法，在肝炎病毒血清標(biāo)志物等二分變量（陰性、陽(yáng)性）檢測(cè)中，一般選擇使用使用檢驗(yàn)法，以判斷不同方法學(xué)是否存在一致性及相關(guān)程度。該文結(jié)果顯示化學(xué)發(fā)光法與酶聯(lián)免疫法在丙型肝炎病毒抗體檢測(cè)中的Kappa系數(shù)達(dá)到0.76，具有高度一致性，與同類研究報(bào)道結(jié)果基本一致[4]，結(jié)果表明兩種試劑均可用于血源篩查、臨床術(shù)前初篩。ELISA試劑的特異性較好，發(fā)光試劑的靈敏度較高，兩種試劑均存在漏檢現(xiàn)象，實(shí)際工作中如能聯(lián)合應(yīng)用可提高檢出率[6]。

另外該研究參照美國(guó)CDC丙型肝炎實(shí)驗(yàn)導(dǎo)則[7]，使用S/CO.≥8可判斷為陽(yáng)性作為分組依據(jù)，對(duì)發(fā)光法初篩陽(yáng)性的標(biāo)本再進(jìn)行RIBA確認(rèn)試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)低值組的陽(yáng)性率為24%，而高值組的陽(yáng)性率為88%，提示中國(guó)人群的抗HCV陽(yáng)性預(yù)測(cè)值與美國(guó)有一定的差異，目前的抗-HCV 診斷試劑盒均采用基因工程或合成多肽抗原，而由于HCV基因易發(fā)生變異，其基因呈現(xiàn)高度異質(zhì)性，編碼氨基酸序列明顯改變，可引起抗原性的改變，現(xiàn)階段試劑的檢測(cè)抗原多為2型抗原，而以往的研究發(fā)現(xiàn)，我國(guó)HCV患者多為1型，因此當(dāng)前的試劑并不適用于中國(guó)所有地區(qū)[4]。提示實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)抗HCV試劑的S/CO.比值設(shè)定進(jìn)行評(píng)估，使用在所有人群中經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的能夠預(yù)測(cè)確認(rèn)試驗(yàn)≥95%陽(yáng)性率的S/CO.比值作為是否進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn)的依據(jù)，并設(shè)立一定范圍內(nèi)的灰區(qū)，以達(dá)到靈敏度和特異性的最佳平衡[8]，該研究還提示對(duì)初檢呈弱反應(yīng)者有必要進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn)，跟蹤觀察。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì)，中華醫(yī)學(xué)會(huì)傳染病與寄生蟲(chóng)病學(xué)分學(xué).丙型肝炎防治指南[Z]，2004.

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（收稿日期：2014-04-05）endprint

在臨床實(shí)驗(yàn)室中檢驗(yàn)中，需先對(duì)使用的方法和程程序進(jìn)行評(píng)估，確定其符合要求后才可正式使用。Kappa檢驗(yàn)是用于分析計(jì)數(shù)資料和等級(jí)分組資料一致性檢驗(yàn)中的一種方法，在肝炎病毒血清標(biāo)志物等二分變量（陰性、陽(yáng)性）檢測(cè)中，一般選擇使用使用檢驗(yàn)法，以判斷不同方法學(xué)是否存在一致性及相關(guān)程度。該文結(jié)果顯示化學(xué)發(fā)光法與酶聯(lián)免疫法在丙型肝炎病毒抗體檢測(cè)中的Kappa系數(shù)達(dá)到0.76，具有高度一致性，與同類研究報(bào)道結(jié)果基本一致[4]，結(jié)果表明兩種試劑均可用于血源篩查、臨床術(shù)前初篩。ELISA試劑的特異性較好，發(fā)光試劑的靈敏度較高，兩種試劑均存在漏檢現(xiàn)象，實(shí)際工作中如能聯(lián)合應(yīng)用可提高檢出率[6]。

另外該研究參照美國(guó)CDC丙型肝炎實(shí)驗(yàn)導(dǎo)則[7]，使用S/CO.≥8可判斷為陽(yáng)性作為分組依據(jù)，對(duì)發(fā)光法初篩陽(yáng)性的標(biāo)本再進(jìn)行RIBA確認(rèn)試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)低值組的陽(yáng)性率為24%，而高值組的陽(yáng)性率為88%，提示中國(guó)人群的抗HCV陽(yáng)性預(yù)測(cè)值與美國(guó)有一定的差異，目前的抗-HCV 診斷試劑盒均采用基因工程或合成多肽抗原，而由于HCV基因易發(fā)生變異，其基因呈現(xiàn)高度異質(zhì)性，編碼氨基酸序列明顯改變，可引起抗原性的改變，現(xiàn)階段試劑的檢測(cè)抗原多為2型抗原，而以往的研究發(fā)現(xiàn)，我國(guó)HCV患者多為1型，因此當(dāng)前的試劑并不適用于中國(guó)所有地區(qū)[4]。提示實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)抗HCV試劑的S/CO.比值設(shè)定進(jìn)行評(píng)估，使用在所有人群中經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的能夠預(yù)測(cè)確認(rèn)試驗(yàn)≥95%陽(yáng)性率的S/CO.比值作為是否進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn)的依據(jù)，并設(shè)立一定范圍內(nèi)的灰區(qū)，以達(dá)到靈敏度和特異性的最佳平衡[8]，該研究還提示對(duì)初檢呈弱反應(yīng)者有必要進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn)，跟蹤觀察。

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在臨床實(shí)驗(yàn)室中檢驗(yàn)中，需先對(duì)使用的方法和程程序進(jìn)行評(píng)估，確定其符合要求后才可正式使用。Kappa檢驗(yàn)是用于分析計(jì)數(shù)資料和等級(jí)分組資料一致性檢驗(yàn)中的一種方法，在肝炎病毒血清標(biāo)志物等二分變量（陰性、陽(yáng)性）檢測(cè)中，一般選擇使用使用檢驗(yàn)法，以判斷不同方法學(xué)是否存在一致性及相關(guān)程度。該文結(jié)果顯示化學(xué)發(fā)光法與酶聯(lián)免疫法在丙型肝炎病毒抗體檢測(cè)中的Kappa系數(shù)達(dá)到0.76，具有高度一致性，與同類研究報(bào)道結(jié)果基本一致[4]，結(jié)果表明兩種試劑均可用于血源篩查、臨床術(shù)前初篩。ELISA試劑的特異性較好，發(fā)光試劑的靈敏度較高，兩種試劑均存在漏檢現(xiàn)象，實(shí)際工作中如能聯(lián)合應(yīng)用可提高檢出率[6]。

另外該研究參照美國(guó)CDC丙型肝炎實(shí)驗(yàn)導(dǎo)則[7]，使用S/CO.≥8可判斷為陽(yáng)性作為分組依據(jù)，對(duì)發(fā)光法初篩陽(yáng)性的標(biāo)本再進(jìn)行RIBA確認(rèn)試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)低值組的陽(yáng)性率為24%，而高值組的陽(yáng)性率為88%，提示中國(guó)人群的抗HCV陽(yáng)性預(yù)測(cè)值與美國(guó)有一定的差異，目前的抗-HCV 診斷試劑盒均采用基因工程或合成多肽抗原，而由于HCV基因易發(fā)生變異，其基因呈現(xiàn)高度異質(zhì)性，編碼氨基酸序列明顯改變，可引起抗原性的改變，現(xiàn)階段試劑的檢測(cè)抗原多為2型抗原，而以往的研究發(fā)現(xiàn)，我國(guó)HCV患者多為1型，因此當(dāng)前的試劑并不適用于中國(guó)所有地區(qū)[4]。提示實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)抗HCV試劑的S/CO.比值設(shè)定進(jìn)行評(píng)估，使用在所有人群中經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的能夠預(yù)測(cè)確認(rèn)試驗(yàn)≥95%陽(yáng)性率的S/CO.比值作為是否進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn)的依據(jù)，并設(shè)立一定范圍內(nèi)的灰區(qū)，以達(dá)到靈敏度和特異性的最佳平衡[8]，該研究還提示對(duì)初檢呈弱反應(yīng)者有必要進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn)，跟蹤觀察。

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